الكشف عن بروتينات البريون غير الطبيعية في أنسجة المخ باستخدام الكيمياء المناعية

خذ شريحة بها قسم ثابت لدماغ الثدييات يظهر مجاميع بروتين البريون غير المطوية.

عالج القسم بحمض الفورميك لتقليل عدوى مجاميع البريون.

عالج بمخزن مؤقت حمضي داخل غرفة الضغط الرطبة. تكسر الحرارة العالية ودرجة الحموضة الحمضية روابط البروتين المتشابكة الناجمة عن التثبيت ، مما يكشف عن حواتم المستضد.

اغمر في بيروكسيد الهيدروجين لتعطيل البيروكسيديز الداخلي ، مما يمنع تلطيخ الخلفية غير المرغوب فيه.

ضع الشريحة في لوحة غطاء وأضف عازلة للحفاظ على ترطيب الأنسجة.

أدخل محلول مانع يمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.

أضف جسما مضادا أوليا خاصا بمجاميع البريون.

قم بإزالة جزيئات الأجسام المضادة غير المرتبطة. إدخال جسم مضاد ثانوي بيوتينيل يرتبط بالجسم المضاد الأساسي.

قم بإزالة جزيئات الأجسام المضادة غير المرتبطة. أضف إنزيم بيروكسيداز البيوتينيل المركب مع أفيدين الذي يرتبط بالبيوتين على الجسم المضاد الثانوي.

أضف ركيزة كروموجينيك، يتأكسد منها البيروكسيديز في منتج ملون.

باستخدام المجهر ، راقب الركام الملطخ.

اغمر أقسام الأنسجة بعناية في حمض الفورميك بنسبة 98٪ في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. اشطف الأقسام بماء الصنبور لمدة 5 دقائق ، متبوعا بالشطف مرتين بالماء المقطر. استخدم حاوية تلطيخ من الفولاذ المقاوم للصدأ في غرفة الضغط مملوءة ب 500 مل من الماء المقطر للمعالجة المسبقة للعازلة 10 مللي مولار للسترات ع