تقييم آليات مراقبة الأوعية الدموية استخدام الفحص المجهري الفيديو الشرايين المقاومة المعزولة من الفئران

الهدف العام من هذا الإجراء هو استخدام شرايين المقاومة المعزولة لاختبار تفاعل الأوعية الدموية للمنبهات الوعائية. كما سيوضح كيفية تقييم التغيرات في آليات التحكم في العضلات الملساء والخصائص الميكانيكية السلبية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال بيولوجيا الأوعية الدموية فيما يتعلق بآليات التحكم في العضلات الملساء البطانية والأوعية الدموية في الشرايين الصغيرة المقاومة خلال ظروف مختلفة.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن عزل الشرايين الصغيرة المقاومة عن بيئة الخلايا المتني والحفاظ عليها في ضغطها الطبيعي أثناء اختبار الاستجابات للمنبهات الوعائية. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو علاج وتشخيص ضعف الأوعية الدموية. هذا النوع من التلاعب غير ممكن في الجسم الحي.

على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة لأمراض الأوعية الدموية الطرفية ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على مرض الشريان التاجي. يعد العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية حيث يصعب تعلم خطوات التكنيل الدقيقة بسبب دقة الإجراء والحاجة إلى تجنب إتلاف الشريان. في يوم التجربة ، قم بإعداد لترين من محلول الملح الفسيولوجي في قارورة إرلينماير سعة لترين.

أثناء إضافة مخزون المخزن المؤقت 20X ، تأكد من أن المحلول يتوازن باستمرار مع خليط الغاز ويحركه بقضيب تقليب مغناطيسي. بعد ذلك ، راقب الرقم الهيدروجيني مع إضافة 0.28 جرام من فوسفات أحادي الصوديوم إلى الخليط. عند الضرورة، قم بإضافة قطرات من ستة حمض هيدروكلوريك عادي أو 6.5 محلول هيدروكسيد الصوديوم العادي من ماصة باستور بحيث يظل الرقم الهيدروجيني عند 7.4.

ثم أضف 1.98 جرام من الجلوكوز إلى محلول الملح الفسيولوجي. بعد ذلك ، قم بإعداد 500 مل من محلول الملح الفسيولوجي الخالي من الكالسيوم عن طريق تخفيف محلول المخزون 20X في الماء منزوع الأيونات. بعد ذلك ، أضف 25 مل من المخزون المؤقت 20X في قارورة Erlenmeyer وأضف 0.07 جرام من الفوسفات أحادي الصوديوم إلى المحلول أثناء مراقبة وضبط درجة الحموضة في المحلول.

استخدم أنابيب رباعي فلورو إيثيلين لتوصيل خزان غاز يحتوي على خليط الغاز المناسب بحمام الأعضاء. قم بعمل فقاعات المحلول باستمرار بمعدل كاف لضمان الفقاعات المستمرة ، ولكن غير المضطربة للمحلول المتدفق إلى حجرة الوعاء. أيضا ، ضع حجر هواء صغيرا متصلا بخليط غاز التوازن في غرفة الوعاء للمساعدة في الحفاظ على تركيبة غاز محلول الملح الفسيولوجي.

ضع محلول الملح الفسيولوجي في زجاجة ماريوت سعة لترين. أضف أنبوبا زجاجيا مركزيا إلى سدادة ليكون بمثابة خزان يقوم بتوصيل محلول الملح الفسيولوجي باستمرار إلى حمام الأعضاء الدوائي الذي يزود المحلول بغرفة الوعاء. ضع فتحة الأنبوب الزجاجي المركزي في زجاجة ماريوت على نفس مستوى الجزء العلوي من محلول الملح الفسيولوجي في حمام الأعضاء.

سيضمن ذلك رأس ضغط هيدروستاتيكي ثابت لتوصيل محلول الملح الفسيولوجي إلى حمام الأعضاء. استخدم أنبوب بولي إيثيلين متصل بأنبوب زجاجي على شكل حرف J لتوصيل محلول الملح الفسيولوجي من زجاجة ماريوت إلى حمام الأعضاء. من أجل وفرة التدبير ، استخدم أنابيب البولي إيثيلين لتوصيل ماصة التدفق بخزان محلول ملح فسيولوجي يتكون من حقنة بلاستيكية 66 سم مكعب مرفوعة إلى موضع يحافظ على ضغط التدفق المطلوب.

راقب الضغط عن طريق توصيل محول ضغط بالنظام عبر محبس. بعد ذلك، قم بتوصيل ماصة التدفق الخارجة بأنبوب بولي إيثيلين بخزان مشابه لخزان التدفق للسماح لمحلول الملح الفسيولوجي بالتدفق عبر الوعاء استجابة لتدرج الضغط. أيضا ، استخدم وصلة محبس ومحول ضغط مماثلة لمراقبة ضغط التدفق.

قم بإزالة دماغ فأر Sprague Dawley وضعه في وضع ضعيف في طبق بتري زجاجي مليء بمحلول ملح فسيولوجي مثلج. ثم ضع الطبق تحت مجسم استخدم زوجا من مقص Vannas وملقط Dumont رقم خمسة رفيع لاستئصال الشرايين الدماغية الوسطى من الدماغ.

بعد ذلك ، قم بتنظيف أي أنسجة دماغية متبقية من الشريان الدماغي الأوسط باستخدام الملقط. انقل الشريان إلى حجرة الوعاء عن طريق الإمساك به برفق في نهاية الجزء المقطوع وضعه بحذر في الغرفة. بعد ذلك، قم بربط الشريان الدماغي على الماصة الدقيقة الداخلة عن طريق سحبها نحو قاعدة الماصة حتى يتقدم الطرف إلى تجويف الشريان.

قم بتأمين الشريان على ماصة التدفق عن طريق ربط حلقة محضرة من ألياف أحادية الخيط تم إثارتها مسبقا من 10-0 خيوط حول الشريان. بعد ذلك، قم بتأمين الطرف المقابل للشريان الدماغي الأوسط بماصة التدفق الخارج عن طريق شد حلقة خياطة ثانية حول الوعاء واستخدم الميكرومتر المتصل بحامل ماصة التدفق لتمديد الشريان إلى طوله في الموقع. اربط جميع الفروع الجانبية باستخدام خيوط مفردة من 10-0 خيوط من أجل الحفاظ على ضغط ثابت في الشريان.

بعد ذلك ، قم بإعداد مجهر فيديو يتكون من كاميرا فيديو متصلة بمجهر تشريح متصل بميكرومتر فيديو وشاشة تلفزيون. استخدم هذا الإعداد لقياس القطر الداخلي للشريان. قم بتقييم النغمة العضلية واستجابات الأوعية الدموية لمنبهات موسعات الأوعية الدموية من خلال التأكد من أن الشريان يظهر مستوى مناسبا من النغمة النشطة قبل التجربة.

تخلص من أي شرايين تفتقر إلى النغمة النشطة أثناء الراحة باستثناء الأوعية مثل الشرايين المساريقية الصغيرة التي لا تظهر عادة نغمة راحة نشطة. بعد ذلك ، أضف تركيزات متزايدة من الأستيل كولين إلى حجرة الوعاء الدموي وقم بقياس أقطار الأوعية الدموية لاختبار التفاعل المعتمد على البطانة لشريان المقاومة المقننة. في هذا المثال ، يظهر الشريان خللا وظيفيا بطانية كما يتضح من فشله في التوسع استجابة للأستيل.

في نهاية التجربة ، حدد الحد الأقصى لقطر الشريان عن طريق إضافة محلول ملح فسيولوجي خال من الكالسيوم إلى التعرد والانزيمات الفائقة. استخدم هذا القياس لحساب النسبة المئوية لنغمة الراحة النشطة. يثبت عرض أقصى تمدد في محلول الملح الفسيولوجي الخالي من الكالسيوم أن فشل الشريان في التمدد استجابة للأستيل كولين كان بسبب خلل بطاني وليس بسبب عدم قدرة الشريان على الاسترخاء بسبب إعادة التشكيل الهيكلي للوعاء الدموي.

هذا الشكل الاستجابات لموسع الأوعية الدموية المعتمد على البطانة في الشرايين الدماغية الوسطى المعزولة من ذكور الفئران الحساسة لملح دال في السلالات الثلاثة الضيقة. هذا يدل على أن التمدد المعتمد على البطانة إلى الأسيتيل كولين كان غائبا في السلالة الأبوية الحساسة للملح وفي كل من السلالات المتجانسة التي تحتفظ بأليل رينان الحساس للملح. تمت استعادة التمدد الطبيعي في السلالة المتجانسة التي تحمل أليل رينان النرويجي البني في الخلفية الجينية الحساسة للملح ، مما يدعم الفرضية القائلة بأن الخلل البطاني في فئران SS يرجع إلى ضعف تنظيم جين رينان.

في هذه التجربة ، فشل النظام الغذائي عالي الملح في القضاء على التمدد المعتمد على البطانة إلى الأسيتيل كولين في سلالة معينة من الفئران ، والنتائج المتعلقة بالمساهمين في الإجهاد المؤكسد للأوعية الدموية والخلل البطاني أثناء الارتفاعات في تناول الملح الغذائي. بمجرد إتقانها ، يمكن القيام بهذه التقنية في غضون ثلاث إلى 3 ساعات ونصف إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر التعامل مع الشريان المعزول بحذر شديد لتجنب تلف العضلات الملساء وخاصة البطانة.

بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل إضافة ناهضات مضيق للأوعية الدموية وموسعات الأوعية أو مضادات المستقبلات من أجل الإجابة على الأسئلة بما في ذلك الآليات التي تؤثر على تفاعل الأوعية الدموية للمواد المختلفة وآليات عمل الدواء على الأوعية الدموية. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجالات بيولوجيا الأوعية الدموية وفسيولوجيا الدورة الدموية الدقيقة لاستكشاف وظيفة العضلات الملساء والبطانية في شرايين المقاومة من أسرة الأوعية الدموية المختلفة لحيوانات التجارب والبشر. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استخدام هذه الطريقة لتقييم آليات التحكم في العضلات الملساء البطانية والأوعية الدموية في الشرايين الصغيرة المقاومة من أسرة الأوعية الدموية المختلفة.