وضع العمود الفقري مكتبة الببتيد دوري كما المحتملة ضد الطفيليات التداوي عن طريق الميكروويف تشعيع

الهدف العام من هذا الإجراء هو تطوير مكتبة بنية أساسية مركزة لعلاج الببتيدوميم الدوري مع تنوع توافقي باستخدام تشعيع الميكروويف للعلاجات الجديدة المضادة للطفيليات. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في تطوير أدوات جديدة لاستهداف تفاعلات البروتين والبروتين على وجه التحديد. لبدء هذا الإجراء ، أضف 2.5 مل من الحمض الأميني المطلوب ، ومليلتر واحد من المنشط ، و 0.5 مل من قاعدة المنشط إلى خرطوشة البولي بروبلين.

ضع الخرطوشة في مركب ميكروويف آلي واسمح لتفاعل الاقتران بالاستمرار لمدة 300 ثانية عند 25 واط و 75 درجة مئوية. بمجرد اكتمال التفاعل ، اغسل الراتنج بسبعة ملليلتر من N أو N-dimethylformamide أو DMF لمدة 120 ثانية في درجة حرارة الغرفة. بعد تكرار الخطوة السابقة خمس مرات ، أضف سبعة ملليلتر من 20٪ بيبيريدين في DMF مع 0.1 مولار 1-هيدروكسي بنزوتريازول ، أو HOBt ، إلى خرطوشة البولي بروبلين واحتضانها لمدة 30 ثانية عند 45 واط و 75 درجة مئوية.

عند الانتهاء ، صفي خليط التفاعل. بعد ذلك ، أضف سبعة ملليلتر من 20٪ بيبيريدين في DMF مع 0.1 مولار HOBt إلى خرطوشة البولي بروبلين واحتضانها لمدة 180 ثانية عند 45 واط و 75 درجة مئوية. بعد تصريف خليط التفاعل ، اغسل الراتنج بسبعة ملليلتر من DMF لمدة 120 ثانية في درجة حرارة الغرفة.

ثم اغسل الراتنج بسبعة ملليلتر من ثنائي كلورو الميثان ، أو DCM ، لمدة 120 ثانية في درجة حرارة الغرفة. لاقتران أنهيدريد ، اغسل الراتنج بسبعة ملليلتر من 1-ميثيل -2-بيروليدينون ، أو NMP ، لمدة 120 ثانية في درجة حرارة الغرفة. عند الانتهاء ، صفي خليط التفاعل.

بعد تكرار الخطوة السابقة ثلاث مرات ، قم بإذابة 10 مكافئ من أنهيدريد المقابل في خمسة ملليلتر من NMP في أنبوب بولي بروبيلين سعة 50 مل. بعد ذلك ، أضف ما يعادل 4-Dimethylaminopyridine ، أو DMAP ، و 10 مكافئ ل N أو N-diisopropylethylamine أو DIEA ، إلى المحلول. أضف هذا الخليط إلى الراتنج ، واحتضنه لمدة 300 ثانية عند 25 واط و 75 درجة مئوية.

بعد غسل الراتنج باستخدام NMP ، اغسله بسبعة ملليلتر من DMF لمدة 120 ثانية في درجة حرارة الغرفة. في هذه المرحلة ، انقل الراتنج إلى خرطوشة بولي بروبلين مزودة بقابس غطاء ومحبس. بمجرد غسل الراتنج باستخدام DCM ، أضف 15 إلى 25 مل من خليط من 1٪ حمض ثلاثي فلورو أسيتيك ، و 5٪ ثلاثي أوزوبروبيلسيلان ، و 94٪ DCM إلى خرطوشة البولي بروبلين لكل 1 جرام من الراتنج.

ضع خرطوشة البولي بروبلين على شاكر ، ورجه لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، قم بتصريف المحلول من خرطوشة البولي بروبلين عن طريق تطبيق فراغ. بعد تكرار الخطوات السابقة ثلاث مرات ، اغسل الراتنج بسبعة ملليلتر من DCM لمدة 120 ثانية في درجة حرارة الغرفة.

هذه الخطوات مهمة للغاية ، حيث تم العثور على مجموعات حماية التريتيل في العديد من الراتنجات مشقوقة جزئيا في محاليل حمض DCM-trifluoroacetic. إزالة مجموعات ميثيل تريتيل هي عملية بطيئة تستغرق غسلات متعددة. في أنبوب بولي بروبيلين سعة 50 ملليلتر ، قم بإذابة خمسة مكافئات من سداسي فلور فوسفات البنزوتريازول -1-لي-أوكسي تريس بيروليدينوفوسفونيوم في خمسة ملليلتر من ثنائي بروموميثان.

ثم أضف 10 مكافئ من DIEA إلى الحل. يضاف الخليط إلى الراتنج المغسول ب DCM ويحتضن لمدة 300 ثانية عند 25 واط و 75 درجة مئوية. بعد ذلك ، اغسل الراتنج بسبعة ملليلتر من DCM لمدة 120 ثانية في درجة حرارة الغرفة.

بعد غسلتين باستخدام DCM ، انقل الراتنج إلى خرطوشة البولي بروبلين واغسلها مرتين باستخدام ثنائي إيثيل الأثير. جفف الراتنج في مجفف مفرغ في درجة حرارة الغرفة لمدة ثلاث ساعات على الأقل فوق هيدروكسيد البوتاسيوم. بعد ذلك ، أضف 10 مل من كوكتيل انقسام حمض ثلاثي فلورو أسيتيك المبرد مسبقا إلى كل جرام واحد من الراتنج.

ضع خرطوشة البولي بروبلين على شاكر ، ورجه لمدة 3 ساعات في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، قم بتجميع محلول الانقسام عن طريق تصفية الراتنج في أنبوب بولي بروبيلين سعة 50 مل. أضف 35 مل من الأثير ثنائي إيثيل البارد إلى الأنبوب.

جهاز طرد مركزي لمدة خمس دقائق عند 1،207 مرات جم عند أربع درجات مئوية. ثم صب طبقة الأثير. بالنسبة لاختبار Kaiser ، قم بإعداد المحلول A عن طريق إذابة 16.5 ملليغرام من سيانيد البوتاسيوم في 25 مل من الماء المقطر.

خفف ملليلتر واحد من المحلول مع 49 مل من البيردين. بعد ذلك ، قم بإعداد المحلول B عن طريق إذابة جرام واحد من النينهيدرين في 20 مل من الإيثانول. تحضير المحلول C عن طريق إذابة 40 جراما من الفينول في 20 مل من الإيثانول.

بعد تحضير المحاليل ، انقل بعض الخرزات من الراتنج إلى أنبوب اختبار. أضف ثلاث قطرات من كل محلول إلى الأنبوب واخلطه. أخيرا ، قم بتسخين أنبوب الاختبار على كتلة تسخين عند 110 درجة مئوية لمدة خمس دقائق.

تم إجراء تخليق الببتيدات الحلقية الأساسية باستخدام مركب الميكروويف الآلي على دعم صلب باتباع بروتوكول FMOC و t-butyl. تم تحليل المنتج عن طريق قياس الطيف الكتلي ، وتم تحديد درجة نقاوته باستخدام HPLC. أظهر الفحص البيولوجي أن الببتيد pL1 كان نشطا ضد الليشمانيا دونوفاني ، وهو طفيلي يسبب داء الليشمانيات الحشوي ، وهو أشد مرض الليشمانيات لدى البشر.

قلل الببتيد pL1 من قابلية الطفيليات بنسبة 75٪ مقارنة بالعلاج الضابط. بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية في غضون ثلاثة إلى خمسة أيام إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجموعة واسعة من المجالات لاستكشاف الببتيدات كمنظمين دوائيين في البحوث والعلاجات الأساسية.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تطوير مكتبة مركزة من القطع النفطية مع التنوع التوافقي لاستهداف تفاعلات البروتين والبروتين على وجه التحديد. لا تنس أن العمل مع حمض ثلاثي فلورو أسيتيك يمكن أن يكون خطيرا للغاية ، ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات ، مثل ارتداء واقي العين ، ومعطف المختبر ، والقفازات أثناء العمل في غطاء جيد التهوية أثناء تنفيذ هذا الإجراء.