توليد نموذج فأر للملاريا الدماغية التجريبية باستخدام البوغات المشتقة من البعوض المضيف

ابدأ بأنبوب يحتوي على الغدد اللعابية من إناث البعوض المصابة بالمتصورة البرغي — وهو طفيلي مسبب للملاريا.

يعطل الغدد ميكانيكيا ، ويطلق البوغات - وهو شكل معدي من الطفيلي في الوسط.

بيليه كسور الغدة والحطام. اجمع المادة الطافية المحتوية على البوغات وحقنها في وريد ذيل الفأر المقيد.

تنتقل البوغات المحقونة عبر مجرى الدم وتصل إلى الكبد ، حيث تصيب خلايا الكبد وتتكاثر ، وتشكل ميروزويت - وهو شكل غازي من الطفيلي.

بمرور الوقت ، تطلق خلايا الكبد ميروزويت في مجرى الدم ، وتغزو خلايا الدم الحمراء ، أو كرات الدم الحمراء.

داخل كرات الدم الحمراء ، تتكاثر المروزويت لاجنسيا ، وتتطور إلى شكل ناضج وتعبر عن مستضدات مشتقة من الطفيليات على سطح كرات الدم الحمراء.

ترتبط هذه المستضدات بالمستقبلات البطانية ، بما في ذلك تلك الموجودة في الأوعية الدموية في الدماغ ، مما يؤدي إلى عزل كرات الدم الحمراء المصابة وغير المصابة.

يؤدي هذا التراكم غير الطبيعي لكرات الدم الحمراء إلى تعطيل الحاجز الدموي الدماغي ، مما يتسبب في تراكم السوائل في حمة الدماغ وتطوير الملاريا الدماغية في الفأر.

ابدأ بجمع إناث البعوض من قفصها بعد 17 إلى 22 يوما من وجبة الدم. استخدم الملقط لوضع 3 إلى 4 بعوض على شريحة زجاجية مغطاة بقطرة من وسط RPMI البارد. ثم ضع الشريحة تحت المجهر.

قم بتمديد البعوض بعناية بين الرأس والجسم باستخدام ملقط ، واستخدم حقنة وإبرة لعزل الغدة اللعابية. بعد ذلك ، اجمع الغدد اللعابية من الشريحة الزجاجية عن طريق امتصاصها بماصة زجاجية ، ونقلها إلى أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 ملليلتر. بعد ذلك ، استخدم عصا بلاستيكية صغيرة لتحطيم الغدد اللعابية المعزولة داخل أنبوب الطرد المركزي لمدة ثلاث دقائق من أجل عزل البوغات من أنسجة الغدد اللعابية.

جهاز طرد مركزي لمدة ثلاث دقائق عند 1,000 مرة جم في 4 درجات مئوية لتنقية البوغات من الأنسجة المتبقية. ماصة المادة الطافية ، التي تحتوي على الأبواغ ، إلى أنبوب طرد مركزي جديد ، وحساب البوغات المنقاة في مقياس كثافة الدم Neubauer. تظهر Sporozoites حركة نموذجية عكس اتجاه عقارب الساعة.

بعد ذلك ، اضبط تركيز البوغات المنقاة إلى 10,000 لكل مليلتر عن طريق إضافة محلول ملحي مخزن بالفوسفات. أخيرا ، ضع فأرة C57BL6 في مصفاة ، وضع ذيله في ماء دافئ لتصور وريد الذيل بشكل أفضل. بعد ذلك ، قم بحقن ما مجموعه 1,000 من البوغات ، أو 0.1 ملليلتر ، في وريد الذيل لبدء العدوى.