تمييز واحد من مونوسبيسيفيك وأنماط DFS70 مختلطة أثناء الفحص أنا مع الركازة رواية خروج المغلوب النخبة/DFS70 أبو عبدالله 2

الهدف العام من هذا الإجراء هو إظهار اختبار فلوري مناعي محسن وغير مباشر يستخدم Novel HEp-2 ، ركيزة 70 ضربة قاضية كثيفة دقيقة لفحص الأجسام المضادة للنواة وتأكيد 70 نمطا أحادي النوع ومختلط من البقع الدقيقة. تستخدم ركيزة HEp-2 الجديدة إجراء تألق مناعي قياسي وغير مباشر ومعايير تفسير لفحص الأجسام المضادة للنواة ذات الصلة سريريا ، والتي تعرف أيضا باسم ANAs. الميزة الرئيسية هي القدرة على التمييز بين نمط 70 المرقط الناعم الكثيف والأنماط المختلطة المرتبطة بالأمراض أو المتجانسة أو المختلطة الصعبة في خطوة الفحص.

ستظهر الإجراء صوفيا بادانين ، فنية من مختبر مراقبة الجودة لدينا. بالنسبة لشرائح الركيزة ، استخدم شرائح زجاجية بها 12 بئرا في كل شريحة ، تحتوي إما على خلايا HEp-2 التقليدية ، أو خليط من 70 خلية HEp-2 التقليدية والكثيفة المرقطة بالضربة القاضية. اسمح للأكياس التي تحتوي على شرائح الركيزة بالتوازن مع درجة حرارة الغرفة للحصول على الأداء الأمثل ولمنع تكثيف الرطوبة على سطح الشريحة قبل إضافة العينة.

يجب أن يستغرق هذا ما بين 10 و 15 دقيقة. بمجرد موازنة درجة حرارة الغرفة ، قم بإزالة شرائح الركيزة بعناية باستخدام أصابع المرء ، وتجنب ملامسة الشرائح وجوانب الحقيبة. قم بتسمية الشرائح وضعها في غرفة حضانة مبطنة بمناشف ورقية مبللة لمنع جفاف الشرائح أثناء أخذ العينة والحضانة المترافقة.

قم بتوزيع ما يقرب من 50 ميكرولترا من عناصر التحكم السلبية والإيجابية ، بالإضافة إلى مصل المريض المخفف على آبار الشرائح الفردية قبل وضع الشرائح في غرفة الحضانة. اختبار ANA هو الخطوة الأولى في فحص أمراض المناعة الذاتية. من الأهمية بمكان تجنب التلوث المتبادل لعينات المرضى على الشريحة لتقليل النتائج الإيجابية أو السلبية الخاطئة.

لمنع التلوث المتبادل جيدا ، تجنب الإفراط في ملء الآبار. ضع الغطاء على حجرة الحضانة واحتضن الشرائح لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. إذا كان هناك أي ANA موجود في مصل المريض ، فسوف يرتبط بالخلايا الموجودة في كل إرادة خلال هذا الوقت.

بمجرد انتهاء فترة الحضانة ، قم بإزالة الشريحة من غرفة الحضانة. أمسك الشريحة في نهاية اللسان واشطفها برفق لمدة 10 إلى 15 ثانية باستخدام ما يقرب من 10 ملليلتر من محلول الغسيل الملحي المعاد تكوينه من الفوسفات المخزن مؤقتا. انقل الشريحة على الفور إلى برطمان كوبلين مع مخزن غسيل PBS وانقعها لمدة 10 دقائق.

كرر العملية مع جميع الشرائح المتبقية. قم بإزالة شريحة واحدة فقط في كل مرة من جرة كوبلين. لإزالة المخزن المؤقت الزائد لغسيل PBS من الشريحة ، اضغط برفق على الشريحة أو امسح الشريحة على منشفة ورقية.

على كل بئر ، ضع برفق قطرة واحدة من إيزوثيوسيانات الفلوريسئين ، المسمى مترافق الفلورسنت IgG المضاد للإنسان. ثم احتضن الشرائح في غرفة حضانة التلوين المغلقة لمدة 30 دقيقة. بمجرد انتهاء فترة الحضانة ، قم بإزالة الشريحة من غرفة الحضانة.

أمسك الشريحة في نهاية اللسان واشطفها برفق كما كان من قبل ، مع ما يقرب من 10 ملليلتر من مخزن غسيل PBS. انقل الشريحة على الفور إلى برطمان كوبلين مع مخزن غسيل PBS وانقعها لمدة 10 دقائق. ضع زلات الغطاء المتوفرة في المجموعة على منشفة ورقية جافة.

على الحافة السفلية لزلة الغطاء، ضع ما بين 3 و4 قطرات من وسائط التثبيت في خط. بعد ذلك ، أخرج شريحة واحدة في كل مرة من جرة Coplin التي تحتوي على مخزن الغسيل. لإزالة المخزن المؤقت للغسيل الزائد ، اضغط برفق على الشريحة الموجودة على المنشفة الورقية أو امسح لها.

تجنب ترك كمية زائدة من عازلة الغسيل على الشريحة ، أو الضغط الشديد على زلة الغطاء أو إدخال فقاعات الهواء. كل هذا يمكن أن يؤثر على مورفولوجيا الخلية وأنماط الفلورسنت الناتجة وشدة التفاعلات. اخفض الشريحة برفق على زلة الغطاء، عن طريق وضع الحافة السفلية للشريحة على حافة زلة الغطاء.

يسمح ذلك لوسائط التثبيت الموجودة على زلة الغطاء بالتدفق إلى الحافة العلوية للشريحة ويقلل من تكوين فقاعات الهواء ، والتي قد تتداخل مع قراءة كل بئر. اعرض الشرائح باستخدام مجهر الفلورسنت ، باستخدام مجموعة مرشح إيزوثيوسيانات الفلوريسين الموجودة في غرفة مظلمة. افحص العينة بحثا عن مضان أخضر ساطع محدد تحت المجهر بتكبير 200 ضعف أو أكثر لإجراء التفسير النهائي فيما يتعلق بالإيجابية والنمط.

راقب الضوابط الإيجابية والسلبية. سيعرض التحكم الإيجابي تألق أخضر ساطع في النواة. لن يعرض عنصر التحكم السلبي أي مضان أخضر محدد تحت المجهر الفلوري.

سجل النتيجة الإيجابية أو السلبية لكل بئر وقم بتضمين نمط ANA للحالات الإيجابية. HEp-2 كثيفة دقيقة مرقطة 70 ركيزة بالضربة القاضية تحافظ على جميع الأنماط النووية والسيتوبلازمية الرئيسية. يتميز النمط المرقط الناعم الكثيف بوجود تلطيخ مرقط موزع بشكل موحد في جميع أنحاء نواة الطور البيني والكروماتين في المرحلة الانقسامية.

إن وجود كل من خلايا HEp-2 التقليدية التي تعبر عن مستضد 70 مرقط ناعم كثيف وخلايا HEp-2 المصممة هندسيا الخالية من المستضد يسهل التمييز الدقيق لنمط 70 المرقط الناعم الكثيف ، مع الاحتفاظ بجميع مزايا ركائز HEp-2 التقليدية. تم خلط الأمصال الإيجابية لأنماط ANA الرئيسية المرتبطة بالأمراض مع مصل كثيف ناعم مرقط 70 نمطا إيجابيا بنسب متساوية وتم اختباره على كل من HEp-2 التقليدي و HEp-2 70 ركيزة خروج المغلوف. هنا ، تشير الأسهم الحمراء إلى الخلايا في المرحلة الانقسامية.

تشير الأسهم الصفراء إلى نوى HEp-2 التقليدية وتشير الأسهم الزرقاء إلى نوى HEp-2 المهندسة هندسيا. بالنسبة لجميع مجموعات التفاعلات المصورة ، تظهر الركيزة الكثيفة الدقيقة المرقطة 70 فرقا واضحا في الشدة بين الخلايا غير المعدلة والخلايا الهندسية في نفس مجال الرؤية. يساعد هذا في التمييز بين 70 تفاعلا أحادي محدد ومختلط كثيف مرقط.

تنتشر الأجسام المضادة الذاتية للمستضدات النووية والسيتوبلازمية بشكل كبير في أمراض المناعة الذاتية الجهازية. تم الإبلاغ عن أن النمط المرقط الدقيق الكثيف الناتج عن الأجسام المضادة الذاتية تجاه DFS70 ، المعروف أيضا باسم بروتين PSIP1 ، منتشر بشكل كبير بين السكان الأصحاء. علاوة على ذلك ، تحدث هذه الأجسام المضادة الذاتية DFS70 بمعزل عن بعضها البعض وكذلك مع ANAs الأخرى المرتبطة بالأمراض.

هذا يجعل من الأهمية بمكان للمختبرات السريرية التمييز بدقة بين هذا النمط والأنماط الأخرى المرتبطة بالأمراض. على سبيل المثال ، في النمط المرقط المتجانس المختلط ، المرتبط بالذئبة ، يمكن إساءة تفسيره على أنه نمط DFS70 الذي يستلزم فحوصات تأكيدية متعددة. تعتبر طريقة التألق المناعي غير المباشر باستخدام ركائز HEp-2 طريقة الفحص القياسية الذهبية ل ANAs.

ومع ذلك ، فإن الدقة تعتمد بشكل كبير على مهارة الفني والتنفيذ الدقيق للخطوات الفردية والتفسير الدقيق للأنماط الناتجة. على العكس من ذلك ، يوضح التقييم المقارن لركائز الضربة القاضية التقليدية HEp-2 و DFS70 فائدة هذه الركيزة الجديدة في تمييز نمط DFS70 بثقة عالية ، أثناء فحص ANAs. تم تبسيط التفسير الإضافي لكل من أنماط DFS70 أحادية الإيجابية والمختلطة نسبيا باستخدام ركيزة HEp-2 المحسنة.

تستخدم الركيزة الجديدة بروتوكول تألق مناعي قياسي غير مباشر ومعايير تفسير محددة لجميع أنماط ANA ذات الصلة سريريا.