وصمة عار غولجي السريعة لتصور العمود الفقري الشجيري في الحصين والقشرة الجبهية

على الرغم من بساطتها نسبيا ، إلا أن تقنية تشريب Golgi لديها بعض الخطوات الصعبة والفشل في القيام بها بشكل صحيح يؤدي إلى خلايا غير صالحة للتحليل. توفر هذه التقنية وسم سريع وقابل للتكرار للخلايا العصبية المشربة من غولجي. وبالإضافة إلى ذلك ، فإن الخطأ القياسي الصغير للمتوسط يسمح بالمقارنة بين التجارب.

الجزء الأكثر تحديا في هذه التقنية هو قطع أقسام cryostat ، لأن هناك اتساقا وتثبيتا غير عاديين ، وبالتالي فإن الحصول عليها على شقة الشريحة هو جزء من التحدي يتطلب الممارسة. أولا ، ضع كمية صغيرة من وسط الأنسجة على ظرف cryostat قبل التبريد. قم بتركيب كتل الدماغ على تشاك cryostat عن طريق إذابة جانب واحد من الكتلة قليلا في يد قفاز ووضعها على وسط الأنسجة.

استخدم رذاذ تجميد على السكين والكتلة. استخدم إما اللوحة المضادة للتدحرج أو الفرشاة للحفاظ على القسم مسطحا أثناء القطع. قطع 100 مقطع ميكرومتر على كريوستات عند 22 درجة مئوية تحت الصفر.

قم بإذابة الجليد ، إن أمكن ، باستخدام شريحة درجة حرارة الغرفة وعارضها بسرعة إلى القسم. بدلا من ذلك ، احتفظ بالشرائح في cryostat ، بحيث تتجمد. انقل القسم باستخدام ملقط بارد أو فرشاة طلاء باردة ثم قم بإذابة التركيب.

جبل ثلاثة إلى أربعة أقسام إكليلية على يهدأ. نظف السكين بمناديل ورقية بين الشرائح. إذا كانت السكين تتطلب مزيدا من التنظيف ، فاستخدم الإيثانول بنسبة 100٪ وجففها قبل قطع الشريحة التالية.

ضع الشرائح في رفوف، متباعدة بما يكفي للسماح بوصول الحل إلى الأقسام. ضع المقاطع في الماء المقطر مرتين لمدة أربع دقائق قبل وضعها في محلول تشريب Golgi لمدة 10 دقائق. افصل قسائم الغطاء لضمان وضع قسيمة غطاء واحدة فقط على الأقسام.

قم بتغطية الشرائح الزجاجية بكمية كبيرة من وسط التركيب قبل وضع غطاء زجاجي على الشريحة. بمجرد انزلاق الغطاء ، يتم وضع علامة على الشرائح الجافة على أي ورق غير مسامي لمدة ثلاثة إلى خمسة أيام ، وتحريكها قليلا ، خاصة بعد اليوم الأول لتجنب الالتصاق. قم لاحقا بنقل الشرائح إلى حاملات الشرائح ومن الناحية المثالية ، قم بتجفيف الشرائح لمدة ثلاثة أسابيع على الأقل قبل فحصها.

لتحليل كثافة العمود الفقري الشجيري في الخلايا العصبية الهرمية لكل من قشرة الفص الجبهي الإنسي ومنطقة CA1 من الحصين ، قم بقياس الطول المتغصن باستخدام برنامج تحليل الصور. عد العمود الفقري على التشعبات باستخدام عداد اليد وسجل كل من طول وعدد العمود الفقري. للتحليل ، اختر الخلايا العصبية ذات الأجسام الخلوية والتشعبات أثناء تشريبها ، والتشعبات المستمرة والتي يمكن تمييزها عن الخلايا المجاورة.

يوضح الشكل أمثلة على الخلايا المشربة Golgi في منطقة CA1 من الحصين تظهر في طاقة منخفضة وعالية. يوضح الشكل تجربة زادت فيها كثافة العمود الفقري القاعدي المتغصن على الخلايا الهرمية في الفئران الذكور والإناث المراهقين بعد التخصيب البيئي في CA1 وقشرة الفص الجبهي الإنسية. من الصعب الحفاظ على برودة الأقسام بما فيه الكفاية عند القطع ونستخدم قدرا كبيرا من رذاذ التجميد من أجل القيام بذلك.

وبعد ذلك ، من الصعب الحصول على الأقسام على الشرائح وجعلها جافة مسطحة. تستخدم هذه التقنية لفحص الخصائص التشريحية العصبية. يمكن استخدامه بمفرده أو بالاشتراك مع طرق تتبع تشريحية عصبية أخرى.