الصلبة الدهون النانوية (SLNs) لاستهداف التطبيقات بين الخلايا

الهدف العام من هذا الإجراء هو تصنيع مجموعات صغيرة جدا من الجسيمات النانوية المتوافقة حيويا ، وتوصيف خصائصها الفيزيائية والتحقيق في تفاعلات خلايا الجسيمات. يتم تحقيق ذلك أولا باستخدام طريقة درجة حرارة انعكاس الطور لتصنيع الجسيمات النانوية الدهنية. خلال هذه العملية ، يتم إذابة الدهون والفاعل بالسطح في البداية.

بعد إضافة كمية معينة من الماء ، يسخن الخليط حتى يحدث فصل الطور. ثم يتم تقليب الخليط باستمرار حتى يتم تكوين مستحلب نانوي ويكتمل تخليق الجسيمات النانوية الدهنية الصلبة أو sln. بعد ذلك ، يتم استخدام تشتت الضوء الديناميكي أو DLS لقياس حجم الجسيمات وتشتت بولي.

كالوريمتر المسح التفاضلي أو DSC هو تقنية إضافية تستخدم لتحديد نقطة الانصهار والحرارة الكامنة للذوبان من أجل توصيف الجسيمات بشكل أكبر ، وفي النهاية يمكن استخدام الفحص المجهري الفلوري وقياس التدفق الخلوي للتحقيق في تفاعلات خلايا الجسيمات. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على طرق الطاقة العالية الحالية مثل السوائل الدقيقة فائقة الصوت والتجانس عالي الضغط ، هي أن هذه تقنية توليف لطيفة نسبيا ، وهي بسيطة وقابلة للتطوير. لتصنيع LNS ، اجمع بين 0.6 ملليغرام من صبغة الفلورسنت أو أي مركب آخر محب للدهون و 0.10 جرام من الألكان الخطي أو الدهون.

في قارورة سعة 15 مليلتر ، قم بإذابة المكونات عند 90 درجة مئوية وأضف 0.11 جرام من مادة خافضة للتوتر السطحي غير الأيونية الخطية. ثم يقلب الخليط الناتج على حرارة 90 درجة مئوية ويقلب. بعد ذلك ، أضف 1.79 جرام من الماء المعقم إلى حرارة الخليط إلى 90 درجة مئوية وراقب المحلول بصريا حتى يتم ملاحظة مرحلتين.

الآن حرك الخليط حتى يتكون مستحلب نانو شفاف. قم بإعداد مستحلب نانو منفصل بالتوازي دون إضافة صبغة الفلورسنت لتكون بمثابة عينة تحكم. قم بتعقيم كل مستحلب نانو باستخدام مرشح معقم 0.2 ميكرون.

استخدم DLS لقياس حجم الجسيمات وتشتت البولي ل S lns باستخدام زجاج في تصميم أداة لقياس حجم الجسيمات قبل قياس العينات ، يجب قياس حجم الجسيمات لمعيارين معروفين باتباع بروتوكول الشركة المصنعة لإعداد المعايير وقياسها. بعد ذلك ، قم بقياس العينات كما تم إعدادها لكل منها. استخدم وقت تشغيل مدته 100 ثانية ، ومعامل انكسار الماء ولزوجة الماء عند 20 درجة مئوية.

أبلغ عن متوسط قطر الجسيمات وتشتت البولي لتوزيع حجم الجسيمات للتحقق من السلوك الحراري ل S lns باستخدام ماصة DSC الأولى S LNS في وعاء من الألومنيوم سعة 40 ميكرولتر بكتلة تقارب 25 ملليغرام. أغلق المقلاة بإحكام باستخدام مكبس تجعيد عالمي لتقليل فقدان الرطوبة أثناء مسح كالوريمتر المسح الضوئي التفاضلي. قبل قياس كل مستحلب نانوي من خمس إلى 80 درجة مئوية ، أبلغ عن نقطة الانصهار والحرارة الكامنة للذوبان من مخطط DSC حيث يمثل الوادي نقطة الانصهار وتكامل المنطقة تحت المنحنى.

في مخطط DSC ، مقسوما على كمية المادة يمثل الحرارة الكامنة لثقافة الذوبان. الخلايا الليفية البشرية الأولية وفقا لتعليمات الشركة المصنعة في وسط سائل لثقافة الخلايا الليفية الجلدية البشرية. مع استكمال مجموعة مكمل نمو المصل المنخفض ، حافظ على الخلايا في جو مرطب عند 37 درجة مئوية ، و 5٪ ثاني أكسيد الكربون والزراعة الفرعية عند الوصول إلى 80٪ التقاء لكل من MTT وخلايا بذور تحليل التصوير.

في صفيحة 96 بئر بكثافة 20،000 خلية لكل بئر. اسمح للخلايا بالتوازن عند 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها قبل التعرض ل SLN في الوقت الذي يتم فيه تمييع صفر s SLMs في وسط كامل لتحقيق تركيز الدهون المطلوب وإضافة 10 ميكرولتر لكل بئر إلى كل بئر مكرر في لوحة 96 بئر بعد 24 ساعة من الحضانة باستخدام S lns ، حدد الجدوى الخلوية باستخدام اختبار MTT وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة. اغسل الخلايا مرة واحدة وأضف 100 ميكرولتر من الوسط الطازج لكل منها.

حسنا ، اقتل آبار التحكم عن طريق احتضانها في محلول ميثانول بنسبة 70٪ لمدة 10 دقائق قبل استبدالها بوسط جديد. أضف كاشف MTT بمعدل 10 ميكرولتر لكل بئر إلى كل بئر من الصفيحة الدقيقة واحتضنه طوال الليل عند 37 درجة مئوية بعد الحضانة طوال الليل ، وقم بإذابة الشكل داخل الخلايا والبلورات ب 100 ميكرولتر من محلول المنظف المقدم. وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة ، قم باحتضان الخلايا في محلول المنظف لمدة ثلاث ساعات في درجة حرارة الغرفة قبل الحصول على قيم الامتصاص.

استخدام قارئ الألواح الدقيقة للتحضير للفحص المجهري. اغسل الخلايا الليفية مرتين بمحلول ملحي منتفخ بالفوسفات المعقم. قم بإصلاح الخلايا لمدة 10 دقائق بالميثانول البارد بنسبة 70٪ في نقاط زمنية محددة بعد جرعات الخلايا الليفية مع lns.

بعد 10 دقائق ، استبدل الميثانول بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات أو PBS قبل التقاط الصور باستخدام مجهر مقلوب. نتج عن S SLN المركب التحكم في S LNS بمتوسط قطر جسيم يبلغ 18.59 وبتشتت بولي يبلغ 5.83 و SLMs محملة باللون الأحمر النيلي بمتوسط قطر جسيمات يبلغ 16.87 نانومتر وبتشتت بولي يبلغ 4.47 باستخدام مقايسة MTT. تم قياس تأثير استجابة الجرعة على التمثيل الغذائي الخلوي حيث أدت زيادة تركيز الجسيمات إلى انخفاض في الجدوى الخلوية.

لم يكن هناك فرق ملحوظ في السمية بين الخلايا المعرضة ل SLN وحدها مقابل الخلايا المحملة باللون الأحمر النيلي. SLN. في الخلايا المتوازية تم فحصها بصريا للتأكد من الالتصاق بثقافة الأنسجة. تم التقاط البوليسترين والصور لإثبات كل من التشكل الخلوي التمثيلي وامتصاص جزيئات الفلورسنت بمرور الوقت ، باستخدام جرعة تساوي خمسة ميكروغرام لكل ملليلتر.

لوحظ امتصاص جزيئات الدهون بعد ساعتين من التعرض. تم تحديد مستوى دمج الجسيمات النانوية عن طريق قياس شدة التألق الأحمر النيلي في الخلايا المتغصنة المشتقة من نخاع عظم الفئران ، أو B MDCs عن طريق قياس التدفق الخلوي. ولوحظ وجود علاقة مباشرة بين تركيز SNS المستخدم وكمية التألق المقدرة في بكتيريا MDCs B.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تصنيع مجموعات صغيرة جدا من الجسيمات النانوية المتوافقة حيويا ، وتوصيف خصائصها الفيزيائية والتحقيق في تفاعلات خلايا الجسيمات.