A وصف البصرية في تشريح الأوعية الدموية السطحية والسحايا الدماغي المقترن والضفيرة المشيمية من دماغ الفئران

الهدف العام من هذا الإجراء هو تشريح أجزاء التقشير والعنكبوتية من السحايا والأوعية الدموية الشريانية المرتبطة بها بكفاءة وسرعة ، وتراكب سطح قشرة الدماغ الأمامي والدماغ المتوسط والمهاد والكالي ، وكذلك لحصاد الضفيرة المشيمية من البطينين الجانبيين. يتم تحقيق ذلك عن طريق إزالة الغدة الصنوبرية أولا وفصل السحايا والأشجار الشريانية التي تدلل إلى الدماغ الأمامي. ثانيا ، تتم إزالة الشرايين والشرايين الموجودة على السطح القشري بعناية ، بدءا من الدائرة البطنية لويليس ، ثم الانتقال إلى الأسطح القشرية الظهرية بحيث تظل القشرة والأغشية العنكبوتية المتبقية ملتصقة بالأوعية الدموية ، مع التأكد من تقليل حصاد الأنسجة السطحية القشرية المجاورة.

بعد ذلك ، يتم تشريح القشرة والألياف المركبة بعيدا عن الحاجز والحصين ، مما يؤدي إلى تعريض البطينين الجانبيين للسماح بحصاد الضفيرة المشيمية. أخيرا ، تتم إزالة الحصين ، مما يؤدي إلى تعريض المهاد والكالي في الدماغ المتوسط. ثم يتم تشريح السحايا والأوعية الدموية المرتبطة بها التي تغطي هذه المنطقة.

في النهاية ، يمكن تحديد سلامة وخصوصية السحايا المقطعة والأوعية الدموية الشريانية المرتبطة بها ، بالإضافة إلى الضفيرة المشيمية ، من خلال مقارنة ملامح التعبير الجيني لكل منطقة من هذه المناطق. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في الأبحاث المتعلقة بالأوعية الدموية التي تدعم وظائف الدماغ. ويشمل أوجه التشابه والمقارنات والاختلافات في وظيفة الضفيرة المشيمية مقارنة بالسحايا والأوعية الدموية الشريانية المرتبطة بها فيما يتعلق بتدفق الدم ووظيفة السائل الدماغي النخاعي والإهانات السامة للأعصاب وصدمات الدماغ.

لبدء هذا البروتوكول ، ضع الأدمغة التي تمت إزالتها للتو من الفئران مباشرة بعد قتلها رحيما في محلول ملحي بارد وطبيعي لمدة خمس دقائق. من المهم السماح للدماغ بالتبريد لهذا القدر من الوقت قبل التشريح بحيث يمكن فصل السحايا الأربعة في الدماغ والأوعية الدموية الشريانية المرتبطة بها أو MAV عن سطح القشرة. بعد ذلك ، ضع الدماغ في قاع طبق بتري زجاجي يستريح على الجليد مع سنتيمتر واحد من الثلج أو البارد أو المحلول الملحي العادي أو 0.1 مولار من فوسفات الصوديوم الملحي عند درجة الحموضة 7.4.

يجب أن يتم كل التشريح مع الدماغ ، مغمور في الغالب في المحلول الملحي. لبدء التشريح ، ضع الجانب الظهري للدماغ لأعلى في طبق بتري وحدد موقع الغدة الصنوبرية ، والتي تقع في المنطقة البطنية الأكثر دللا بين نصفي الكرة الأرضية. فقط منقاري إلى المخيخ وأسفله مباشرة ، أو على سطح السحايا.

فوق القولون. قم بإزالة الغدة الصنوبرية باستخدام ملقطين صغيرين مثنيين. لاحظ أن الغدة الصنوبرية وردية اللون مثل القشرة ، ولكنها غالبا ما تكون محاطة ببقايا الدم المتبقي والأوعية الدموية من إزالة الدماغ.

بعد ذلك ، اقلب الدماغ رأسا على عقب في طبق بتري. ثم افصل الشريان الفقري والشرايين والسحايا الأصغر التي تغطي الجسر عن السحايا والأوعية الدموية في الدماغ الأمامي. بعد ذلك ، ابدأ في إزالة MAV.

من المهم أن تبدأ بطنيا في عملية التشريح مع الشرايين الرئيسية لدائرة ويليس والشرايين الدماغية الوسطى والشرايين الأمامية. بعد ذلك ، بدءا من نصفي الكرة الأرضية ، استخدم ملقطا صغيرا منحنيا لقطع الشريان المتصل الخلفي الخلفي مباشرة إلى مفترق الشريان السباتي الداخلي ، وبالتالي فصل الأشجار الشريانية الأمامية والخلفية للدماغ الأمامي. ثم كرر نفس العملية لنصف الكرة المقابل.

الآن يمسك MCA والشريان الأمامي بالملقط بلطف في الاتجاه الظهري الأمامي بحيث يتم رفع MAV الذي يغطي القشرة الأمامية البطنية فوق وحول الجهاز الشمي. هذا يزيل الكثير من MAV الذي يغطي القشرة الأمامية. أدر الدماغ بزاوية 45 إلى 90 درجة إلى طبق بتري بحيث يمكن تحرير المناطق الأمامية الجانبية من MAV المحيطة بالمناطق القشرية الجانبية من القشرة ، وإمساك MCA والشرايين المرتبطة به وسحب الظهر برفق على طول القشرة.

إذا لزم الأمر ، يمكن استخدام نهايات الملقط لرفع الشرايين الرئيسية وتحريرها من القشرة أثناء التشريح. الآن ، قم بإزالة المناطق الجانبية الخلفية من MAV. لاحظ أنه من الأفضل التبديل من نصف الكرة إلى الآخر أثناء عملية الحصاد هذه للتأكد من أن MAV يظل باردا ورطبا ، كما قم بتبديل نصفي الكرة الأرضية إذا تمت مواجهة أي مقاومة في تحرير MAV من القشرة.

أخيرا ، لإزالة معظم المناطق الظهرية من MAV المحيطة بالقشرة الحسية الجسدية والحركية الأولية ، اقلب الجانب الظهري للدماغ لأعلى لتحرير هذا القسم من الدماغ ، واستخدم نهايات الملقط على طول الجيوب السهمية. يمكن الاحتفاظ بهذا الجزء من MAV المحصود مؤقتا في محلول ملحي مثلج لحين الحاجة إليه للاختبار والتحليل ، أو تجميده للمعالجة لاحقا. غالبا ما يظل MAV الذي يغطي معظم مناطق التدليل الخلفي من القشرة متصلا.

عرض إزالته في قسم لاحق من هذا الفيديو. لإزالة الضفيرة المشيمية في الموضع الأول ، يرفع الجانب الظهري للدماغ ويثبت في مكانه باستخدام الملقط الأكبر. ثم ادفع الملقط الأصغر لأسفل عبر خط الوسط بين نصفي الكرة الأرضية واستخدم الأطراف للثقب من خلال القشرة والجسم الثفني في الجزء العلوي من خط الوسط للحصين.

بعد ذلك ، استخدم الملقط لسحب القشرة مع الثفن بعيدا عن الحصين الظهري والحاجز الذي يكشف معظم البطين الجانبي. يمكن تحديد موقع الضفيرة المشيمية وتحديدها من خلال الخط الأحمر المتموج الذي يحدد الشريان الرئيسي الذي يمتد على طوله. استخدم طرفي الملقط لنزع الجدران الجانبية للبطين الثالث وتكبيره في نهايته الأكثر تدللا.

ثم باستخدام ملقط صغير ، اسحب هذا الطرف من الضفيرة المشيمية مجانا. بعد ذلك ، استخدم الملقط لتكبير المنطقة الأمامية جدا بين الحاجز ومنطقة بوتامين الذنيلة وسحب الضفيرة المشيمية مجانا في هذه النهاية أيضا. قم أيضا بإجراء نفس الإجراء على نصف الكرة المقابل للحصول على الضفيرة المشيمية الثانية المتبقية.

مرة أخرى ، يمكن الاحتفاظ بهذه الأنسجة مؤقتا في الثلج أو البرد أو المحلول الملحي أو المجمدة لمعالجتها لاحقا. لإزالة MAV المتبقي الذي يغطي معظم مناطق التدليل الخلفية من القشرة ، أولا ، قم بإزالة الحصين بالكامل من نصفي الكرة الأرضية مما يعرض MAV فوق المهاد والكوليكوليات. لاحظ أن إزالة هذا الجزء من MAV سيكون أقل صعوبة بكثير من إزالته من القشرة للمتبقي MAV.

من خلال الإمساك بالأوعية الدموية الأكبر التي تغطي الجزء الأمامي من المهاد وسحبها برفق ، يتم توصيل هذه الأوعية الدموية بشبكة المليء بالمنهجية فوق المنهجية وتزود الحصين الظهري وشبكة المهاد الظهرية بالدم. اسحب بعيدا بشكل لطيف وفي النهاية سيتم تحرير الشبكة أعلاه ويمكن بعد ذلك الوصول إلى الأجزاء الأخيرة من الدائرة الشريانية للدلل. في هذه المرحلة ، يجب توخي المزيد من الحذر لإزالة أي MAV متبقي على سطح القشرة الأولية والسمعية والبصرية الخطية الحبيبية.

يجب إزالة أي MAV قشري بطني خلفي متبقي تم حصاده مع هذا القسم الثاني من المهاد والكالي MAV وإضافته إلى قسم MAV القشري الأول الذي تم تشريحه إذا كان سيتم تحليله بشكل منفصل. بعد ذلك ، لمقارنة ملامح التعبير الجيني بين القشرة الجدارية المخطط ومناطق MAV في ظل ظروف التحكم ، يمكن إجراء تحليل التعبير الجيني باستخدام جينوم الفئران الكامل Agilent 0 1 4 8 7 9 ، أربعة × 44 ، 060 مصفوفات قليلة النوكليوتيدات. يمكن العثور على مزيد من التفاصيل في المعالجة والمسح الضوئي والتخزين الأولي للبيانات في Thomas et al.

عندما يتم تنفيذ التشريح بشكل صحيح. يجب أن تكون أنسجة MAV الناتجة في كيانين سليمين يتراوح وزنهما الإجمالي بين 35 و 45 ملليغرام. يجب أن يزن MAV الذي تم تشريحه في البداية والذي يحيط بمعظم القشرة حوالي 25 ملليغرام ، ويجب أن يزن ذلك الذي يغطي المهاد والكالي والقشرة القذالية حوالي 15 ملليغراما.

يجب أن يكون لون الأنسجة ورديا قليلا من الدم المتبقي في الأوعية الدموية. يجب أن تكون الضفيرة المشيمية الثنائية المحصودة في عينتين من الأنسجة السليمة ، تزن كل منهما ملليغراما إلى ملليغرامين كما هو موضح هنا. نرى هنا مقارنة بين ملامح التعبير الجيني في القشرة الجدارية المخطط و MAV في ظل ظروف التحكم.

تظهر المخطط العلوي التعبير في المخطط مقارنة بالقشرة الجدارية. في حين أن المؤامرة السفلية تظهر تعبيرا في MAV مقارنة بالقشرة الجدارية ، يمكن ملاحظة أن المخطط والقشرة الجدارية ترتبط ارتباطا وثيقا ببعضهما البعض أكثر من MAV. هنا نرى التعبير الجيني التفاضلي في MAV استجابة لارتفاع الحرارة مقارنة بالتحكم ، استجابة للأمفيتامين مقارنة بالتحكم وفي ارتفاع الحرارة مقابل الأمفيتامين.

أخيرا ، نرى هنا جينات ذات تعبير أكبر من 15 ضعفا في MAV مقارنة بالقشرة الجدارية والمخطط التي تتميز بالوظيفة. ترتبط العديد من هذه الجينات بنظام الأوعية الدموية أو الجهاز المناعي. الجينات الأخرى ذات التغيرات الكبيرة جدا هي بروتينات المصفوفة خارج الخلية ، وناقلات القلي ، واستقلاب حمض الدهون والريتينويك.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر التحلي بالصبر أثناء تشريح MAV. من المهم أيضا أن يظل الدماغ مغمورا في محلول ملحي متساوي التوتر أو محلول ملحي مخزن بالفوسفات أثناء التشريح بأكمله. كما تنصح بممارسة قسم MAV على أربعة أو خمسة فئران قبل الحصول على الأنسجة لتوليد البيانات التجريبية.