جزيرة البنكرياس التضمين لمقاطع البارافين

يمكن أن تساعد هذه الطريقة العلماء على زيادة الاستخدام المثمر لجزر البنكرياس لتقييم نتائج متعددة على كل عينة في بنية الأنسجة الأصلية. تتمثل الميزة الرئيسية لطريقة التضمين الجديدة هذه في أن الجزر الصغيرة موزعة بالتساوي على منطقة محددة جيدا ، مما يضع العديد من الجزر الصغيرة في مستوى المقطع الذي يحسن العائد التجريبي من هذه المادة منخفضة الوفرة. سيوضح الإجراء الدكتور ياهوي كونغ ، باحث مشارك في مختبري.

لبدء هذا الإجراء، استخدم طرف ماصة p200 منخفض الارتباط وشبكة معايرة تحت مجهر استريو لاختيار 250 مكافئا للجزيرة. نقلها إلى كل أنبوب ميكرو فوج منخفض الارتباط سعة 1.5 مل. دع الجزر تستقر في قاع أنبوب الطرد الدقيق.

بعد ذلك ، استخدم ماصة ذات طرف p200 جديد لإزالة معظم المادة الطافية بعناية. تأكد من عدم إزالة أي جزر. أضف ملليلترا واحدا من PBS وجهاز الطرد المركزي في جهاز طرد مركزي دلو متأرجح حتى تصل السرعة إلى 200 ضعف الجاذبية ثم أوقف الدوران.

قم بإزالة المادة الطافية. كرر عملية غسيل PBS بأكملها لما مجموعه دورتين غسيل. بعد ذلك ، أضف 500 ميكرولتر من محلول الفورمالين بنسبة 10٪ أو 4٪ بارافورمالدهيد الطازج.

دع العينة ثابتة في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك ، استخدم ماصة بطرف p200 لإزالة المثبت. أضف ملليلتر واحد من PBS وأجهزة الطرد المركزي حتى تصل السرعة إلى 200 مرة من الجاذبية ثم أوقف الدوران.

قم بإزالة المادة الطافية ثم كرر عملية غسيل PBS بأكملها مرة أخرى ليصبح المجموع دورتين غسيلتين. قم بإعداد الجل المطلوب في أنابيب أجهزة الطرد المركزي الدقيقة سعة 1.5 مل كما هو موضح في بروتوكول النص. بعد ذلك ، ضع أنابيب الطرد المركزي الدقيقة هذه في كتلة حرارية عند 70 درجة مئوية لتسخين الجل.

استخدم طرف ماصة دقيقة مقطوعة لنقل 10 ميكرولتر من حبيبات الاغاروز الزرقاء لكل عينة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق نظيف سعة 1.5 ملليلتر. أضف ملليلترا واحدا من PBS إلى الخرزات ، ثم جهاز الطرد المركزي بقوة 800 مرة من الجاذبية لمدة دقيقة واحدة. قم بإزالة PBS وكرر هذا الغسيل مرة أخرى.

بعد الغسيل الثاني ، أعد تعليق الخرزات بكمية مناسبة من PBS. قم بالطرد المركزي للأنابيب التي تحتوي على الجزر حتى تصل السرعة إلى 200 ضعف الجاذبية ثم أوقف الدوران. قم بإزالة معظم المادة الطافية.

باستخدام زوج من المقص ، قم بقطع نهاية طرف ماصة دقيقة سعة 10 ميكرولتر لكل عينة. أضف 10 ميكرولترات من الخرز إلى كل أنبوب جزيرة باستخدام طرف مقطوع نظيف لكل عينة. ثم جهاز الطرد المركزي حتى تصل السرعة إلى 200 ضعف الجاذبية.

بعد ذلك ، استخدم 200 ميكرولتر غير مقطوع متبوعا بطرف 10 ميكرولتر لإزالة أكبر قدر ممكن من PBS. قم بتسمية شرائح المجهر لتحديد العينة وضعها على المقعد بالقرب من الكتلة الحرارية باستخدام الجل الدافئ. باستخدام زوج من المقص ، قم بقص أطراف بعض أطراف الماصات الدقيقة منخفضة الارتباط لكل عينة.

باستخدام ماصة دقيقة مزودة بطرف مقطوع ، أضف جل دافئ إلى أنبوب يحتوي على جزر صغيرة وخرز. تخلط على الفور مع تجنب تكوين أي فقاعات. ضع هذا الخليط على شريحة لتشكيل قرص بالقرب من حافة الشريحة مع ترك مساحة لحلقة الهلام الخارجية.

ثم اضغط على الشريحة برفق عدة مرات لتسوية الجزر والخرز. أضف 20 ميكرولترا من الجل الدافئ إلى أنبوب العينة واخلط الجل الجديد مع أي جزر وخرز متبقية. ضع هذا الخليط على نفس الشريحة المحيطة بالقرص الأصلي.

كرر ذلك حسب الضرورة باستخدام أطراف جديدة مقطوعة مسبقا لكل تطبيق حتى يصل القرص إلى الحجم والسمك المطلوبين. تأكد من إعداد كل قرص على حدة وتتبع ترتيب العينة في حالة وضع أقراص متعددة على كل جانب. بعد ذلك ، ضع الشرائح على سطح مستو من الثلج الرطب وقم بتغطيتها.

دع الشرائح ترتاح لمدة 10 دقائق أو حتى يتماسك الجل. ثم قم بإزالة الشرائح مع التأكد من تجفيف الجزء الخلفي من كل واحدة. قم بتسمية معالجة الخزعة وتضمين كاسيت الأنسجة لكل عينة.

استخدم الحافة الحادة لشفرة الحلاقة لدفع القرص برفق من كل اتجاه لتحريره من الزجاج. عندما ينزلق بسهولة، ادفع القرص ببطء بعيدا عن الشريحة وضع الجانب المسطح للقرص لأسفل مباشرة على الورق. قد يكون من الصعب الحفاظ على الأقراص المميزة سليمة أثناء تحريكها من الشريحة الزجاجية إلى الورق.

في حالة حدوث تجعد في القرص ، اسمح له بالعودة إلى موضعه الأصلي ، وأضف المزيد من الجل وأعد جل الشريحة. قم بطي الورق حول القرص لمنع الحركة. انقل هذا إلى الكاسيت ثم أغلق الكاسيت.

اغمر الكاسيت في دورق مليء ببرنامج تلفزيوني. في هذه الدراسة ، يتم استخدام طريقة تضمين معدلة قائمة على قرص الهلام لتوليد إنتاجية عالية من الجزر بكفاءة لكل قسم. يكون مورفولوجيا جزر القوارض أكثر سلامة بشكل ملحوظ بعد التعافي بعد العزل في وسط الجزيرة الذي يعرض سطحا مستديرا أملسا وشكلا كرويا مضغوطا.

حقيقة أن مورفولوجيا الجزر البشرية متشابهة ، بغض النظر عما إذا كانت جزءا لا يتجزأ من يوم الوصول أو بعد استرداد ما بعد الشحن بين عشية وضحاها ، قد تكون بسبب تعافي الجزر من إجهاد العزل قبل الشحن. بالمقارنة ، ينظر إلى أقسام البارافين التي تم الحصول عليها عبر تقنية الأنبوب الدقيق القديمة على أنها تحتوي على مساحة مقطع عرضي أصغر للأنسجة مع عدد أقل من الجزر الصغيرة لكل قسم وجزر وخرزات معبأة بكثافة. كما هو موضح هنا ، فإن هذه التقنية قادرة على إنتاج أقسام جزرية عالية الجودة للتلطيخ النسيجي والتألق المناعي.

يظهر تلطيخ الأنسولين والجلوكاجون التكوين المتنوع وعدم التجانس لهندسة الجزر التي توضح الاختلافات المعمارية المعروفة بين الجزر البشرية والفئران والجرذان. تمثل هذه الصور أيضا أقساما تسلسلية لنفس الجزر. إثبات أن هذه التقنية قادرة على الحصول على أقسام متعددة من نفس الجزر.

بمجرد إتقانها ، توفر هذه التقنية الوقت على تقنية الطرد المركزي الدقيق. يسهل تشكيل القرص على سطح مستو بدلا من الأنبوب نقل القرص فعليا إلى الكاسيت للمعالجة. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة لبيولوجيا الجزر ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على كتل الخلايا الأخرى أو الأنسجة القابلة للتفتيت التي يصعب تقسيمها.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر استخدام جل صغير الحجم لتركيز الأنسجة في منطقة صغيرة وتشكيل القرص على سطح مستو. من الأهمية بمكان أيضا استخدام أنابيب أجهزة الطرد المركزي الدقيقة منخفضة الربط وأطراف الماصة لتحسين إنتاجية الأنسجة. تمهد هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال بيولوجيا الجزر لاستكشاف تكوين نوع الخلية وعدم التجانس ، والتفاعل بين الخلية والخلية ، وتنظيم الجينات في الجزر المزروعة بأكملها في بنيتها الأصلية.

القدرة على إنشاء 10 أقسام أو أكثر تحتوي على العديد من الجزر الصغيرة من حالة تجريبية واحدة بالقياس الكمي لنتائج متعددة على نفس المادة ، مما يحسن الكفاءة التجريبية. قد يؤدي تطبيق هذه التقنية على عينات الأنسجة الوفيرة المحدودة إلى فوائد للمجالات الأخرى أيضا. قد تحتاج عناصر هذا الإجراء إلى تعديل لتلبية احتياجات المستخدمين.

يجب تحسين شدة التثبيت والتقسيم. يمكن إنشاء قرص أكثر سمكا أو أكبر باستخدام هذه التقنية. قد تحتاج خطوات المعالجة البسيطة للتضمين إلى أن تكون متداخلة ويجب تحسينها.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنشاء كتلة خلية الاغاروز عالية الجودة لأقسام البارافين في جزر البنكرياس المستزرعة بالكامل.