June 13th, 2025
قمنا بتطوير طريقة QuEChERS-HPLC المعدلة لتقييم المستويات الداخلية ل 16 هيدروكربوكرية في أجنة أسماك الزرد.
يهدف هذا البحث إلى تطوير طريقة QuEChERS-HPLC المعدلة لتحديد الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات في أجنة أسماك الزرد المعرضة ل EOM ، ومعالجة الفجوة الحالية الناجمة عن التحديات التقنية في قياس مستويات الهيدروكربكرات العطرية متعددة الحلقات الداخلية بسبب حجم كتلة الأجنة وتعقيد مصفوفة بيولوجية. يتطلب الحصول على نتائج موثوقة 200 جنين لكل مجموعة ، مما يمثل تحديا عمليا. يمكن أن يؤدي الجمع بين HPLC وكاشف التألق إلى زيادة حساسية الطريقة. بالمقارنة مع التقنيات الأخرى ، تقلل طريقة QuEChERS-HPLC المعدلة هذه بشكل كبير من وقت تعليق العينة وتوفر نهجا سريعا وفعالا لتحليل مستويات 16 هيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات في أجنة أسماك الزرد المعرضة ل EOM.
[الراوي] للبدء ، قم بإعداد عينة QuEChERS عن طريق إخراج الأطباق التي تحتوي على الأجنة من الحاضنة بعد 72 ساعة من الإخصاب. اغسل الأجنة ثلاث مرات بالماء النقي. انقل الأجنة إلى أنابيب سعة 1.5 مليلتر وقم بإزالة الماء الزائد. ضع الأنابيب في ثلاجة 80 درجة مئوية تحت الصفر لمدة 30 دقيقة لتجميد الأجنة. بعد التجميد ، قم بطحن الأجنة باستخدام قضيب زجاجي. أضف 25 ميكرولترا من 16 هيدروكربونات عطرية متعددة الحلقات ، أو PAH ، امزج المحلول القياسي إلى مجموعة التحكم DMSO لاختبار استرداد السنبل. ثم أضف ملليلتر واحد من n-hexane والدوامة لمدة 30 ثانية. الموجات فوق الصوتية الخليط عند 35 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. الآن ، قم بالطرد المركزي للعينة عند 7,000 جرام لمدة خمس دقائق. انقل المادة الطافية إلى أنبوب جديد. تبخر المواد الطافية المجمعة حتى تجف تحت تدفق النيتروجين في حمام مائي 35 درجة مئوية. أضف ملليلتر واحد من الأسيتونيتريل والدوامة لمدة 30 ثانية. أضف 10 ملليغرام من الأمين الثانوي الأولي ، و 45 ملليغرام من كبريتات المغنيسيوم ، و 15 ملليغرام من عبوة C18 إلى العينة ، ثم دوامة لمدة 30 ثانية. جهاز طرد مركزي بوزن 7,000 جرام لمدة خمس دقائق ونقل المادة الطافية إلى أنبوب جديد. تبخر المادة الطافية إلى 0.5 مل تحت النيتروجين وقم بتصفية العينة من خلال غشاء مسامي صغير بحجم 0.22 ميكرومتر. قم بإعداد سلسلة من حلول العمل تتراوح من واحد إلى 500 نانوجرام لكل ملليلتر لمعيار المزيج 16 PAH باستخدام الأسيتونيتريل. قم بحقن 20 ميكرولترا من محاليل العينة في كروماتوجراف سائل باستخدام الأسيتونيتريل أو الطور المتحرك بالماء واتبع إجراء الشطف الموضح على الشاشة. ارسم منحنى قياسي بتركيزات كتلية لحلول العمل القياسية على المحور x ومناطق الذروة المقابلة على المحور y ، تغطي نطاقا يتراوح من خمسة نانوغرام لكل مليلتر إلى 500 نانوجرام لكل مليلتر. قم بحقن العينة المنقاة في الكروماتوجراف السائل المجهز بكاشف مضان ، أو FLD ، وكاشف مصفوفة الصمام الثنائي ، أو DAD. تحديد وجود الهيدروكربونات متعددة الحلقات من خلال مقارنة أوقات الاستبقاء. قياس مناطق الذروة لتحديد التركيز. أخيرا ، احسب التركيزات الداخلية ل 16 هيدروكربروسية متعددة الحلقات بناء على تركيزات الكتلة المقاسة. يتم إعطاء تركيزات الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات ، أو الهيدروكربونات متعددة الحلقات ، في أجنة أسماك الزرد بعد 72 ساعة من الإخصاب في هذا الجدول. تم اكتشاف ستة هيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات بنجاح في المواد العضوية القابلة للاستخراج ، أو EOM ، أجنة أسماك الزرد المكشوفة. في المقابل ، تم تحديد اثنين فقط من الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات في عينات التحكم DSMO ، بمستويات أقل بكثير من تلك الموجودة في عينات EOM.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
تقدم هذه الدراسة طريقة QuEChERS-HPLC المعدلة لتقدير الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات (PAHs) في أجنة أسماك الزرد. تعالج الطريقة التحديات في قياس مستويات PAH الداخلية بسبب الحجم الصغير والمصفوفة البيولوجية المعقدة للأجنة.
Quantitative detection of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) in small, complex biological matrices is a critical challenge in early toxicology and environmental risk assessment workflows. The modified QuEChERS-HPLC method enables sensitive, reproducible measurement of internal PAH levels in zebrafish embryos, supporting mechanistic de-risking and predictive confidence in developmental toxicity studies. This capability strengthens translational continuity from environmental exposure models to preclinical safety evaluation in biopharma pipelines.
This method integrates into the discovery-to-preclinical continuum by enabling robust quantification of PAHs in zebrafish embryos, informing both mechanistic studies and translational toxicology workflows.