يونيو 13, 2025
قمنا بتطوير طريقة QuEChERS-HPLC المعدلة لتقييم المستويات الداخلية ل 16 هيدروكربوكرية في أجنة أسماك الزرد.
يهدف هذا البحث إلى تطوير طريقة QuEChERS-HPLC المعدلة لتحديد الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات في أجنة أسماك الزرد المعرضة ل EOM ، ومعالجة الفجوة الحالية الناجمة عن التحديات التقنية في قياس مستويات الهيدروكربكرات العطرية متعددة الحلقات الداخلية بسبب حجم كتلة الأجنة وتعقيد مصفوفة بيولوجية. يتطلب الحصول على نتائج موثوقة 200 جنين لكل مجموعة ، مما يمثل تحديا عمليا. يمكن أن يؤدي الجمع بين HPLC وكاشف التألق إلى زيادة حساسية الطريقة. بالمقارنة مع التقنيات الأخرى ، تقلل طريقة QuEChERS-HPLC المعدلة هذه بشكل كبير من وقت تعليق العينة وتوفر نهجا سريعا وفعالا لتحليل مستويات 16 هيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات في أجنة أسماك الزرد المعرضة ل EOM.
[الراوي] للبدء ، قم بإعداد عينة QuEChERS عن طريق إخراج الأطباق التي تحتوي على الأجنة من الحاضنة بعد 72 ساعة من الإخصاب. اغسل الأجنة ثلاث مرات بالماء النقي. انقل الأجنة إلى أنابيب سعة 1.5 مليلتر وقم بإزالة الماء الزائد. ضع الأنابيب في ثلاجة 80 درجة مئوية تحت الصفر لمدة 30 دقيقة لتجميد الأجنة. بعد التجميد ، قم بطحن الأجنة باستخدام قضيب زجاجي. أضف 25 ميكرولترا من 16 هيدروكربونات عطرية متعددة الحلقات ، أو PAH ، امزج المحلول القياسي إلى مجموعة التحكم DMSO لاختبار استرداد السنبل. ثم أضف ملليلتر واحد من n-hexane والدوامة لمدة 30 ثانية. الموجات فوق الصوتية الخليط عند 35 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. الآن ، قم بالطرد المركزي للعينة عند 7,000 جرام لمدة خمس دقائق. انقل المادة الطافية إلى أنبوب جديد. تبخر المواد الطافية المجمعة حتى تجف تحت تدفق النيتروجين في حمام مائي 35 درجة مئوية. أضف ملليلتر واحد من الأسيتونيتريل والدوامة لمدة 30 ثانية. أضف 10 ملليغرام من الأمين الثانوي الأولي ، و 45 ملليغرام من كبريتات المغنيسيوم ، و 15 ملليغرام من عبوة C18 إلى العينة ، ثم دوامة لمدة 30 ثانية. جهاز طرد مركزي بوزن 7,000 جرام لمدة خمس دقائق ونقل المادة الطافية إلى أنبوب جديد. تبخر المادة الطافية إلى 0.5 مل تحت النيتروجين وقم بتصفية العينة من خلال غشاء مسامي صغير بحجم 0.22 ميكرومتر. قم بإعداد سلسلة من حلول العمل تتراوح من واحد إلى 500 نانوجرام لكل ملليلتر لمعيار المزيج 16 PAH باستخدام الأسيتونيتريل. قم بحقن 20 ميكرولترا من محاليل العينة في كروماتوجراف سائل باستخدام الأسيتونيتريل أو الطور المتحرك بالماء واتبع إجراء الشطف الموضح على الشاشة. ارسم منحنى قياسي بتركيزات كتلية لحلول العمل القياسية على المحور x ومناطق الذروة المقابلة على المحور y ، تغطي نطاقا يتراوح من خمسة نانوغرام لكل مليلتر إلى 500 نانوجرام لكل مليلتر. قم بحقن العينة المنقاة في الكروماتوجراف السائل المجهز بكاشف مضان ، أو FLD ، وكاشف مصفوفة الصمام الثنائي ، أو DAD. تحديد وجود الهيدروكربونات متعددة الحلقات من خلال مقارنة أوقات الاستبقاء. قياس مناطق الذروة لتحديد التركيز. أخيرا ، احسب التركيزات الداخلية ل 16 هيدروكربروسية متعددة الحلقات بناء على تركيزات الكتلة المقاسة. يتم إعطاء تركيزات الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات ، أو الهيدروكربونات متعددة الحلقات ، في أجنة أسماك الزرد بعد 72 ساعة من الإخصاب في هذا الجدول. تم اكتشاف ستة هيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات بنجاح في المواد العضوية القابلة للاستخراج ، أو EOM ، أجنة أسماك الزرد المكشوفة. في المقابل ، تم تحديد اثنين فقط من الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات في عينات التحكم DSMO ، بمستويات أقل بكثير من تلك الموجودة في عينات EOM.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
تقدم هذه الدراسة طريقة معدلة تعتمد على QuEChERS-HPLC لتقدير كمية الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات (PAHs) في أجنة سمك الزيبرا. وتعالج هذه الطريقة التحديات المتعلقة بقياس مستويات الـ PAHs الداخلية نظراً لصغر حجم الأجنة وتعقيد مصفوفتها البيولوجية.
يعد الكشف الكمي عن الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات (PAHs) في المصفوفات البيولوجية الصغيرة والمعقدة تحدياً حرجاً في تدفقات عمل علم السموم المبكر وتقييم المخاطر البيئية. تتيح طريقة QuEChERS-HPLC المعدلة قياساً حساساً وقابلاً للتكرار لمستويات PAHs الداخلية في أجنة أسماك الزيبرا، مما يدعم تقليل المخاطر الآلية وتعزيز الثقة التنبؤية في دراسات السمية النمائية. وتعزز هذه القدرة الاستمرارية الانتقالية من نماذج التعرض البيئي إلى تقييم السلامة قبل السريرية في مسارات تطوير الأدوية البيولوجية.
تتكامل هذه الطريقة ضمن التسلسل الممتد من مرحلة الاكتشاف إلى المرحلة ما قبل السريرية من خلال تمكين التحديد الكمي القوي لمركبات PAHs في أجنة zebrafish، مما يدعم الدراسات الميكانيكية وسير عمل علم السموم الانتقالي.