Summary
İkincil nanoelectrospray iyonlaşma kullanarak gerçek zamanlı dışarı solunan nefes kimyasal bileşimi karakterize bir protokol kütle spektrometresi gösterdi yüksek çözünürlüklü birleştiğinde.
Abstract
Onlar non-invaziv bir şekilde hastalık tanı ve çevre pozlama için biyolojik olarak hizmet verebilir beri dışarı solunan uçucu organik bileşikler (VOC) büyük ilgi uyandırdı. Bu çalışmada, biz ikincil nanoelectrospray iyonlaşma yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi (sn-nanoESI-HRMS) birleştiğinde kullanarak gerçek zamanlı dışarı solunan UOB'ler karakterize etmek için bir iletişim kuralı mevcut. Ev yapımı sn-nanoESI kaynak kolayca bir ticari nanoESI kaynağına göre kurulmuştur. Tepeler yüzlerce arka plan düşülen kitle spectra dışarı solunan nefes içinde gözlendi ve kitle doğruluk değerlerdir -4.0-13.5 ppm ve-20.3-pozitif ve negatif iyon algılama modlarında 1.3 ppm anılan sıraya göre. Doruklarına doğru kitle ve izotopik desen göre doğru elemental bileşimi ile ayrıldı. 30'dan az s bir soluk verme ölçüm için kullanılan ve altı çoğaltılmış ölçümler için yaklaşık 7 dakika sürer.
Introduction
Modern analitik teknikler hızlı gelişimi ile uçucu organik bileşikler (VOC) yüzlerce insan dışarı solunan nefes1' de tespit edilmiştir. Bu UOB'ler çoğunlukla alveoler hava (sağlıklı bir yetişkin için ~ 350 mL) kaynaklanan ve anatomik ölü boşluk hava (~ 150 mL)2, hangi vücut metabolizma3,4,5,6tarafından,7 etkilenir ,8 ve çevre kirliliği9, anılan sıraya göre. Sonuç olarak, tespit, bu UOB'ler biyolojik hastalık tanı ve çevre pozlama için non-invaziv bir şekilde kullanılmak üzere umut vericidir.
Gaz Kromatografi Kütle spektrometresi (GC-MS) dışarı solunan UOB'ler2, gerçek zamanlı nefes analiz için geliştirilmiştir, doğrudan MS teknikleri, nitel ve nicel analiz için en çok kullanılan teknik olsa avantajları var zaman yüksek çözünürlük ve basit örnek ön hazırlık. Proton transferi tepki MS (PTR-MS)10, gibi doğrudan MS teknikleri iyon akışı tüp MS (SIFT-MS)11, ikincil electrospray iyonlaşma MS (SESI-MS)12,13 (Ekstraktif electrospray da adlandırılan seçili İyonlaşma MS, EESI-MS14,15), izleme atmosferik gaz analizörü (TAG'dan)16 ve plazma iyonizasyon MS (PI-MS)17 araştırdık son yıllarda.
Tüm doğrudan MS teknikleri arasında SESI bir evrensel yumuşak iyonlaşma tekniği19,20,21bilinen; ve kaynak özelleştirilebilir ve Kütle Spektrometreler, örneğin, zaman uçuş Kütle Spektrometre8,15farklı türde birleştiğinde kolaydır, iyon kapanı Kütle Spektrometre14 ve orbitrap Kütle Spektrometre12 ,18. Şu ana kadar SESI-MS başarıyla solunum yolu hastalıkları22, tanılamada sirkadiyen ritim3,6,23, farmakokinetik7,8, ölçme kullanılmıştır ve açığa metabolik yolu4, vb. Son olarak, bir ticari SESI kaynağı kullanılabilir hale gelmiştir.
Bu çalışmada, bir ikincil nanoelectrospray facile ve kompakt iyonizasyon kaynağı (sn-nanoESI) kurmak ve yüksek çözünürlüklü bir Kütle Spektrometre birleştiğinde. Dışarı solunan UOB'ler nefeste gerçek zamanlı ölçümleri sunuldu.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dikkat: Lütfen ilgili tüm malzeme güvenlik bilgi formları (MSDS) kullanmadan önce danışın. Lütfen uygun kişisel koruyucu ekipman, örneğin, önlük, eldiven, gözlük, tam uzunlukta pantolon ve kapalı-toe ayakkabı kullanın).
1. sn-nanoESI kaynağını ayarlayın
- Sn-nanoESI kaynak Ayrılmıştır süreci, Yani, göre ayarlayın nefes gaz bir electrospray tüy kesiştiği tanıştırdı ve şarj edilmiş damlacıkları (şekil 1) tarafından iyonize. Bireysel Labs'de inşa kaynakları Kütle Spektrometre kullanılan24,25arabirimi üzerindeki bağlıdır. Burada, bir ticari nanoESI kaynağını (Şekil 2) temel alan sn-nanoESI kaynağı oluşturun ve bir benchtop quadrupole orbitrap Kütle Spektrometre için uygulamak.
Not: Kaynak ana gövdesi bir kübik paslanmaz çelik Odası (süre 25 mm, kimlik 13 mm) şeklindedir (şekil 2b) nanoESI kılcal odanın içine tanıtmak için bir giriş (kimlik 4 mm) ile. Böylece, odası değil tamamen mühürlü (şekil 2b). - Gaz teslim için odası her tarafında iki paslanmaz çelik tüpler (uzunluğu 8 mm, doz 5 mm, kimlik 3 mm) yükleyin.
- Üst ve alt nanoESI kılcal damar ve nanoESI sprey gözleri veya dijital mikroskop ucu konumunu kontrol odasının üzerinde iki kuvars windows (kimlik 14 mm) donatmak.
- Kütle Spektrometre süpürme koni odasına kaynak.
Not: Tasarım bireysel laboratuvarlarında kullanılan Kütle Spektrometre atmosferik basınç arabiriminin belirli geometri bağlı olarak değişebilir.
2. araç en iyi duruma getirme
- Her iki pozitif ve negatif iyon algılaması mod üreticinin yönergelerine uygun olarak Kütle Spektrometre kalibre. Kalibrasyon uygulayarak, objektif potansiyelleri ve algılama koşulları, gibi Kütle Spektrometre parametreleri belirtilen çözünürlük değerinde iyi duyarlılık ve tepe şekil vermek için optimize edilmiştir. 70000 kitle çözünürlüğe burada kullanılır.
- Tam Q Exactive kalibrasyonlar ticari ESI kaynağı kullanarak gerçekleştirmek; Ancak, kitle kalibrasyon özelleştirilmiş olanlar da dahil olmak üzere herhangi bir uyumlu kaynakları ile gerçekleştirilebilir.
- İyon transferi tüp (ITT) Kütle Spektrometre > 100 ° c sıcaklık ayarlayın En yüksek sıcaklık 350 ° C'de ayarlayabilirsiniz rağmen bazı bileşiklerin ayrışma neden olabilir. Bu nedenle 150° C bu deneyde kullanılır.
Not: > 100 ° c örnekleme ağzının sıcaklığını bir örnekleme orifis yerine ITT featuring Kütle Spektrometreleri için ayarla - ESI solvent ve akış hızı uygun ESI solvent solvent (örneğin, polarizasyon ve volatilite) ve hedeflenmiş bileşikler (örneğin, proton benzeşme) özelliklerini temel alarak seçin. Bir su karışımı ve metanol içinde çeşitli oranları genellikle ESI solvent25kullanılmıştır. Bu deneyde, su kullanmak için yüksek iyonlaşma verimlilik oldu %0,1 (v/v) formik asit içeren bu çözelti13,19,23bildirdi. ESI solvent akış hızı aralığı 0-1.5 kümesi içinde μL/dak ve 200 nL/dak.
Not: Degas ESI solvent kullanmadan önce 30 dk için. - Sn-nanoESI kaynak parametreleri, esas olarak nanoESI gerilim ve nanoESI kılcal ipucu konumu en iyi duruma getirme. Gerilim sık 2.0 4.5'e aralıkları. kV. Kullanım 2,5 kV burada.
Not: Akış oranı arttıkça daha yüksek ESI gerilim uygulanır. Ucu ve Kütle Spektrometre delik arasındaki uzaklığı 1'den 5 mm ayarlanabilir. Sonra en iyi duruma getirme, Kütle spektrumunda gözlenen normalleştirilmiş Yoğunluk düzeyi (NL) > 1 x 10 olmalıdır6 ve toplam iyon Kromatografik (TIC) varyasyon her iki pozitif ve negatif iyon algılaması mod % < 10 olmalıdır. Kütle spektrumu ve TIC m/z 50-750 kitle aralığında elde edilir. - Saf gaz kaynağına uygulamak. Kapalı hava UOB'ler etkisinin azaltılmasını amaçlayan, isteğe bağlı bir adım bu. Saf azot gazı (N2, % 99.99) veya saf hava-ebilmek var olmak kullanılmış. Saf gaz varlığı ile Kütle spektrumunda gözlenen NL > 1 x 10-meli var olmak5 ve TIC varyasyon her iki pozitif ve negatif iyon algılaması mod % < 10 olmalıdır. Yüksek saflıkta N2 burada kullanılan ve 0, 8 L/dak teslim.
Not: Toplam akış oranı saf gaz ve nefes doğal gaz debisi Kütle Spektrometre ağız yoluyla daha yüksek olmalıdır.
3. dışarı solunan nefes ölçüm
- Kapalı hava nefes ve bir sabit akış hızı, akciğerlerde tüm hava dışarı nefes almak için normal bir soluk verme gerçekleştirmek. Soluk verme akış hızı bir Manometre veya konuya görünür bir debimetre izlemek. Teflon (PTFE) boru nefes gaz23sunmak için kullanın.
- Su buharı tüp içinde yoğunlaşma önlemek için boru / 80-100 oC7,23,27 bir ısıda ısı veya bir Nafion kurutma makinesi28,29kullanın. Bu deneyde, 0,4 L/dk debimetre tarafından kontrol edilen konu ekshale.
- Debimetre su buharı dışarı solunan nefeste kaldırıp AKIS METRESI prizine bağlamak için bir Nafion boru (uzunluğu 60 cm) için giriş PTFE boru (uzunluğu 13 cm, kimlik 4 mm) bağlayın. Bu bir soluk verme ölçüm için < 30 alır.
- 4-6 çoğaltılmış ölçümleri28,29gerçekleştirin.
- Karıştırıcı etkileri en aza indirmek için yeme, içme ve ölçümler23önce onların dişler en az 30 dk fırçalama katılımcıların var.
Not: iç hava UOB'ler etkisinden en aza indirmek için bu iç hava26yerine saf gaz nefes bildirilmiştir. Nafion boru kullanıldığında, kutup bazı bileşikler kaybolabilir. - Ölçüm sırasında iyon yoğunluğu ya da değil enstrümanın doğrusal algılama sınırı aşarsa kontrol edin. Sinyal doygunluk pratik örnek bileşik üzerinden yol açmaz bir artifakı tepe yol açabilir. Burundan nefes tarafından ortam UOB'ler ve parçacıklar parçası kaldırılıyordu; Ancak, bu bileşiklerin burun pasajlar da algılanabilir dikkat çekicidir.
4. bir nefes parmak izi ve bir bileşik zaman iz elde etmek
- Chromatograms ve kitle spectra elde etmek. Yazılım (örneğin, Xcalibur) kayıt chromatograms ve kitle spectra kullanın. Çünkü bu doğrudan MS analizi ve Kromatografik hiçbir ayrım gerçekleştirilir, toplam iyon Kromatografik (TIC) aslında zaman izleme kitle spectra algılanan tüm sinyallerin gösterir ve ayıklanan iyon Kromatografik (EIC) zaman iz gösterir bir Belirtilen bileşik.
Not: diğer ticari Kütle Spektrometreleri için chromatograms ve kitle spectra karşılık gelen veri toplama yazılımı tarafından alınabilir. - Dışarı solunan nefes parmak izi dışarı solunan nefes kullanılarak ölçülen tarama sayısı içinde TIC seçerek elde etme. Bu taramalar ortalama yazılım tarafından temsil eden bir kitle spektrum elde edilir.
- Arka plan doruklarına nefes parmak izi üzerinden elemek için yazılımı arka plan çıkarma aracını kullanın. Lütfen üreticinin sağladığı kullanıcı Kılavuzu'na başvurun. Kısaca, hiçbir nefes örnek tanıttığında taramalar aynı sayısını seçin ve arka plan kütle spektrumu nefes parmak izi üzerinden çıkarın.
Not: Bu yöntemde üç kez standart sapması arka plan sinyal nefes parmak izi özelliklerinde belirlemek için eşik tanımlanır. Diğer ticari Kütle Spektrometreleri için arka plan çıkarma karşılık gelen veri toplama yazılımı tarafından gerçekleştirilebilir.
- Arka plan doruklarına nefes parmak izi üzerinden elemek için yazılımı arka plan çıkarma aracını kullanın. Lütfen üreticinin sağladığı kullanıcı Kılavuzu'na başvurun. Kısaca, hiçbir nefes örnek tanıttığında taramalar aynı sayısını seçin ve arka plan kütle spektrumu nefes parmak izi üzerinden çıkarın.
- Belirtilen bir bileşik zaman iz elde edilir. Hedeflenen bir bileşik zirvesine nefes parmak izi ve izleme bahçedeki daha sonra yazılım tarafından kazanılır saat seçin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Şekil 3 m/z 50-750 her iki pozitif ve negatif iyon algılama modu altında kaydedilen kitle aralığında nefes parmak gösterir. 291 tepeler (en yüksek yoğunluk > 5.0x104) ve 173 tepeler (en yüksek yoğunluk > 3.0x104) arka plan düşülen nefes parmak pozitif ve negatif iyon algılama modlarında içinde sırasıyla gözlenmiştir. Kitle spectra Peaks'e tanımlamak için önceden yayınlar için Ayrıntılar12,18,24,29bakın. Kısacası, uçucu metabolitleri ve UOB'ler kapalı hava algılandı. Örneğin, m/z 74.0606 zirve (şekil 3a) dışarı solunan N, N-dimethylformamide veya aminoactone insan Metabolome veritabanı (HMDB) göre sonuç; tepeler m/z 462.1447 ve m/z 536.1638 (şekil 3a) vardır dışarı solunan amonyak ve polysiloxanes (laboratuvar kirleticiler)12adducts. -4.0 tipik kitle doğruluk değerleri pozitif ve negatif iyon algılama modlarında-13.5 ppm ve-20.3-1.3 ppm, anılan sıraya göre. Şekil 4 indol, altı çoğaltılmış ölçümleri bir konudan dışarı solunan nefes tarafından algılanan tipik bir endojen bileşik zaman iz sunar. Az 7 dk tüm altı ölçümler için alır.
Şekil 1. Şematik SESI-MS analizinde UOB'ler dışarı solunan nefes için. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 2. (a) bir şematik diyagramı ve bu deneyde kullanılan sn-nanoESI kaynağı (b) bir fotoğrafı. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3. Arka plan düşülen nefes parmak pozitif (a) ve (b) negatif iyon algılama modu m/z 50-750 kitle aralığında elde. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4. Saat altı çoğaltılmış ölçümleri bir konudan dışarı solunan nefes tarafından algılanan indol iz. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bir ticari nanoESI kaynağını temel alan sn-nanoESI kaynak oluşturmak yoluyla, iyonlaşma verimliliği bir ESI kaynak30kullanarak daha yüksek olduğunu. İşlem yalıtarak gibi Ayrıca, iyonlaşma verimliliği daha da kapalı bir odaya artırıldı ortam arka plan havadan ve aynı zaman gaz örnek ve sprey tüy arasında karıştırma kolaylaştırır. Sn nanoESI kullanarak, daha az parametrelerini optimize yükleme, uygulama ve bakım için daha kolay bir ESI kaynağına göre gerekir.
Sinyal yok gözlenen veya nefes çözümlemesini sn-nanoESI-MS tarafından önemli ölçüde duyarlılık azalır, bir sprey Kapiler uç konumunu ve aynı zamanda damlacıkları kılcal ucundaki oluşumunu kontrol etmelisiniz. Kütle Spektrometre delik ile hizalayın. Yeni bir sprey kılcal sprey kılcal engellenir veya ucu kontamine değiştirin. Aksi takdirde, ITT enstrümanın bloke veya bulaşmış olup olmadığını denetlemek. Eski yerine koymak veya ITT temiz. ESI gerilim kapiller sprey denetlemeden önce açın. Oda sıcaklığında ITT sıcaklık ayarlayın ve sıcaklık düşer kadar bekleyin.
SESI-HRMS gerçek zamanlı nefes analiz4,6,12teknik bir hassas ve seçici olmak kanıtlanmıştır. Son birkaç yıl içinde bu tekniği başarıyla uygulandı tartmanın sirkadiyen değişim3,6, izleme farmakokinetik7,8, tanımlayıcı metabolik yollar5, vb . Son zamanlarda, insan nefes amino asitlerin başarıyla SESI-MS tarafından kantitatif analiz5olağanüstü sürüyor ilk kez sayısal. Daha fazla araştırma ile SESI-HRMS kendisi yararlı ve verimli noninvaziv klinik yöntemi olarak kurabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Bu eser mali Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin tarafından (No. 91543117) desteklemiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ultrapure water | Merck Millipore, USA | MPGP04001 | Resistance >18.2 MΩ·cm |
| Formic acid | Sigma-Aldrich, USA | F0507 | Corrosive to the respiratory tract. |
| Nitrogen gas | Guangzhou Shiyuan Gas Co. Ltd., China | N.A.a | Purity >99.99% |
| Q Exactive hybrid quadrupole-orbitrap mass spectrometer | Thermo Scientific, USA | 02634L(S/N) | Beware of high voltage and high temperature |
| NanoESI source | Thermo Scientific, USA | ES002373(S/N); ES071(P/N) | Beware of high voltage and high temperature |
| Nano LC pump | Thermo Scientific, USA | 5041.0010A(P/N) | / |
| Xcalibur software (Version 3.0) | Thermo Scientific, USA | BRE0008596 | / |
| Dino-Lite Digital Microscope | Tech Video System (SuZhou) Co.Ltd., China | CQ401833R(S/N) | / |
| Nafion tubing | Perma Pure LLC, USA | ME60 | / |
| PTFE tubing (I.D. 4 mm) | Dongguan Hongfu Insulating Material Co. Ltd., China | N.A. | Beware of the possible loss of polar compounds |
| Mass flow controller | Line-Tech, Korea | M15122007 (S/N) | / |
| Flow meter | Yuyao Industrial Automation Meter Factory, China | 40784 | / |
| aN.A.: not available. |
References
- De Lacy Costello, B., et al. A review of the volatiles from the healthy human body. J. Breath Res. 8 (1), 014001-014030 (2014).
- Phillips, M., Greenberg, J. Ion-trap detection of volatile organic compounds in alveolar breath. Clin. Chem. 38 (1), 60-65 (1992).
- Martínez-Lozano Sinues, P., et al. Circadian variation of the human metabolome captured by real-time breath analysis. PLoS One. 9 (12), 0114422-0114438 (2014).
- Garcia-Gomez, D., et al. Secondary electrospray ionization coupled to high-resolution mass spectrometry reveals tryptophan pathway metabolites in exhaled human breath. Chem. Common. 52 (55), 8526-8528 (2016).
- Garcia-Gomez, D., et al. Real-time quantification of amino acids in the exhalome by secondary electrospray ionization-mass spectrometry: A proof-of-principle Study. Clin. Chem. 62 (9), 1230-1237 (2016).
- Martínez-Lozano Sinues, P., Kohler, M., Brown, S. A., Zenobia, R., Dallmann, R. Gauging circadian variation in ketamine metabolism by real-time breath analysis. Chem. Common. 53 (14), 2264-2267 (2017).
- Gamez, G., et al. Real-time, in vivo monitoring and pharmacokinetics of valproic acid via a novel biomarker in exhaled breath. Chem. Common. 47 (17), 4884-4886 (2011).
- Li, X., et al. Drug pharmacokinetics determined by real-time analysis of mouse breath. Angew. Chem. Int. Ed. 54 (27), 7815-7818 (2015).
- Amorim, L. L. A., Cardeal, Z. L. Breath air analysis and its use as a biomarker in biological monitoring of occupational and environmental exposure to chemical agents. J. Chromatogr. B. 853 (1-2), 1-9 (2007).
- Bajtarevic, A., et al. Noninvasive detection of lung cancer by analysis of exhaled breath. BMC Cancer. 9, 348 (2009).
- Smith, D., Wang, T. S., Pysanenko, A., Španěl, P. A selected ion flow tube mass spectrometry study of ammonia in mouth- and nose-exhaled breath and in the oral cavity. Rapid Commun. Mass Spectrom. 22 (6), 783-789 (2008).
- Li, X., Huang, L., Zhu, H., Zhou, Z. Direct human breath analysis by secondary nano-electrospray ionization ultrahigh resolution mass spectrometry: Importance of high mass resolution and mass accuracy. Rapid Commun. Mass Spectrom. 31 (3), 301-308 (2017).
- Martínez-Lozano, P., Fernandez de la Mora, J. Electrospray ionization of volatiles in breath. Int. J. Mass Spectrom. 265 (1), 68-72 (2007).
- Zeng, Q., et al. Detection of creatinine in exhaled breath of humans with chronic kidney disease by extractive electrospray ionization mass spectrometry. J. Breath Res. 10 (1), 016008-016015 (2016).
- Chen, H. W., Wortmann, A., Zhang, W. H., Zenobi, R. Rapid in vivo fingerprinting of nonvolatile compounds in breath by extractive electrospray ionization quadrupole time-of-flight mass spectrometry. Angew. Chem. Int. Ed. 46 (4), 580-583 (2007).
- Benoi, F. M., Davldson, W. R., Lovett, A. M., Nacson, S., Ngo, A. Breath analysis by atmospheric pressure ionization mass spectrometry. Anal. Chem. 55 (4), 805-807 (1983).
- Bregy, L., Martínez-Lozano Sinues, P., Nudnova, M. M., Zenobi, R. Real-time breath analysis with active capillary plasma ionization-ambient mass spectrometry. J. Breath Res. 8 (2), 027102-027110 (2014).
- Gaugg, M. T., et al. Expanding metabolite coverage of real-time breath analysis by coupling a universal secondary electrospray ionization source and high resolution mass spectrometry-a pilot study on tobacco smokers. J. Breath Res. 10 (1), 016010-016020 (2016).
- Martínez-Lozano, P., Zingaro, L., Finiguerra, A., Cristoni, S. Secondary electrospray ionization-mass spectrometry: breath study on a control group. J. Breath Res. 5 (1), 016002-016012 (2011).
- Martínez-Lozano Sinues, P., Zenobi, R., Kohler, M. Analysis of the exhalome a diagnostic tool of the future. Chest. 144 (3), 746-749 (2013).
- Martínez-Lozano Sinues, P., Fernandez de la Mora, J. Direct analysis of fatty acid vapors in breath by electrospray ionization and atmospheric pressure Ionization-Mass Spectrometry. Anal. Chem. 80 (21), 8210-8215 (2008).
- Martínez-Lozano Sinues, P., et al. Breath analysis in real time by mass spectrometry in chronic obstructive pulmonary disease. Respiration. 87 (4), 301-310 (2014).
- Martínez-Lozano Sinues, P., Kohler, M., Zenobi, R. Monitoring diurnal changes in exhaled human breath. Anal. Chem. 85 (1), 369-373 (2013).
- Chen, H. W., Zenobi, R. Neutral desorption sampling of biological surfaces for rapid chemical characterization by extractive electropray ionization mass spectrometry. Nat. Protoc. 3 (9), 1467-1475 (2008).
- Li, X., Hu, B., Ding, J., Chen, H. W. Rapid characterization of complex viscous samples at molecular levels by neutral desorption extractive electrospray ionization mass spectrometry. Nat. Protoc. 7 (6), 1010-1025 (2011).
- Gordon, S. M., Szidon, J. P., Krotoszynski, B. K., Gibbons, R. D., O'Neill, H. J. Volatile organic compounds in exhaled air from patients with lung cancer. Clin. Chem. 31 (8), 1278-1282 (1985).
- Ding, J. H., et al. Development of extractive electrospray ionization ion trap mass spectrometry in vivo breath analysis. Analyst. 134 (10), 2040-2050 (2009).
- Basum, G., Dahnke, H., Halmer, D., Hering, P., Mürtz, M. Online recording of ethane trances in human breath via infrared laser spectroscopy. J. Appl. Physiol. 95 (6), 2583-2590 (2003).
- Tøien, Ø Automated open flow respirometry in continuous and long-term measurements: design and principles. J. Appl. Physiol. 114 (8), 1094-1107 (2013).
- Huang, L., Li, X., Xu, M., Huang, Z. X., Zhou, Z. Identification of relatively high molecular weight compounds in human breath using secondary nano electrospray ionization ultrahigh resolution mass spectrometry. Chem. J. Chinese U. 38 (5), 752-757 (2017).
