توصيف الخلايا الجذعية الوسيطة المعدلة وراثيا لتطبيقات العلاج العصبي

ابدأ بالخلايا الجذعية الوسيطة للفأر المعدلة وراثيا - خلايا متعددة القدرات مشتقة من نخاع العظام.

تم تصميم الخلايا للتعبير عن GFP والعوامل العصبية العلاجية التي تدعم نمو الخلايا العصبية وبقائها على قيد الحياة.

اغسل الخلايا بالمخزن المؤقت وقم بإصلاحها للحفاظ على سلامة الخلايا.

اغسل مرة أخرى باستخدام المخزن المؤقت ، ثم أضف محلولا لاختراق الخلية والأغشية النووية وسد مواقع الارتباط غير المحددة.

إدخال الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف بروتين علامة تكاثر الخلايا المعبر عنها حصريا في نواة الخلايا المنقسمة.

يغسل بمحلول عازل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.

أضف الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور التي تستهدف الأجسام المضادة الأولية وصبغة مرتبطة بالحمض النووي لمواجهة النوى.

يغسل بمخزن مؤقت لإزالة الكواشف غير المرتبطة.

قم بتحميل اللوحة في نظام الفحص عالي المحتوى والتقط الصور لاكتشاف إشارات الفلورسنت.

يشير

التعبير عن علامة تكاثر الخلايا إلى الانقسام النشط للخلايا ، مما يشير إلى ملاءمة الخلايا المعدلة وراثيا لتطبيقات العلاج العصبي.

لإجراء فحص تكاثر خلايا Ki-67 ، استخدم عازلة فوسفات 0.1 مولار لشطف مزارع الخلايا لمدة دقيقة واحدة. بعد تكرار الغسيل ، استخدم 4٪ بارافورمالدهيد ، أو PFA ، في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة لإصلاح الثقابات.

بعد التثبيت ، قم بإزالة PFA واستخدم PBS لشطف الآبار ثلاث