微组织使用胶原蛋白的模块的制备凝胶含有细胞

Summary

使用圆柱胶原凝胶，称为模块，其中包含嵌入细胞表面的微组织的创建是涂有内皮细胞。

Abstract

这个协议描述的称为模块的微观组织类型制造。该模块的方法生成统一的，可扩展性和吻合血管的组织。该模块可制成胶原蛋白，以及其他gelable或交联材料。他们后制造的直径约2毫米长，0.7毫米，但在尺寸缩小与嵌入式细胞或模块与内皮细胞涂。单独的模块都足够小，嵌入细胞内的氧气和其他营养物质的扩散限制，但模块可以打包在一起，形成较大的组织，perfusable。因为不同类型的细胞，可以嵌入在或涂在模块之前，他们挤在一起，形成复杂的组织，这些组织都采用模块化施工。模块有三个主要步骤:（1）中的胶原蛋白和嵌入在它的细胞，（2）凝胶在管内的胶原蛋白和切割与内皮细胞的模块和（3）涂层的模块。

Protocol

1）准备油管

1. 切割2至3米长度的聚乙烯管（0.76毫米内径× 1.22毫米外径）。
2. 20 G1的针管端成一个主题。
3. 线圈油管并将其放置在一个转换器，自密封袋（7 1 / 2"× 13"）。油管的两端应置于袋启封，并在地方与气体消毒磁带录音。
4. 密封袋和气体消毒。

2）中和胶原蛋白

注:1毫升的胶原蛋白填充聚乙烯管材约2米。

1. 将所需的油管到15毫升的锥形管的长度所需要的必要数量的胶原蛋白，并保持在冰上。
2. 加入128微升10倍的α- MEM中每毫升含胶原管，并通过反复吹打的解决方案组合。注:（1）解决方案应该是混合变成黄色α- MEM到酸化的胶原蛋白和（2）尽量减少气泡，当混合。
3. 胶原蛋白中加入0.8 M碳酸氢钠，直到胶原蛋白的pH值7.4。对于一般估计的pH添加碳酸氢钠，直到黄色的胶原蛋白溶液变成浅粉色的颜色。注:通常需要30％至60μL每毫升胶原蛋白。
4. 置于冰上瓦解胶原蛋白，直到准备使用的瓦解胶原凝胶，如果不保持在4 ° C。

3）嵌入细胞（可选）

注:根据细胞类型的细胞可以被嵌入在一个细胞每毫升1万至20万每毫升细胞之间浓度。使用您要嵌入的细....

Discussion

我们编造了几个不同的微观组织，使用与不同的^细胞类型1-11嵌入式模块。我们已经成功地嵌入原发性心肌细胞，胰岛，脂肪干细胞和间质基质细胞以及一些包括肝癌，NIH 3T3和克隆肝细胞的细胞株。我们涂有几种类型包括大鼠主动脉血管内皮细胞，人脐静脉内皮细胞和人类微血管内皮细胞内皮细胞的模块。模块也已产生胶原蛋白和poloxamine聚合物或含有药物洗脱微球（图4）的混合物。 在体外实验中，一些被证明是兼容模块，包括免疫荧光法，免疫印迹，血管生成，alamar蓝色扩散和生活/死亡检测（图5）。他们也被用于在微流控室（图6），并植入小鼠和大鼠（图7），研究不同类型的细胞和微观组织是如何改造的宿主反应的互动。模块有许多应用，可用于3D组织培养的影响，对细胞的研究在三维构象不同的细胞相互作用的微观组织重塑一个微腔，并在体内重塑微观组织由一台主机使用响应。

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
药内管 PE60	BD Biosciences	427416	不同直径的管子可用于改变模块的直径
磷酸盐缓冲盐水 （PBS）	GIBCO，Life Technologies	20012-027
胰蛋白酶-EDTA	GIBCO，Life Technologies	25200-072
Purcol 酸化胶原蛋白，3 mg/mL	Cedarlane Labs	5005-B
碳酸氢钠	Sigma-Aldrich	S5761
20G 针头	BD Biosciences 305175		针头的直径需要与管子的直径相似
3 mL 注射器	BD Biosciences 309585
15 mL 管	BD Biosciences	352096
50 mL 管	BD Biosciences	352070
转换器自封袋 7 1/2”x 13”	Cardinal Health	92713
10 ml 宽尖血清移液管	BD Biosciences 357504
10 ml 血清移液	BD Biosciences 357551
5 ml 血清移液管	BD Biosciences	357543