Tavşan İntradüktal Enjeksiyonu: Tavşan Meme Bezine İlgi Çözeltisinin Lokalize Teslimatı

Overview

Bu videoda, bir tavşanın meme kanalına bir ilgi çözümü uygulama tekniğini açıklıyoruz ve kontrast ajanların yüksek çözünürlüklü ultrason görüntülemesi ile teslimatı onaylıyoruz.

Protocol

1. Ameliyat Öncesi Hazırlık

1. Her tavşanın vücut ağırlığını kaydedin. Tüm klinik öncesi çalışmalarda olduğu gibi, potansiyel toksisiteyi değerlendirmek için hayvan ağırlıklarını düzenli olarak izleyin.
2. Tavşanı uyuşturmadan önce, 50 mL konik bir tüpü piyasada bulunan ultrason jeli ile doldurun ve 30 s için 500 x g'da döndürün; santrifüjlemenin tamamlanmasından sonra jelde görünür kabarcıklar olmamalıdır.
3. Glikoptirolat deri altından 0.1 mg/kg dozda ve asepromazin intramüsküler olarak 0.75 mg/kg dozda uygulanır. Hayati belirtileri ve davranışları izlerken yatıştırıcının etkili olmasını 15-20 dakika bekleyin.
   NOT: Glikoskopirrolat, bradikardiyi önleyen, solunum ve GI salgılarını azaltan bir anti-kolinerjik ajandır. Asepromazin anestezi için bir premedikasyon görevi görür bir yatıştırıcıdır.
4. Anestezik olarak 35 mg/kg ketamin ve 5 mg/kg ksilazin deri altı sürün. Bununla birlikte, operatör daha deneyimli hale geldikçe ve intradüktal doğumu daha hızlı gerçekleştirebildiğinden, ilaç dozajlarını 15 mg / kg ketamin ve 3 mg / kg ksilazin subkutanine düşürün; bu, anestezi süresini ve hayvanın anesteziden iyileşmesi için gereken süreyi kısaltacaktır.
5. Kalp atış hızını, SPO_{2'yi, sıcaklığı,} solunum hızını ve mukus membran rengini her 15 dakikada bir kontrol edin ve belgeleyin. Her iki göze de göz yağı uygulayın.
   NOT: Anesteziyi sadece uygun eğitimden geçmiş ve kurumu IACUC tarafından onaylanmış personel uygulamalı veya izlemelidir. Veteriner anestezi monitörünün kullanılması hayati belirtilerin alınmasına yardımcı olabilir ve önerilir. Bununla birlikte, veteriner anestezi monitörü, hayvanı her 15 dakikada bir manuel olarak kontrol etme ihtiyacının yerini almaz. Veteriner monitörünün doğru kullanımı için üreticinin talimatlarına bakın.
6. Anestezinin başlangıcını hafif bir parmak sıkışması ile doğrulayın; tavşan devam etmeden önce yanıt vermemelidir.
7. Üçüncü ve dördüncü çift kasık tiklerinin etrafındaki bölgede tavşanın kaudal karnını dikkatlice tıraş edin.
8. Saçların büyük çoğunluğu çıkarıldığında, tıraş edilen bölgeye reçetesiz bir epilasyon kremi uygulayın. Ilık suyla ıslatılan nemli kağıt havlular kullanarak uygulamadan 10 dakika sonra kremayı çıkarın.
   NOT: Tavşan derisi çok kırılgan / hassastır. Epilasyon kremi en fazla 10 dakika kullanılmalıdır. Aslında, bir "test noktasını" 5 dakikada denemek ve sadece test noktası daha uzun bir süreye ihtiyaç duyulduğunu gösteriyorsa daha uzun süre bırakmak daha güvenlidir.
9. Enjeksiyon bölgesini temizlemek için bölgeyi alkole batırılmış gazlı bezlerle silin.
10. Tavşanı dorsumuna, devridaimli ılık su battaniyesi ve emici bir ped ile kaplı v şeklinde bir oluk içine yerleştirin.

2. Kontrast Maddesinin Hazırlanması

1. Hedeflenmemiş kontrast reaktifini üreticinin talimatlarına göre yeniden oluşturur. Pipet yukarı ve aşağı yavaşça karıştırmak için.
   NOT: Bu protokolde kullanılan kontrast maddesi, yeniden yapılandıktan sonra oda sıcaklığında 4 - 6 saat stabildir. Her alma arasında şişeyi hafifçe sallayın.
   NOT: Gerekli çözelti hacmi enjekte edilecek kanal sayısına bağlı olacaktır. Tavşan meme başına 4 dütal açıklığa sahiptir ve yetişkin bir Yeni Zelanda Beyaz Tavşanının(Oryctolaguscuniculus)bir düktal ağacını doldurmak için 0,2 mL çözelti yeterlidir. Böylece, bir meme bezine toplam 0,8 mL hacim teslim edilebilir.

3. İntradüktal Doğum

1. Enjekte edilecek uygun tikleri bulun; 3^rd ve^4. çift kasık tikleri önerilir, çünkü hayvan dorsum üzerine konumlandırıldığında kolayca görselleştirilirler.
2. 22 G iğne ile 1 mL Luer-lock tüberkülin şırıngasına 0,2 mL steril %0,9 salin yükleyin. Salin şırıngaya girdikten sonra 22 G iğneyi düzgün bir şekilde atın ve steril 25 kalibrelik bir iğne ile değiştirin. Bölgeyi bir gazlı bez üzerinde% 85 izopropil alkol ile hafifçe silin.
3. İğnenin eğimi yukarı ve şırınga hayvanın vücuduna paralelken, iğnenin eğimini meme ucunun yanına yerleştirin ve yavaşça 0.1-0.2 mL salin enjekte edin; bu, düktal açıklıkların daha iyi görselleştirilmesini sağlayacaktır.
4. 1 mL Luer-lock tüberkülin şırındına 0,2 mL enjeksiyon çözeltisi yükleyin.
5. Meme ucu başparmak ve işaret parmağı ile hafifçe tutun ve intradüktal enjeksiyon için konumlandırmak için hafifçe kaldırın; giyilebilir bir oküler loupe, düktal açıklıkların görselleştirilmesine yardımcı olabilir.
6. Meme ucunun kaldırılmış konumunu korurken, 25 G künt uçlu bir iğne kullanarak ilgi kanalını dikkatlice yalıtabilirsiniz.
7. Kanülasyondan sonra, Luer-lock şırıngasını künt uçlu infüzyon iğnesinin göbeğinde yerine kilitlenene kadar hafifçe bükün.
8. Kanalın içinde hızla hareket eden sıvının neden olduğu olası hasarı en aza indirmek için memeyi kaldırın ve çözeltiyi yavaşça enjekte edin; çözelti enjekte ederken hiçbir zaman direnç olmamalıdır.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1 mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2 mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Ketamine HCL 100 mg/mL	Animal Health International	21250699	http:// www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10 mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20 mg/mL	Animal Health International	20101547
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/ collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-PulseOximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads