القبض على خلية باستخدام جهاز ميكروفلويديك

يتم تعبئة الأجهزة كما أعددناها في مجموعات من 10 أو 20 ، وعند وصولها ، يتم شحنها باردة في صندوق وتحتوي المجموعة على جميع المكونات التي تحتاج إلى تشغيلها. التجربة في المجموعة هي عبارة عن حزمة تحتوي على جميع المحاقن والمخازن المؤقتة ، والتي يمكن أن تبقى في درجة حرارة الغرفة. هناك أيضا نسخة من البروتوكول سنتبعها في هذه التجربة.

يوجد أيضا صندوق مبرد يحتوي على الأجهزة الفعلية وجميع المخازن المؤقتة قيد التشغيل التي تحتاج إلى التبريد. عادة ، يتم تعبئة المجموعات في مجموعات من 10 أو 20. عندما لا تكون قيد الاستخدام ، يجب تبريد المجموعات.

يتم تصنيف كل حقنة وكل مكون من مكونات المجموعة بعناية وتتوافق الملصقات مع الجدول الموجود في البروتوكول الذي نتبعه. لذلك لا يوجد غموض بشأن المحقنة أو مكون المجموعة الذي يجب استخدامه في الخطوات الفردية. بعد تفريغ الأجهزة ووضعها في خزانة السلامة البيولوجية ، سنقوم بإجراء عزل العدلات وتحللها للتطبيقات الجينومية النهائية لأننا سنكون كذلك ، لأن إنقاذ الحياة الذي نحصل عليه سيتم استخدامه للعزل أو ، أو سنقوم باستخراج الحمض النووي الريبي من محللة الخلية.

لهذا السبب ، نريد التأكد من أن منطقتنا نظيفة ، ليس فقط بالمعنى المعقم ، ولكن أيضا نظيفة من أي RNAs موجودة عادة في البيئة. لذلك من المهم جدا مسح كل منطقتك وأجهزتك بالمحلول الذي يدمر الحمض النووي الريبي. لذلك عادة ما نقوم بمسح جميع أدواتنا وأسطح عملنا باستخدام RNA SAP أو RNAs بعيدا ، والتي يمكنك الحصول عليها من عدد من الشركات المصنعة.

الجهاز معبأ في كيس مانع للتسرب حراري. كل جهاز مغلق وترميز باركود هذا الباركود. يجب عليك تدوين هذا الرمز الشريطي إذا كنت تعمل مع أي عينات سريرية.

لذلك يتم فك الجهاز ، ويتم خلع الغطاء ووضعه في جهاز مشعب القابضة للمضخة. عينة الدم التي نستخدمها هي عينة من الدم الكامل. سنقوم بتدفقها من خلال حقنة BD القياسية التي يبلغ طولها مل واحد ، وهذا يسمى حقنة واحدة.

عادة ما يتم القيام به هو إزالة المحقنة من العبوة ويتم إزالة الغطاء بعناية من أنبوب الدم. وما تفعله هو إسقاط 700 ميكرولتر أو 0.7 مل من الدم وحقن نصف ذلك أو 350 ميكرولتر في أنبوب سعة 1.5 مل. شكرا. بهذه الطريقة ، يمكن تمرير دمك لمزيد من المعالجة.

يمكن أن ينتقل أنبوب الدم الخاص بك ومع ذلك لا يزال لديك المزيد من الدم المتبقي في حالة تعطل الجهاز. لذا ما سنفعله الآن هو أننا سنقوم بتحميل المحقنة التي تحتوي على دم ، على هذه الإبرة ، التي يتم توصيلها بقطعة من الأنبوب بهذا الجهاز. نريد أن نكون شديدين مع جهاز عزل الموائع الدقيقة.

نريد أن نكون حريصين جدا على عدم إدخال أي فقاعات هواء في الجهاز أو في الجهاز أو أو سيتعطل الجهاز. لذلك عادة ما نفعله هو أن نأخذ المحقنة ونضغط على المكبس ونضيف السائل إلى السطح العلوي للجهاز ، ونتأكد من أنه متماسك بالكامل قبل إخراج كل السائل. نتوقف ونزيل جسم المحقنة بعناية من الإبرة ونملأ بشكل أساسي طرف الإبرة أو موصل إغراء الإبرة بالمخزن المؤقت المتبقي الموجود في هذه المحقنة.

نحن نتخلص من ذلك. سنقوم بعد ذلك بأخذ حقنتنا بالدم وسنقوم بإدخالها في مركز الإغراء هذا. الحرص على عدم إراقة الدم والحرص على عدم إدخال أي فقاعات هواء.

ابحث عن الأفضل لاستخدام كيمو يحمل جسم المحقنة والأنبوب في حالة إراقة أي دم. مرة واحدة ، بمجرد توصيل المحقنة بغلاف الأنبوب أو الإبرة ، نعطيها بضع صنابير حادة لإزالة أي فقاعات هواء ، والتي قد تكون في الموصل. ثم يتم تحميل هذه المحقنة على مضخة الحقنة ثم يتم تثبيتها بمسمار القفل.

يتم تشغيل مضخة الحقنة وهي بالفعل معدة مسبقا لظروف التدفق لدينا. سنقوم بتدفق هذا الدم عبر الجهاز بمعدل 30 ميكرولتر في الدقيقة. بمجرد تحميل جسم المحقنة في مضخة الحقنة ، سنقوم بالضغط على الزر الموجود على ذراع المكبس المتحرك وتحريكه لأسفل حتى يلامس الجزء العلوي من المكبس ويبدأ في دفع السائل للخارج من خلال طرف هذا.

إنه طرف حاد ، إبرة من الفولاذ المقاوم للصدأ. بمجرد أن نعلم أن النظام مهيأ ، سنضغط على تشغيل. لبدء تدفق الدم ، تضغط على إيقاف لإيقافه ثم تأخذ أنبوب طرد مركزي نظيف 1.5 مل أو أنبوب مصدات وسنقوم بفصله بعناية.

افصل واحدا فقط ، وافصل الأنبوب من منفذ واحد من الجهاز. بمجرد فصل هذا الأنبوب ، سنقوم بإدخاله في أنبوب الرفارف 1.5 مل. سنضغط على تشغيل لبدء تدفق الدم مرة أخرى.

وعندما نرى قطرة من شكل الدم ، نوقف المضخة وندخلها في المدخل الذي فتحناه للتو في الجهاز. سنضغط على تشغيل لبدء تدفق الدم وسنضبط مؤقتا لمدة خمس دقائق. نريد التأكد من أن الدم يملأ جميع الغرف بالتساوي وأنه لا توجد فقاعات هواء واضحة في الجهاز.

إذا كانت هناك فقاعات هواء تمنع التدفق إلى أي من الغرف ، فيمكنك أخذ زوج من الملقط وتشغيلها على طول القنوات الصغيرة ، والتي تؤدي إلى غرف الالتقاط أو القنوات الصغيرة التي تخرج من غرف الالتقاط. يمتلئ هذا الجهاز بشكل جيد ، لذلك بعد خمس دقائق ، تضغط على إيقاف على مضخة الحقنة لإيقاف تدفق الدم ، وتقوم بفك المشبك للحقنة وإخراجه من حامل مضخة المحقنة. ثم سنستخدم المحقنة رقم ثلاثة ، المحملة ب PBS الخالي من النوكلياز ، وسنستخدمه ، وسنتأكد مرة أخرى من أن سطح الجهاز مرتبط لتجنب أي فقاعات هواء ، وسنضغط على المحقنة لعمل أي منها ، وتأكد من وجود أي فقاعات هواء في الجزء العلوي من جسم المحقنة.

بفك الذراع الموجود على مضخة الحقنة وأدخل حقنة المطحنة الثلاثة في المضخة. اربطه لأسفل ثم ادفع المكبس لأسفل حتى يلامس مكبس المحقنة. لقد ضغطنا على تشغيل وننتظر السائل لتجهيز الجهاز وننتظر رؤية قطرة عند طرف إبرة الفولاذ المقاوم للصدأ.

عندما ترى قطرة تتشكل ، فإنك توقف المضخة. سنقوم بإخراج الدم ، الطرف المصنوع من الفولاذ المقاوم للصدأ الذي يحتوي على الدم. سنقوم بإدخال مخزن الغسيل المؤقت والضغط على تشغيل.

وسنترك هذا يستمر لمدة خمس دقائق. ويجب أن تأخذ مسحا نظيفا وتمسح أي كمية صغيرة من الدم ، والتي قد تكون عند المدخل أو المخرج بعد خمس دقائق من تشغيل مخزن الغسيل عبر الجهاز ، يجب تنظيف الجهاز تماما من أي دم ويمكنك أن ترى أنه في الأساس لن يكون هناك أي دم أحمر متبقي في الجهاز ، سيبدو الجهاز واضحا. إذن ما سنفعله هو بعد الخمس دقائق ، سنوقف تشغيل مخزن الغسيل المؤقت.

ومرة أخرى ، سنقوم بإزالة المحقنة من مضخة الحقنة. سنقوم بتغطية أنبوب الطرد المركزي الصغير سعة 1.5 مل ، مباشرة على أنبوب المخرج المرن. وسنقوم برفع الأنبوب بعناية ، أنبوب الطرد المركزي الصغير ، وسحب أنابيب النفايات من الجهاز.

سنقوم برمي ذلك بعيدا في حاوية بيولوجية. يوجد في المجموعة أنبوب مخرج جديد ، مصنوع بالفعل من التفلون. يحتوي مرة أخرى على طرف من الفولاذ المقاوم للصدأ.

سنقوم باستبدال أنابيب المخرج القديمة بأنبوب المخرج الجديد هذا. سنأخذ أنبوب المخرج هذا وسنحاول ثنيه حول شكل U أو V. ثم أيضا مع المجموعة هو عمود تقطيع كايا ، هذا يقص الحمض النووي ويجانس بشكل أساسي حياة الخلية الخاصة بك.

لذلك سنقوم بفتح الغطاء الأرجواني لعمود التقطيع ووضع أنبوب المخرج في عمود Kay Shredder. سنقوم بإخراج المحقنة رقم اثنين من المجموعة ، والتي تقول ، بالنسبة ل RLT ، سنستخدمها. إنها حقنة قياسية بطول ميل واحد مع طرف حاد عيار 22 ، من الفولاذ المقاوم للصدأ.

سنستخدم ذلك لحقن 350 ميكرولتر من RLT القياسي من kyogen في الجهاز. نظرا لأن الجهاز يحتوي على حجم ميت حوالي 50 ميكرولتر ، فإن ما نريد القيام به هو أننا نريد حقن RLT ، ولكن خلف RLT ، نريد حقن سدادة من الهواء ، لتحرير هذا الحجم الميت للجهاز في عمود آلة تقطيع chi. لذا فإن الطريقة التي سنفعل بها ذلك هي أننا سنأخذ المحقنة ، وسنقوم بسحب 350 ميكرولتر من الهواء ثم نتبعه 350 ميكرولتر أو 0.35 مل من RLT وأصبح RLT الآن في قاع المحقنة.

قاوم إغراء قلب المحقنة وحقن الهواء. الهواء موجود للتأكد من أننا نحصل على كل RLT في عمود التقطيع Kay الخاص بنا. سنقوم بسحب الأنبوب من مخزن الغسيل.

سنقوم بإدخال حقنتنا مع RLT وسنقوم بحقن RLT ببطء في الجهاز على مدار 30 ثانية تقريبا ، مع التأكد من أن أنبوب المخرج يخرج نفاياته في عمود آلة التقطيع. بمجرد أن يبدأ الهواء في الحقن في الجهاز ، تضغط لأسفل على البرمر وتنتظر حتى يتم إطلاق كل السوائل في عمود Kay Shredder. نحن نحصل على عمود التقطيع كاي وندوره على fuge microcenter بتوازن عند 15 ، 000 دورة في الدقيقة أو الحد الأقصى لعدد الدورات في الدقيقة على فتيل صغير على منضدة لمدة دقيقتين.

لذلك بعد تدوير العمود لمدة دقيقتين ، سنقوم بإخراج العينة منه ، والتي هي الآن في RLT وسنقوم بوضعها في إحدى قوارير التبريد ذات الغطاء الأرجواني المرفقة. إذا كنت تعمل مع عينة سريرية ، فقم بأخذ عينات من قوارير التبريد هذه ، وستقوم بتسميتها في بداية التجربة. ها هو المحللة في قارورة التبريد.

يتم وضع قارورة التبريد هذه على الفور في فريزر 80 درجة تحت الصفر AC C وتخزينها للشحن أو استخراج الحمض النووي الريبي لاحقا. لذلك هذا بروتوكول بديل لعزل العدلات. بدلا من تحلل الخلايا باستخدام المخزن المؤقت RLT ، سنقوم بتلطيخها بصبغة نسيجية قياسية.

وصمة عار. لذلك نأخذ الجهاز المختوم من الكيس ونقوم بفكه مرة أخرى ، وندون رقم الدفعة على الجهاز ونضع طبق بتري. في حامل طبق بتري.

سنأخذ المحقنة التي يبلغ طولها مل واحد من حقنة الكيس رقم واحد ، وسنقوم بتحميلها ب 700 ميكرولتر من الدم وحقن نصفها 350 ميكرولتر في أنبوب DPH end. سنضع ذلك جانبا. خذ حقنة أربعة ، والتي تحتوي على الأنبوب الذي سنستخدمه للاختيار ، حقن الدم في الجهاز.

الذهاب إلى عقد قاعدة الإبرة من طرف الأنبوب بطريقة كيميائية. انزع جسم المحقنة واملأ الإغراء. سيقوم المحول بتخزين تلك المحقنة والتخلص منها.

سنقوم بإدخال الدم الذي يحتوي على حقنة في الإبرة باستخدام المناديل الكيميائية لجمع أي تداعيات. سنضغط على المحقنة لإزالة أي فقاعات هواء عند الوصلة بين الإبرة وجسم المحقنة. سنقوم بتحميل المحقنة في مضخة الحقنة ، وسنقوم بتجهيز الأنبوب عن طريق الضغط لأسفل على الذراع المتحرك لمضخة الحقنة.

سنقوم بفصل الأنبوب عن أحد منافذ الجهاز ، جهاز الالتقاط ، ووضعه في أنبوب 1.5 مل. وبعد ذلك سنبدأ في تدفق الدم عن طريق الضغط على مضخة الحقنة. سننتظر حتى تتشكل قطرة دم عند طرف الفولاذ المقاوم للصدأ.

بمجرد أن تتشكل القطرة ، تضغط على إيقاف ربت من هذا الدم ، أدخله في الجهاز واضغط على تشغيل. الآن قمنا بتعيين مؤقت لمدة خمس دقائق. حسنا ، بعد التدفق عبر الجهاز لمدة خمس دقائق ، اضغط على إيقاف على مضخة الحقنة وحرر المحقنة.

وسنقوم باستبدال تلك المحقنة بحقنة ثلاثة مل تحتوي على مخزن الغسيل الخاص بنا ، وهو عبارة عن XPBS واحد فقط. مرة أخرى ، نريد التأكد من أن الجزء العلوي من الجهاز متزوج ومن ثم سنقوم بإزالة طرف الإبرة الذي يحتوي على الدم أو بالإضافة إلى التشغيل. ابدأ في تجهيز الجهاز.

سنقوم بإلقاء أشكال القطرات ، وندخلها في الجهاز ونضغط على تشغيل ربت أي دم عند المدخل أو أنبوب الخروج وسنترك ذلك يتدفق لمدة خمس دقائق بعد خطوة الغسيل. مرة أخرى ، سنقوم بإيقاف مضخة الحقنة وإزالة المحقنة من حامل المضخة. للقيام بالحفاظ على GIM القياسي ، سنقوم أولا بإصلاح الخلايا وتجفيفها باستخدام 100٪ من الميثانول.

لذلك لدينا حقنة ، حقنة سعة ثلاثة مل محملة مسبقا بالميثانول. مرة أخرى ، سنقوم بتجهيز المحقنة ، والتأكد من تدفق الميثانول ، وإيقاف مضخة الحقنة ، وإدخالها في الجهاز ، والضغط على تشغيل. سنقوم بإصلاحها في محلول الميثانول هذا لمدة دقيقتين إلى أربع دقائق.

لذلك بعد دقيقتين إلى أربع دقائق من التثبيت والميثانول ، نوقف المضخة ، ونطلق المحقنة بالميثانول ، وهنا سنقوم بتحميل حقنة ، حقنة بسعة ثلاثة ميل تحتوي على حقنة eem تحافظ على eem القياسية من Sigma المخففة من واحد إلى خمسة في الماء منزوع الأيونات. بعد أن قمنا بالتخفيف ، قمنا بتحميلنا في المحقنة وفي نهاية المحقنة نعلق مرشحا 0.8 ميكرون لتصفية أي جزيئات ستدخل ، والتي قد تؤدي في النهاية إلى انسداد الجهاز. وصمة عار لمدة خمس إلى 10 دقائق.

وبعد ذلك سنشطف بماء Deion i. لذلك بعد خمس إلى 10 دقائق من التلوين ، سنقوم بإيقاف مضخة الحقنة وسنقوم بتبديل المحقنة بمخزن التلوين مع المحقنة التي تحتوي على ماء منزوع الأيونات ، وسنقوم بغسلها بشكل أساسي حتى نرى اللون الأزرق ل SAI قد تم غسله من الجهاز. بمجرد شطف الزيادة في الجيل من الجهاز ، نوقف محلول الغسيل.

ثم ما سنفعله هو أننا سنقوم بإزالة حقنة الماء من المدخل. ثم سنأخذ أنبوب مخرج الجهاز. سنمسك بهذا الأنبوب في النهاية بملاقطنا.

هذا أنبوب تيجون مرن وسنقوم بإدخاله مرة أخرى في مدخل الجهاز. هذا يغلق الجهاز ويحافظ على رطوبة الخلايا ومورفولوجيتها سليمة. الآن سيعرض زميلي في العمل ، الدكتور جون هونغ تشانغ ، بروتوكولا بديلا لعزل الخلايا الليمفاوية الأربعة الإيجابية ، متبوعا بتلطيخ الفلورسنت المناعي مباشرة داخل جهاز الموائع الدقيقة.

لذلك اسمي شونغ هونغ واليوم سأوضح لكم تلطيخ الخلايا في جهاز الموائع الدقيقة في هذه المرحلة يمكن أن أوضح لك بالفعل كيفية استخدام جهاز عزل التقارب المناعي الصغير لعزل خلايا الدم على وجه التحديد عن الدم الكامل غير المسبوق. لغرضه ، يريد قمل الخلايا والحصول على محتوى البروتين والحمض النووي من تلك الخلايا المعزولة. حسنا ، لغرض بحثي ، أنا مهتم بالحصول على الخلايا ثم الحصول على عدد الخلايا ، على سبيل المثال ، للحصول على عدد خلايا CD الأربع من الدم الكامل ، واستخدامه كمؤشر لأغراض التشخيص.

لذا فإن الجهاز الذي يستخدم يشبه إلى حد بعيد جهاز كين. إنه مصنوع من غرفة مستقيمة P-D-M-S-A. تختلف الهندسة قليلا ، وبالتالي فإن معلمات التشغيل مختلفة قليلا بينما بشكل عام يكون إجراء التشغيل العام متشابها جدا.

لذلك سأتخطى جميع خطوات التقاط الخلايا وشطفها وأقفز مباشرة إلى خطوة تلطيخ الخلايا في إجراءات عد الخلايا. لذلك لدي هنا جهاز يحتوي بالفعل على نصف خلايا تم التقاطها من الدم الكامل والجهاز تم شطفه بالفعل باستخدام PBS. لذا فإن الخلايا الصادرة قد غسلت بالفعل من الجهاز وأعددت مسبقا خليطا من الأجسام المضادة يستخدم على وجه التحديد لتسمية الخلايا المعزولة في الجهاز.

لذلك تم تحسين تركيز الجسم المضاد الذي استخدمناه هنا ، لتلوين الخلايا بكثافة فلورية عالية جدا تحت المجهر الفلوري. لذا فإن الإجراء بسيط تماما. نقوم بتحميل المحقنة المملوءة بمحلول الجسم المضاد على مضخة الحقنة ثم نتأكد من ضبط معدل التدفق على المعلمات الصحيحة التي نحتاجها.

وبعد ذلك سنبدأ مضخة الحقنة ، ونراقب نهاية الأنبوب ، ونتأكد من أن المحلول يخرج بالفعل حتى لا يكون هناك المزيد من الفقاعة في الأنبوب. وبعد ذلك يمكننا توصيل الأنبوب بجهاز الموائع الدقيقة الذي التقطناه خلايا. حتى الآن يتدفق الجسم المضاد إلى الجهاز لتلطيخ الخلايا التي عزلنا فيها ، في الجهاز ، معدل التدفق هنا ، أنا أستخدم خمسة ميكرولتر في الدقيقة ، ولكن اعتمادا على هندسة الجهاز هناك ، قد تكون هناك معلمات تدفق مختلفة تريد استخدامها لغرضك.

وسنتدفق محلول الجسم المضاد لمدة خمس دقائق ، وهو ما يكفي لحجم كاف لاستبدال كل المحاليل داخل قناة micropho. لذلك بعد حقن الأجسام المضادة ، سنوقف التدفق. لذلك نحن نطفو في الجسم المضاد بمعدل خمسة ميكرولتر في الدقيقة لمدة خمس دقائق لاستبدال كل المحلول داخل القناة الدقيقة.

بعد ذلك نوقف التدفق ونترك الجهاز يحتضن ودرجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. لذلك يجب أن يتم ذلك في الظلام حتى لا يتم إخماد الجسم المضاد بينما يمكن أن يتم إخماد الخلايا والأجسام المضادة الفلورية أثناء احتضان الخلايا بجسم مضاد تلطيخ. لذلك بعد التلوين لمدة 15 دقيقة إلى 30 دقيقة ، سنقوم فقط بفصل الأنبوب من الجهاز واستبدال حقنة الجسم المضاد بحقنة عازلة لغسل الجسم المضاد غير المرتبط من الجهاز.

لذا فإن محلول الغسيل هنا يحتوي على 1٪ BSA في محلول PBS. يستخدم BSA لمنع عدم ارتباط الجسم المضاد على السطح وسنفعل الشيء نفسه. لذلك نقوم أولا بضبط معدل التدفق على مضخة الحقنة للتأكد من أنه معدل التدفق الصحيح الذي أردناه ، ثم سنبدأ تشغيل مضخة الحقنة ونتأكد من وجود سائل يخرج بالفعل من الأنبوب قبل توصيله بالجهاز.

الغرض من القيام بذلك هو عدم وجود فقاعة متبقية مثل بقايا الأنبوب. لذلك عندما نقوم بالحقن ، لا تدخل أي فقاعة إلى أجهزتنا. لذلك نقوم فقط بتوصيل الأنبوب بالجهاز وتركه يتدفق لمدة خمس دقائق أخرى لاستبدال كل الغسيل ، كل الأجسام المضادة غير المرتبطة من الجهاز.

بعد خطوة الغسيل ، سنقوم بإصلاح الخلايا بنسبة 1٪ PFA. الغرض من القيام بذلك هو أنه يمكن تخزين الجهاز لبضعة أسابيع تصل إلى بضعة أسابيع إذا كان من الممكن إجراء التصوير على الفور. لذا فإن الإجراء بسيط تماما.

إنه مشابه لما فعلناه من قبل. نقوم بتحميل المحقنة على المضخة ، وضبط معدل التدفق على المعدل الذي أردناه ، ثم نبدأ تشغيل مضخة الحقنة ونقوم بتوصيل الأنبوب بجهازنا لحقن محلول IDE الطفيلي ، وهو المثبت في أجهزتنا لإصلاح الخلايا. مرة أخرى ، تركناها تتدفق لمدة خمس دقائق.

لذلك يستبدل PFA كل المخزن المؤقت في الجهاز لإصلاح جميع الخلايا في الجهاز. لذلك بعد خطوة إصلاح PFA ، نقوم فقط بإزالة حقنة PFA والآن أصبح الجهاز جاهزا للتصوير. في بعض الحالات ، يرغب الناس في تلطيخ النواة لإظهار التراكب مع تلطيخ علامة سطح الخلية.

لذلك لهذا الغرض سنقوم بتلوين النواة باستخدام DPI في النهاية. لذلك نقوم فقط بتحميل حقنة DPI على تشغيل مضخة الحقنة وتدفق DPI إلى أجهزتنا. والآن سيتم تلطيخ النواة في تلك الخلايا لإظهار موقع الخلايا.

وهذه ، يمكن لاحقا تراكب صورة تلطيخ DPI مع تلطيخ علامة السطح لإظهار مكان الخلايا. لذلك في نهاية تلطيخ DPI ، نحتاج مرة أخرى إلى غسل النطاق L DPI P بمحلول عازل. مرة أخرى ، نحن نستخدم PBS الذي يحتوي على 1٪ BSA لغسل نقطة في البوصة الصادرة.

والعملية مشابهة لما فعلناه من قبل. نحن فقط نقوم بتوصيل المحقنة العازلة بجهازنا وسنسمح للمخزن المؤقت بالتدفق إلى الجهاز لغسل الداب غير المرتبط. هذا هو الإجراء الكامل لتلوين الخلايا في جهاز السوائل الدقيقة.

وبعد كل إجراءات التلوين ، تكون الأجهزة جاهزة للتصوير. ولأننا قمنا بإصلاح PFA ، يمكن أيضا تخزين الأجهزة لبضعة أسابيع. إذا تعذر إجراء تصوير الصور على الفور.