تصوير وقياس مجاميع البروتين في أدمغة ذبابة الفاكهة المعدلة وراثيا
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 5:47 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بأدمغة ذبابة الفاكهة المعدلة وراثيا. تعبر هذه الأدمغة عن بروتين متحور أحمر يحمل علامة فلورية في الخلايا العصبية يمكن أن ينتشر إلى الخلية الدبقية المحيطة ، مما يعبر عن البروتين الطبيعي الأصفر الموسوم بالفلورسنت ، مما يتسبب في تجميعها.
أضف حلا مثبتا يحافظ على سلامة الخلوية.
قم بإزالة المثبت واغسله بمخزن مؤقت.
أضف كاشفا مضادا للبهتان واحتضنه لمنع تلاشي إشارات الفلورسنت.
انقل الأدمغة إلى شريحة وقم بإزالة السوائل الزائدة.
اسمح للأدمغة بالالتصاق بالشريحة.
باستخدام قطع صغيرة من الغطاء كفواصل ، ضع غطاء فوقها. أضف الكاشف المضاد للبهتان وأغلقه.
تحت المجهر متحد البؤر ، التقط صورا باستخدام أطوال موجية مختلفة للإثارة للتألق الأحمر والأصفر.
باستخدام برنامج تحليل الصور ، حدد مجاميع البروتين.
يشيرالتوطين المشترك للتألق الأحمر والأصفر إلى انتشار البروتينات الطافرة.
بمجرد تشريحجميع الأدمغة ، انقل أنبوب التجميع إلى مغذي في درجة حرارة الغرفة وهزها لمدة 5 دقائق تقريبا. بعد فترة التثبيت ، قم بإزالة غالبية محلول التثبيت باستخدام ماصة P1000 وتخلص منها ، مع الحرص الشديد على ترك الأدمغة في الأنابيب. هذا يتطلب شفطا لطيفا ومراقبة دقيقة.
بعد ذلك ، أضف 1 مليلتر من PBST الطازج إلى الأدمغة. قم بتغطية الأنبوب واتركه يتأرجح على المغذي لمدة دقيقة تقريبا لغسل المثبت المتبقي. ثم قم بإزالة المحلول وكرر خطوة الغس
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية