Waiting
登录处理中...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

פרוטוקול קליני של ייצור רקמת שומן-Derived השבר בכלי הדם סטרומה עבור פוטנציאל התחדשות הסחוס

Published: September 29, 2018 doi: 10.3791/58363
Automatic Translation
*1, *1,2, 1, 2, 2, 2, 2
1Mipro Medical Clinic, 2National Leading Research Laboratory, Department of Biological Sciences, Myongji University
* These authors contributed equally

Summary

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לייצר של רקמת שומן-derived סטרומה וסקולרית שבר ויישומו לשיפור הברך פונקציות על-ידי התחדשות רקמות הסחוס כמו בני אדם חולים עם דלקת מפרקים ניוונית.

Abstract

דלקת מפרקים ניוונית (OA) הוא אחד של הפרעות מתישה הנפוץ ביותר. לאחרונה, ניסיונות רבים נעשו כדי לשפר את הפונקציות של הברכיים באמצעות צורות שונות של גזע mesenchymal (MSCs). ב קוריאה, תרכיזים מח עצם ו חוט נגזר דם בתאי גזע אושרו על ידי המזון קוריאנית סמים המינהל (KFDA) עבור התחדשות הסחוס. בנוסף, כבר מותר של רקמת שומן-derived סטרומה וסקולרית שבר (SVF) על ידי KFDA לזריקות משותפת בחולים אנושיים. SVF נגזר רקמת שומן עצמיים מכיל מטריצה חוץ-תאית (ECM) בנוסף בתאי גזע mesenchymal. ECM מפריש ציטוקינים שונים, אשר, יחד עם חומצה היאלורונית (HA), טסיות דם עשיר פלזמה (PRP) מופעל על ידי סידן כלורי, עשוי לסייע MSCs כדי להתחדש הסחוס ולשפר את הברך פונקציות. במאמר זה הצגנו פרוטוקול לשיפור הברך פונקציות על-ידי התחדשות רקמות הסחוס כמו בחולים אנושיים עם OA. התוצאה של הפרוטוקול דווחה לראשונה בשנת 2011 ולאחריו מספר פרסומים נוספים. הפרוטוקול כרוך שאיבת שומן כדי לקבל lipoaspirates עצמיים מעורבבים עם collagenase. תערובת זו lipoaspirates-collagenase ואז לחתוך, הומוגני להסיר גדול סיבי רקמת זה ייתכן סותמים את המחט במהלך ההזרקה. לאחר מכן, התערובת מודגרת להשיג SVF נגזר רקמת שומן. וכתוצאה מכך נגזר רקמת שומן SVF, המכיל גם רקמת שומן-derived MSCs וגם שרידי ECM, מוזרק הברכיים של חולים, בשילוב עם HA ומופעל סידן כלורי PRP. כלולים שלושה מקרים של חולים שטופלו באמצעות פרוטוקול שלנו וכתוצאה מכך שיפור של כאבי ברכיים, נפיחות, טווח התנועה יחד עם המגנטית ראיות רקמת סחוס hyaline דמוי.

Introduction

גזע mesenchymal (MSCs) ידועים יש את היכולת להתחדש הסחוס1,2,3,4,5,6. הם יכולים לקבל בקלות ממקורות שונים: מח עצם, דם טבורי, רקמת שומן בקרב רבים אחרים. בין מקורות אלה, רקמת שומן הוא המקור היחיד שבו ניתן להשיג מספר מספיק של MSCs ללא כל הרחבה תרבות להתחדש הסחוס הגדרות קליניים7,8. מח עצם אוטולוגי סטרומה השבר בכלי הדם (SVF) ניתן להשיג בקלות גם כן. אולם, מספר תאי גזע הכיל במח המורחב-תרבות הוא נמוך מאוד7,8. דם טבורי עשוי להכיל מספר מספיק של MSCs. עם זאת, דם טבורי אינה מקור זמין SVF עצמיים.

שיטות רבות של רקמת שומן עיבוד כדי להשיג SVF זמינים עבור יישומים קליניים. בין אלה, השיטה של קבלת MSCs של רקמת שומן באמצעות collagenase, שפותחה ומאושר על-ידי צוק. et al. 5 , 6, מקובל מאוד. שיטה זו של שימוש collagenase שונתה ליישומים קליניים באורטופדיה. כדי להחיל הגדרות קליני, המערכת להיות מערכת סגורה כדי לשמור על העקרות תוך שמירה על הנוחות. שינוי מסוים אחד שהוצגו במאמר זה כרוך המגון lipoaspirates. Lipoaspirates בגודל קטן מתעכלים מהר יותר גדולים כי הם וכתוצאה מכך התפלגות לא אחידה של רקמת שומן יחסית. יתר על כן, אלה lipoaspirates בגודל גדול יותר עשויה לייצר סיבי הרקמות זה יכול סותמים את מזרקים ומחטים בעת ביצוע משותף זריקות9,10. על מנת למנוע בעיות אלה, lipoaspirates עשוי להיות הומוגני על ידי חיתוך לקמץ את lipoaspirates לפני הדגירה עם collagenase. SVF וכתוצאה מכך נגזר רקמת שומן עשויה להכיל יותר אחיד מטריצה חוץ-תאית (ECM) בהשוואה lipoaspirates שאינם הומוגני11. ה-ECM רעוע הכלול את SVF יפעלו כמו לגרדום12.

בשנת 2009, כבר מותר SVF נגזר רקמת שומן עצמיים על ידי המזון קוריאנית סמים המינהל (KFDA) כאשר מעובד בתוך מתקן רפואי עם עיבוד מינימלי על ידי רופא13. לאחר מכן, יש כבר מנוצל SVF נגזר רקמת שומן עצמיים כסוכן פוטנציאל לשיפור הפונקציות הברך בחולי דלקת מפרקים ניוונית (OA) על ידי פוטנציאל התחדשות רקמות הסחוס כמו10,14,15 , 16 , 17 , 18 .

בשנת 2011, פאק הראה לראשונה כי נגזר רקמת שומן בתאי גזע (השיקופיים) הכלול SVF רקמת שומן-derived יכול לשפר את הברך פונקציות פוטנציאל התחדשות רקמות הסחוס כמו בחולי OA אנושי כאשר הזריקו טסיות דם עשיר פלזמה (PRP) 14. בנוסף, פאק. et al. דיווחו על נתוני בטיחות בחולים 91 מעורבים 2013. את שיעור היעילות הממוצע דיווח נתוני בטיחות זה היה 67%15. כתוצאה מכך, מחקרים נוספים על ידי פאק. et al. הראה הברך משופרת פונקציות שעשויות להיות עקב התחדשות רקמות הסחוס כמו בחולים עם מניסקוס דמעה לבין chondromalacia patellae10,16,17 ,18. מבוסס על מאמרים דיווח, זה ידוע כי מספר תאי גזע הכלול 100 גרם של רקמת שומן מעובד על-ידי הפרוטוקול שהוצג במאמר זה עשויים לנוע בין 1,000,000-40,000,000 בהתאם המטופלים מאפיינים8, 19 , 20 , 21 , 22 , 23.

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול קליני של OA בברך האדם באמצעות SVF נגזר רקמת שומן עצמיים עם HA, PRP מופעל עם סידן כלורי. הגרסה הראשונה של פרוטוקול קליני זה, הכוללים מערכת סגורה, ידנית כדי לשמור על העקרות, דווח ב- 201114. פרוטוקול זהה אופטימלי, שמירה על עקרות, ודיווח10,2013 ו ריו דה ז'ניירו15. . הנה, פרוטוקול ממוטבת מוצג. סקירה סכמטי של הפרוטוקול מוצג באיור1.

Figure 1
איור 1: סקירה סכמטי של הפרוטוקול. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

אישור והסכמה לדווח בעקבות הדו חות היו ויצטרף ועדת דירקטוריון סקירה מוסדיים האוניברסיטה Myongji (MJUIRB). יתר על כן, פרוטוקול קליני זה היה בהתאם להנחיות הצהרת הלסינקי ורגולציה KFDA. לקבלת מידע אודות הליכי, מידיעה ההסכמות התקבלו מן המטופלים.

1. שאיבת שומן

הערה: בצע עם סטרילי טכניקה.

  1. השתמש לקריטריוני ההכללה הבאה: MRI (1), עדות שלב 3 OA; (2) זכר או נקבה; (3) מעל גיל 18; (4) מספיק רקמת שומן (100-110 גר') עבור שאיבת שומן; (5) נכונות להמשיך עם התערבות כירורגית; (6) כשל של ניהול שמרנית; (7) כאב השבתת מתמשך.
  2. השתמש הקריטריונים הדרה הבאים: (1) מחלות דלקתיות או רקמת חיבור פעיל חשב להשפיע על מצב הכאב (קרי,זאבת, דלקת מפרקים שגרונית, פיברומיאלגיה); (2) פעיל ההפרעה האנדוקרינית העלולים להשפיע מצב הכאב (קרי, בלוטת התריס, סוכרת); (3) פעיל הפרעה נוירולוגית העלולים להשפיע מצב הכאב (קרי, נוירופתיה, טרשת נפוצה); (4) מחלת ריאות פעיל המחייב שימוש תרופות; (5) אין היסטוריה של זריקות סטרואידים משותף כבר 3 חודשים.
  3. להכניס את החולה לחדר הניתוח עם ברדס A class הביולוגי ומניחים לו (או לה) במצב פרקדן.
  4. לנקות את אזור הבטן של המטופל עם betadine 5% (povidone-יוד), לעטוף את החולה בטכניקה סטרילי, לחשוף את האזור נקי של הבטן עבור שאיבת שומן.
  5. כ 5 ס infero-רוחבית מ הטבור, עזים ומתנגד שני אתרים (אחד בצד השמאל ואת השני מצד ימין הטבור) של החתך to-להיות-עשה שימוש 2 מ של לידוקאין 2% ללא אפינפרין עם מחט מזרק 5-mL (מד 25, 1½ אינץ) על ידי הזרקת כל אתר ברמה באפידרמיס.
  6. עזים ומתנגד האתר של חתך to-להיות-שנעשה באמצעות 5 מ של פתרון בפוליצר (500 מ ל מ ל נורמלי מלוחים, 40, של לידוקאין 2%, 20 מ של 0.5% נמשך, 0.5 מ של אפינפרין 1:1000) במזרק 10-mL עם מחט (25 מד, 1½ אינץ ').
  7. לעשות 2 חתכים של 0.5 ס מ כ 5 ס מ מתחת הטבור רוחבית על ידי התכווצות העור כדי להעלות את העומק של רמת תת עורית.
  8. באמצעות להב מס 11, לתקוע את העור מוגבה לחדור דרך לשלב תת עורית אך לא לחדור דרך דופן הבטן.
  9. באמצעות 20 ס מ 16-מד בצינורית, עזים ומתנגד רמת תת עורית של כל החלק התחתון של הבטן, אשר to-להיות-liposuctioned, עם 700 עד 800 מ של הפתרון בפוליצר.
  10. לאחר גימור חדירה של הבטן התחתונה כל עם הפתרון בפוליצר, להכין מנגנון שאיבת שומן על-ידי חיבור של בצינורית 3.0 מ מ מחובר מזרק של 60 מ ל (או של 30 מ ל) עבור שאיבת שומן ידני או של בצינורית שתוכנן במיוחד 3.0 מ מ מחובר צנטריפוגה קיט, מזרק סגור-מערכת לצורך שמירה על העקרות, מחובר למכונה ואקום עבור שאיבת שומן בסיוע ואקום.
  11. לבצע שאיבת שומן כדי להשיג 100-110 גרם של רקמת שומן לא כולל פתרון בפוליצר. בעת ביצוע שאיבת שומן, רקמת שומן ניתן להשיג יחד עם הפתרון בפוליצר, אשר צריכים להיות מופרדים ו הוסר.
  12. כדי להפריד את הפתרון בפוליצר, תחילה על ידי כוח המשיכה, להעביר את רקמת שומן בערכה צנטריפוגה מזרק 60 מ ל ולמקם את המזרק למטה (דהיינו, שהחלק של המזרק נמצאת בתחתית). מאת מחכה 5-6 דקות, יופרדו את רקמת שומן ונוזלים בפוליצר. הסר את הנוזלים בחלק התחתון של המזרק על-ידי לחיצה על החלק העליון של הבוכנה מזרק.
  13. בצע את השלבים לעיל 1.9-1.11 עד סך של 100-110 גרם של רקמת שומן (lipoaspirates) לכל ברך שנצבר.

2. הכנת התערובת עולה/ECM עם מערכת סגורה סטרילי

  1. לאחר הפרדת הפתרון בפוליצר על-ידי כוח הכבידה ולאסוף 50-55 גר' lipoaspirates לכל כל ערכה צנטריפוגה 60 מ ל, מערכת סגורה סטרילי, למקם את ערכות צנטריפוגה 2 לתוך צנטריפוגה מיכל דלי ספין-x 1600 g עבור 5 דקות, עיבוי lipoaspirates, הפרדת הנוזלים מן ובינות לרקמה. זה תהליך נוסף וידחוס, lipoaspirates יכולות להפיק שמן שומני במקרים מסוימים.
  2. והיזהר לא לנער, להסיר את המכסה הבטיחותי ואת התקע בחלק התחתון של ערכת צנטריפוגה.
  3. הסר את הנוזלים התחתון על ידי לאט לוחץ על ראש הבוכנה של ערכת צנטריפוגה.
  4. על המזרק נפרדת 60 מ ל, להמיס 10 מ ג של collagenase (5 מ"ג של collagenase ספציפיות עבור רקמת חיבור24 ) ו- 5 מ"ג של collagenase מסוימת של רקמת שומן25, 50 מ של תמיסת מלח.
  5. מערבבים כ 25-30 מ של lipoaspirate מרוכז עם collagenase המומס (5 מ"ג של collagenase ספציפיות עבור רקמת חיבור) ו- 5 מ"ג של collagenase ספציפיות עבור רקמת שומן ביחס של 1:1 (v: v) על-ידי חיבור המזרק 60 מ ל ערכת צנטריפוגה באמצעות מחבר מיוחדים.
  6. ביסודיות מערבבים את lipoaspirate מרוכז, את collagenase על ידי דחיפת התכנים בין המזרק 60 מ ל ערכות צנטריפוגה באמצעות מוט או סוחר.
  7. להעביר את התערובת את lipoaspirate, את collagenase חזרה מזרקים 60 מ.
  8. התחבר כל מזרק 60 מ ל המכיל את התערובת עם מהמגן רקמות אשר מכיל את הלהבים.
  9. להתחבר עם מזרק ריק 60 מ ל הקצה השני של מהמגן.
  10. לדחוף את התערובת אל המזרק 60 מ ל אחרים דרך מהמגן 4-6 פעמים, וכתוצאה מכך הביתור ועל הא של lipoaspirate.
  11. העבר את lipoaspirate homogenized ואת התערובת collagenase לחזור 60 מ ל ערכות צנטריפוגה דרך מחבר מיוחדים
  12. מקם את ערכות צנטריפוגה במיכל שימוקם בתוך אינקובטור כי כבר מחומם מראש ב- 37 מעלות צלזיוס.
  13. דגירה צנטריפוגה שתי ערכות עם התערובת homogenized ב 37 מעלות צלזיוס למשך 40 דקות תוך כדי סיבוב ב 45 rpm.
  14. לאחר 40 דקות של דגירה, להסיר את המכולה החממה בצורה סטרילית. לאחר מכן, להסיר את ערכות צנטריפוגה, מקם אותם בתוך מכונת צנטריפוגה.
  15. Centrifuge את תערובות ב x 800 גרם במשך 5 דקות להפריד את רקמת שומן-derived SVF.
  16. לאחר לצנטריפוגה, להסיר את תגובת שיקוע (אשר כולל collagenase, מתעכל רקמת שומן) של כל ערכות צנטריפוגה על-ידי הסרת הכיפה מזרק על ראש הבוכנה והצבת מזרק 30 מ על הבוכנה פתיחה באמצעות מזרק נעל חיבור.
  17. לאט לאט לחץ כלפי מטה החלק חבית של המזרק 30 מ עבור תגובת שיקוע למלא לתוך המזרק 30 מ.
  18. לחץ על הקנה מזרק 30 מ ל כל הדרך mL 3-4 האחרון של החלק התחתון של ערכת צנטריפוגה, להשאיר רק את האחרון 3-4 מ של רקמת שומן-derived SVF. תגובת שיקוע נמחקת.
  19. הסר את המזרק 30 מ ל מהחלק העליון של הבוכנה ולמלא את המזרק עם דקסטרוז 5% בתמיסת הרטמן (D5LR).
  20. על-ידי הצמדת את המזרק 30 מ ל מלא D5LR על ראש הבוכנה פתיחה, למלא את ערכות צנטריפוגה, המכילים 3-4 מיליליטר SVF נגזר רקמת שומן, עם D5LR עד 55 מ ל.
  21. הסר את המזרק 30 מ ל, קאפ על הבוכנה, centrifuge ערכות צנטריפוגה שוב ב 300 x גרם במשך 4 דקות.
  22. חזור על הצעדים 2.17-2.21 סך של 4 כביסות. Collagenase בשימוש הוא xenogenic. לכן, רוב collagenase יוסר על ידי 4 כביסות. עם זאת, לאישור ה-FDA, כוונון של הפרוטוקול ייתכן שיהיה צורך להסיר לחלוטין את שאריות collagenase באמצעי האחסון הסופי, למרות הכמות הנוכחית של משקעים collagenase עשוי להיות מספיק זניח של חולים שאין להם יותר קליני תופעות לוואי.
  23. לאחר צנטריפוגה 4th , על מנת לקבל את SVF הסופי להזרקה, להסיר את כובע הבטיחות ואת התקע ליד הפתח התחתון של ערכת צנטריפוגה, מבלי לרעוד או לכבות את הקיט צנטריפוגה.
  24. לצרף מזרק 20 מ"ל בתחתית ערכת צנטריפוגה לפתוח באמצעות מחבר שתוכנן במיוחד.
  25. למשוך את הבוכנה של המזרק מספר פעמים הלוך ושוב לזעזע את התאים התיישבו על החלק התחתון של ערכת צנטריפוגה.
  26. להסיר את האחסון הכולל הרצוי של SVF המכיל גם את השיקופיים וגם את ה-ECM יחד עם תאים ורקמות אחרות (בדרך כלל כ 3-4 מ"ל של כל ערכה צנטריפוגה לזריקות משותפת הברך).

3. PRP הכנה עם סטרילי טכניקה

  1. בעת הכנת את השיקופיים ואת ה-ECM, צייר 30 מ של דם עצמיים עם 2.5 מ של פתרון דקסטרוז ציטראט קרישה.
  2. להעביר את הדם נמשך ערכות צנטריפוגה 60 מ.
  3. Centrifuge הדם מצוירות ב x 730 גרם במשך 5 דקות ולהסיר את תגובת שיקוע לתוך ערכה חדשה של צנטריפוגה 60 מ. Centrifuge את תגובת שיקוע ב x 1300 גרם במשך 4 דקות, והתוצאה היא 3-4 מיליליטר PRP.
  4. ממש לפני הזריקה, להוסיף 3% (w/v) סידן כלורי ביחס של 10:2 (PRP: סידן כלורי, v: v) PRP כדי להפעיל אותו.
  5. להוסיף 0.5% (w/v) HA, בדומה לפיגום, PRP מופעל עם סידן כלורי. אלה השיקופיים עם ה-ECM, יחד עם PRP, מופעל על ידי סידן כלורי, HA מסמלת את התערובת עולה/ECM.

4. טיפול המבוסס על תערובת ASC/ECM

  1. לנקות את הברך של המטופל עם betadine 5%, לעטוף את זה בצורה סטרילית.
  2. ימשש הקדמי של הברך עבור מרחב משותף בין עצמות הטיביאלי, הירך.
  3. עזים ומתנגד ההזרקה שטחי עם לידוקאין מדולל (1 מ"ל של לידוקאין 1% מדולל עם 4 מ"ל של תמיסת מלח) מן העור רק מחוץ הקפסולה משותפת.
  4. עזים ומתנגד בתוך הקפסולה משותפת עם ropivacaine מדולל (1 מ"ל 0.75% ropivacaine מדולל עם 3 מ"ל של תמיסת מלח).
  5. לערבב 2 מ"ל של HA עד mL 6-8 של SVF הכלול מזרק 20 מ"ל המחבר מזרק-כדי-מזרק.
  6. באמצעות מחבר מזרק-כדי-מזרק, להוסיף 0.4 מ של סידן כלורי 3-4 מיליליטר עצמיים PRP זה הוכן כבר ולהיות מוכן בתוך מזרק 5-mL.
  7. משלבים 3.5-4.5 מ ל PRP/סידן כלורי מזרק 5 מ ל 8-10 מ"ל של HA/SVF תערובת של מזרק בפטרת באמצעות מזרק-כדי-מזרק מחבר.
  8. מיד להזריק את התערובת (בערך 12-15 מ"ל) לאט לאט לתוך המפרק tibio-הירך הקדמי של הברכיים באמצעות מחט בקוטר 18 מ מ 38 עם או ללא הדרכה אולטרסאונד.
  9. אחרי הזריקה, חבוש ההזרקה עם לחץ על ידי קיפול גאזה כותנה 4 x 4 4 פעמים הצבת קלטות על הגזה 4 x 4 מקופל.
  10. להנחות את המטופל להישאר עדיין במשך 60 דקות לאפשר את התא מצורף.
  11. להנחות את המטופל כדי להגביל פעילות מינימלית של 1 שבוע אחרי השחרור מהמרפאה.
  12. חזור אל הקליניקה שלוש זריקות נוספים של PRP מופעל על ידי סידן כלורי מעל 3 שבועות.

5. שלאחר הטיפול לעקוב

  1. להעריך החולה בשבוע של 2, 4 ו- 16 (18 או 22) כאב שיפור במונחים של סולם חזותי אנלוגי (VAS) ושיפור תפקוד מבחינת פיזיותרפיה פרמטרים. לקבוע מדד דירוג פונקציונלי (ו'), ווס, טווח התנועה (ROM) כמו שתואר לעיל26,27.
  2. בצע את החולה על ידי שלאחר הטיפול MRI 3 חודשים לאחר הטיפול.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

שלושה מטופלים (אחד נקבה בת 87 עם שלב 3 OA, אחד זכר בן 68 עם שלב 3 OA, נקבה אחת בת 60 עם שלב 3 OA) ללא כל העבר משמעותי ההיסטוריה הרפואית הציגה למרפאה עם כאב ברכיים מתמיד, נחשק עבור פוטנציאל עצמיים רקמת שומן-derived SVF טיפול. כל החולים שלושה היה הברך שלהם נבדק על ידי מומחה לכירורגיה אורטופדית היו מציעים לי החלפת ברך הכולל (TKR), היו מוכנים לעבור את הניתוח. לפני ההליך, כל החולים שלושה קיבלו מספר זריקות של סטרואידים ו HA ללא שום שיפור ממושך.

בת 87-קוריאני הנשי המטופל, בזמן הבדיקה, התלונן על כאבים עזים (VAS ציון 8; איור 2 א) ואילו בצד למנוחה. היא תיארה את הכאב יהיה הגדלת ([ו': 37; איור 2 א) בעת הליכה במעלה ובמורד המדרגות. על בדיקה גופנית, נרשמו משותף עדין נפיחות עם ירידה ROM ורכות עם כיפוף (איור 2B). עם זאת, אין רפיון רצועה היה מוערך. הבדיקות של מקמארי של Apley היו שליליות. לקבל MRI לפני טיפול הפגינו מדיאלי של גודל ירד יחד עם דפורמציה, השרייה, שאורכה. (איור 2C, 2E, 2 Gו- 2I).

המטופל השני, גבר בן 68 קוריאני, התלוננה על כאב חמור בברך השמאלית (VAS ציון: 7; איור 3A) ואילו בצד למנוחה. הכאב (ו': 33; איור 3A) תוארה הגדלת בעת שהלך במדרגות. בדיקה גופנית, היה עיוות מתון עם נפיחות פרקים קלה. ROM (איור 3B) ירדו. יתר על כן, אין רפיון רצועה היה מוערך. הבדיקות של מקמארי של Apley היו שליליות. לקבל MRI לפני טיפול הראה הסחוס דילול יחד עם גודל ירד ומעוות מדיאלי משני meniscectomy הקודם (איור 3C 3E, דור 3, 3עכשיו). המטופל אובחן לשלב 3 OA.

החולה השלישי, נקבה קוריאנית בת 60, גם דיווחו על כאב חמור (VAS ציון: 8; איור 4A) על השאר. הכאב (ו': 36; איור 4A) תוארה הגדלת בעת הליכה. החולה היה גם נפיחות בברך מתון וירידה ROM (איור 4B). אין רפיון רצועה היה מוערך. הבדיקות של מקמארי של Apley היו שליליות. לקבל MRI לפני טיפול הראו ירידה בגודל מדיאלי עם דפורמציה, השרייה, שאורכה, והיה הסחוס דליל (איור 4C 4E, 4 G, 4I).

תוכנית הטיפול. כל המטופלים נציג שלושה היו מוגבל לקחת סטרואידים, אספירין, תרופות אנטי דלקתיות לא סטרואידיות (Nsaid), תרופות צמחיות אסיה לפחות במשך שבוע לפני ההליך. לאחר נטילת MRI הדמיה מחקרים, lipoaspirates היו שהושג, יעובד כבורר המופנה לעיל. לאחר מכן, SVF נגזר רקמת שומן עצמיים המכיל השיקופיים, ECM, הא ו סידן כלורי-מופעל PRP עצמיים הוזרקו עד לברכיו ביום 0. לא היה שום סיבוך עקב liposuctions וזריקות משותפת. כתוצאה מכך, החולים חזר למרפאה בשבוע אחד, ואז שבועיים ולאחר מכן 3 שבועות לזריקות נוספים של HA, PRP עצמיים מופעל עם סידן כלורי.

התוצאה. לאחר השבוע השני של הזריקה תערובת ASC/ECM, ROM וכאב של המטופל נקבה בת 87-שיפור (איור 2A ו- 2B). עד השבוע ה-16, ROM וכאב של המטופל באופן משמעותי לשפר על ידי יותר מ-70% (איור 2A ו- 2B). MRI שלאחר הטיפול לאחר השבוע ה-16 הראה עובי רקמת סחוס hyaline דמוי מוגברת בצד המדיאלי של הברך (איור דו-ממדי, 2F, 2 Hו- 2J). לשם השוואה, שיעור היעילות הממוצע היה 67% נתונים באמצעות פרוטוקול קליני זה מעורבים מטופלים 91, דיווח ב- 201315.

Figure 2
איור 2: תוצאה של כאב מדידות (א) ומגוון של תנועה (ב); MRI הסאגיטלי (C-F) ונוף הפרונטליים (G-J) רציפים T2 של הברך מתיק המטופל 1. * מציין ממצא משמעותי סטטיסטית (p < 0.05). סריקות MRI טרום טיפול (C: התמונה רציפים, 5/20; E: 6/20; G: 10/20; ואני: 11/20) להראות נגעים סחוס (חיצים). סריקות MRI שלאחר הטיפול בגיל 16 שבועות (D: 6/20; F: 7/20; H: 10/20; ו- J: 11/20) מצביעים על התחדשות רקמות הסחוס דמוי (חץ) זה תוקן על-ידי טיפול המבוסס על תערובת של שמ ת/ECM. דמות זו שונתה מן הדוח הקודם של פאק. et al. 10. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

ROM וכאב של בת 68-זכר החולה השתפר אחרי בשבוע השני של הזריקה תערובת ASC/ECM (איור 3A ו- 3B). עד השבועה 18, ROM והכאב שלו משתפרת בצורה משמעותית נוספת עד 80% (איור 3A ו- 3B). לחזור על MRI לאחר 18השבוע הראה עלייה בשיא של רקמת סחוס hyaline דמוי בצד המדיאלי הקדמי של הברך (דמות תלת-ממד, 3F, 3 H ו- 3J).

Figure 3
איור 3 : תוצאה של כאב מדידות (א) ומגוון של תנועה (ב); MRI הסאגיטלי (C-F) ונוף הפרונטליים (G-J) רציפים T2 של הברך מתיק המטופל 2. * מציין ממצא משמעותי סטטיסטית (p < 0.05). סריקות MRI טרום טיפול (C: התמונה רציפים, 6/20; E: 7/20; G: 13/20; ואני: 14/20) להראות נגעים סחוס (חיצים). סריקות MRI שלאחר הטיפול בגיל 16 שבועות (D: 6/20; F: 7/20; H: 13/20; ו- J: 14/20) מצביעים על התחדשות רקמות הסחוס דמוי (חץ) זה תוקן על-ידי טיפול המבוסס על תערובת של שמ ת/ECM. דמות זו שונתה מן הדוח הקודם של פאק. et al. 10. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

ROM וכאב של המטופל נקבה בת 60-שיפור כ 50% לאחר השבוע השני של הזרקת תערובת ASC/ECM, (איור 4A , 4B). עד השבוע 22nd , הכאב והסבל ROM לשפר באופן משמעותי מעל 80% (איור 4A , 4B). MRI חוזרות לאחר שבוע 22nd הראה עלייה בשיא של רקמת סחוס hyaline דמוי בצד המדיאלי של הברך (איור 4D 4F, 4 שעות, 4J).

Figure 4
איור 4 : תוצאה של כאב מדידות (א) ומגוון של תנועה (ב); MRI הסאגיטלי (C-F) ונוף הפרונטליים (G-J) רציפים T2 של הברך מתיק המטופל 3. * מציין ממצא משמעותי סטטיסטית (p < 0.05). סריקות MRI טרום טיפול (C: התמונה רציפים, 4/20; E: 5/20; G: 10/20; ואני: 11/20) להראות נגעים סחוס (חיצים). סריקות MRI שלאחר הטיפול בגיל 16 שבועות (D: 4/20; F: 5/20; H: 10/20; ו- J: 11/20) מצביעים על התחדשות רקמות הסחוס דמוי (חץ) זה תוקן על-ידי טיפול המבוסס על תערובת של שמ ת/ECM. דמות זו שונתה מן הדוח הקודם של פאק. et al. 10. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

בשנת 2001, צוק ואח. תאי גזע בודד של רקמת שומן על-ידי פירוק קולגן המטריצה עם collagenase6. לאחר מכן, הקבוצה העלתה כי אלה בתאי גזע מבודד את רקמת שומן יכול להפוך הסחוס ורקמות אחרות של והמזודרם במקורם, להוכיח כי אלה בתאי גזע היו mesenchymal במקורם.

באופן דומה, ההליך שהוצגו במאמר זה הוא פרוטוקול ששונה כדי להחיל את השיטה דומה בחולים אנושיים. השינוי העיקרי של הפרוטוקול הוא שילוב של מערכת סגורה מזרקים תוך קבלת ועיבוד של lipoaspirates על מנת לצמצם את מגע האוויר תוך שמירה על הקלות של ביצוע ההליך. שימוש כזה מזרקים מערכת סגורה, רקמת שומן הושג באמצעות שאיבת שומן. . אז, lipoaspirates היו מעורבים עם collagenase בתוך מזרקים מערכת סגורה. לאחר מכן, collagenase הוסרה מן התערובת על ידי דילול הריכוז collagenase בתוך מזרקים מערכת סגורה. התוצאה הסופית היא סטרילי רקמת שומן-derived SVF שהושג עם להקל על התהליך.

באמצעות השיטה דומה, פאק הראה בשנת 2011, בפעם הראשונה, כי SVF נגזר רקמת שומן עצמיים יכול לשמש לטיפול בחולי OA על ידי פוטנציאל התחדשות רקמות הסחוס דמוי. מאוחר יותר, פאק ואח. גם הדגימו SVF נגזר רקמת שומן עצמיים זה יכול לשמש לטיפול קרע מניסקוס chondromalacia של patellae על-ידי יצירה מחדש סיבי רקמת סחוס דמוי ורקמות כמו סחוס hyaline, בהתאמה. בשנת 2013, פאק ואח. דיווח על מחקר בטיחות מעורבים 91 חולים שטופלו SVF נגזר רקמת שומן עצמיים. היעילות הממוצע של המחקר דיווחו על 67%, סלילת הכביש לאפשרות של החלת SVF נגזר רקמת שומן עצמיים האוכלוסייה המטופלת באופן כללי עם סחוס נזק.

אחת מתופעות הלוואי הנפוצות ביותר שדווחו על-ידי פאק ואח. בשנת 2013 בטיחות המחקר היה נפיחות משותפת שלאחר הטיפול בברך, אשר יכול להיות מוסבר על ידי מוות תאי 1), 2) דלקת על ידי RBCs הכלול PRP ו/או collagenase 3) שיורית שנשאר בלב הכרך האחרון של SVF רקמת שומן, נגזר. מאחר MSCs קיימים בתוך ה-ECM של רקמת שומן11,12, לעכל את lipoaspirates עם collagenase לשבור את המטריצה לחכור את תאי הגזע הוא תהליך הכרחי12. עם זאת, לאחר פירוק המטריקס כדי לשחרר את תאי הגזע, collagenase השארית הנותרת מלא להסירם מאמצעי האחסון הסופי כדי למנוע כל דלקת פוטנציאלי יכול להיות מיוצר על ידי משקעי collagenase28. למרות collagenase יכול לגרום לדלקת, כמות collagenase בהיקף הסופי של רקמת שומן-derived SVF חשיבות עלול לעורר לא נפיחות פרקים. כזה הנפח הסופי של SVF נגזר רקמת שומן עצמיים עם כמות לא משמעותיים של collagenase שימש בבטחה במשך השנים האחרונות לטיפול OA של הברכיים על ידי התחדשות רקמות הסחוס דמוי.

לאחרונה שתי שיטות בלתי-אנזימטי קבלת SVF רקמת שומן, נגזר כבר הציג29,30. שיטות אלה לנצל גם כוח או אולטרסאונד (הרטט) כוח מכני, במקום collagenase. ב-2018, D'Ambrosi et al. דיווח תוצאה של טיפול נגעים osteochondral ארבע טאלוס של הקרסול עם מיקרו-שברים, מטוהרים עצמיים רקמת שומן זה הושג על-ידי שימוש בכוח מכני התמוטטות מטריקס29. אין collagenase שימש כדי לשבור את המטריקס. ארבעה חולים טופלו עם רקמת שומן שבורות-מיקרו (קרי, רקמת שומן באופן מכני רעוע), עבור שלהם talus29. כל אלה ארבעה חולים הראו שיפור קליני שישה חודשים לאחר הניתוח. אף אחד לא היו סיבוכים. עם זאת, על המחקר הזה29, היה דיווח. פוטנציאל התחדשות של הסחוס. מחקר אחר שפורסם השנה מעורבים האנרגיה התנודתית הראה כי האנרגיה התנודתית של תדר מסוים, לא היה די לבודד תאי גזע30.

כמתואר לעיל, קבוצות שונות יש פרוטוקולים שונים לשימוש של רקמת שומן עצמיים לטיפול בהפרעות שונות מפרקים ניוונית. הפרוטוקול יכול להשתנות לפי גודל הצינורית המשמש עבור שאיבת שומן בכמות רקמת שומן משמש, סוג, כמות collagenase (אם בכלל), שיטה של זריקות, וכן הלאה. מאז MSCs קיימים בתוך ה-ECM של רקמת שומן, ההשפעה של collagenase, או שיטת טיהור באמצעות כוחות מכני, עשוי לשחק תפקיד חשוב. במיוחד, היעילות של collagenase תלויה בגורמים כגון הגודל של רקמת שומן, כמות רקמת שומן, ריכוז של collagenase, זמן וטמפרטורה של דגירה עם collagenase, התהליך של הסרת ה99 collagenase, אשר יכול לגרום נזק תא28.

יצוין, שכי collagenase, כפי שהוא מרכיב חשוב של הליך זה כדי לייצר תאי גזע המכיל רקמת שומן-derived SVF, ייתכן השפעה שלילית על הנפח הסופי של רקמת שומן-derived SVF. בהליך זה, collagenase מעורבב עם lipoaspirates מרוכז, הומוגני, מתפשט, ואז לשטוף. במהלך תהליך זה, נחשפים תאי גזע collagenase, אשר יכולה להיות השפעה מזיקה על ההישרדות של תאי גזע28. יותר מדי ריכוז או חשיפה ממושכת של collagenase רשאי להוריד את הכדאיות תאי גזע נפח סופי28. עוד יותר, collagenase עזב את עוצמת הקול הסופי יותר מדי עלול לגרום לדלקת מפרק כיוון collagenase עלול לשבור את מטריקס הסחוס של מוזרק משותפת של28.

בנוסף ההשפעות השליליות פוטנציאלי של collagenase, שאיבת שומן יכול לשאת סיבוכים פוטנציאליים אחרים. על מנת לקבל SVF נגזר רקמת שומן, שאיבת שומן יש לבצע תחילה. ביצוע liposuctions, כמו הליכים רפואיים אחרים, נושאת מספר סיבוכים פוטנציאליים כגון אי סדרים העור מתאר, seromas, זיהום, ניקוב של הקיר בטן, נפאסיאטיס נקרוטייזן תסחיף שומן, תסחיף ריאתי. בין סיבוכים אלה, סדרים מתאר עור הם תופעת לוואי נפוצה מאוד, אשר ניתן למנוע בקלות על ידי באמצעות קנולות קטן והימנעות שטחית liposuctions31,32. Seromas, המהווה אוסף של נוזל נסיובי באזור הזרקתו, יכול להיות גם תוצאה של שאיבת שומן אגרסיבי33. סיבוכים פוטנציאליים אחרים כגון זיהום, נפאסיאטיס נקרוטייזן, ניקוב קירות הבטן, תסחיף שומן או תסחיף ריאתי הם אפשריים. עם זאת, ניתן גם למנוע סיבוכים אלה על ידי שימוש בטכניקות סטריליות קפדנית ועל ידי שיפור ציות החולה34.

יתרה מזאת, כל שלושה מטופלים כללו במחקר שהוצג בתחילה עם תפליט מתון משותפת, סימן ברור של דלקת. לאחר הטיפול עם רקמת שומן-derived SVF, כל המטופלים האלה משותפת נפיחות משופרת. מסיבה זו, זה גם הגיוני להניח כי השיפור של תסמינים קליניים הוא לא בשל התחדשות הסחוס אפשרי, אבל במקום זאת, עקב ההשפעה modulatory ואנטי דלקתיות של תאי גזע ו/או PRP על קרום synovial35 , 36. לחלופין, שיפור סימפטום יכול להיות תרמו השפעה גם modulatory וגם אנטי דלקתיות של תאי גזע ו/או PRP על קרום synovial יחד עם חידוש אפשרי של רקמת סחוס דמוי. למרות מחקר נוסף יש צורך ניסחו מנגנון אמיתי של שיפור סימפטום, זו percutaneous הזרקה תוך-מפרקיות של טיפול בתאי בדמות עצמיים, הומוגני רקמת שומן-derived SVF עם PRP עצמיים מופעל עם סידן כלורי ו/או HA עשוי להציע טיפול חלופי את האסטרטגיה הנוכחית של OA בברך בטיפול.

לגבי התוספת של PRP עצמיים הוא מודאג, שמקובל כי PRP מכילה גורמי גדילה שונים, גורמים המבדילים מוזרק MSCs כדי לגדול להבדיל37,38,39. PRP גם הראו שיש collagenase בנטרול ההשפעה40. לגבי התוספת של חומצה היאלורונית (HA), HA הוכח על תפקיד אפשרי כחומר פיגומים, עקב שלו זיקה גבוהה רקמת סחוס, ואת תפקיד פוטנציאל לסייע לתאי גזע לחדור את מטריקס הסחוס41.

תהליכים חדשים יותר להשגת SVF רקמת שומן-derived הינם זמינים, לאופטימיזציה של שיטת עיבוד lipoaspirates יש צורך לתקנן את התהליך. עם זאת, זה עשוי להיות משימה קשה עקב מספר וריאציות אפשריות בתהליך של קבלת ועיבוד SVF נגזר רקמת שומן עצמיים. לדוגמה, הבדלי המרקם של רקמת השומן התת עורית של כל מטופל בודדים, עקב הזדקנות או מידת ההשמנה, ייתכן שונים התגובות פעילויות collagenase, וכתוצאה מכך מספר שונה של השיקופיים בתוך עצמיים רקמה-derived SVF42. בנוסף, המספר של תאי גזע כל גרם של רקמת שומן עשוי להיות שונה מטופל אחד למשנהו כפי שמוצג על ידי וריאציית נהדר של תאי גזע שדווחה מספרים רבים פרסומים7,19,20, 21 , 22 , 23.

פרוטוקול זה הציג במאמר זה הוא הליך הרומן, חדשני מנסה לשפר את האסטרטגיה הנוכחית של מטפלים OA בברך האדם על ידי פוטנציאל התחדשות רקמות הסחוס כמו עם זריקות מלעורית של עצמיים נגזר רקמת שומן SVF. השימוש הנכון של collagenase הוא צעד חשוב וביקורתי של פרוטוקול זה. באמצעות סגר מערכת מזרקים לשמור העקרות תוך שמירה על הנוחות של ביצוע ההליך זה השינוי העיקרי של פרוטוקול שפותח על ידי צוק ואח. 5 בנוסף, ליישום האנושי, כמות collagenase הכלול SVF הסופי רקמת שומן-derived שיורית צריך להיות משמעותיים למנוע כל דלקת מפרקים. ישנן מגבלות של פרוטוקול זה: משקעי collagenase באמצעי הסופי (למרות שזה עשוי להיות זניח), לא לשלוט קבוצות ביחידים מוזרק PRP ו HA, ביופסיות אין, אין הוכחה למעט השיפור של תסמינים קליניים עקב PRP, הקטן מספר מטופלים (מחקר פיילוט), אין מרכיבי defying SVF רקמת שומן, נגזר, לא מפרט את מספר תאי גזע בכל אחד 3 חולים. החלת רקמת שומן-derived SVF להפרעות כגון קרע מניסקוס, chondromalacia patellae, הפרעות דיסק בעמוד השדרה, הריפוי מתעכב (או הלא-הילינג) עצם שבר, כיב עור-הילינג, שחזור שד, וייתכן הפרעות רפואיות אחרות לשפר את התוצאה הקלינית. למרות שאלה הן יישומים קליניים אפשריים של רקמת שומן-derived SVF, יותר נמרץ ויסודי מחקרים קליניים נחוצים לכלילת רקמת שומן-derived SVF בהגדרות קליניים בפועל.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

המחבר מודה תמיכה מן הצוות של מרפאה Mipro, עיצוב איור מאת Lee Jaepil/דוד. עבודה זו נתמכה על ידי מענקי מחקר מ ביו & תוכנית פיתוח טכנולוגיה רפואית של ה-NRF במימון של MSIT (מספר ה-NRF-2017M3A9E4078014); את נבחרת מחקר קרן של קוריאה (NRF) ממומן על ידי משרד המדע ICT (במדבר ה-NRF-2017R1A2B4002315 של ה-NRF-2016R1C1B2010308).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Material
5% Betadine (povidone-iodine)  Firson Co., Ltd. 657400260
2% Lidocaine  Daehan Pharmaceutical Co. 670603480
Tumescent solution  Myungmoon Pharm. Co. Ltd. N01BB01 The solution was composed of 500 mL normal saline, 40 mL 2% lidocaine, 20 mL 0.5% marcaine, and 0.5 mL epinephrine 1:1000.
Liberase TL and TM research grade  Roche Applied Science 5401020001
D5LR Dahan Pharm. Co., Ltd. 645101072 Dextrose 5% in lactated Ringer's solution 
Anticoagulant citrate dextrose solution  Fenwal, Inc. NDC:0942-0641 The solution was composed of 0.8% citric acid,
0.22% sodium citrate, and 0.223% dextrose.
3% (w/v) Calcium chloride  Choongwae Pharmaceutical Co. 644902101
0.5% (w/v) HA (Hyaluronic acid ) Dongkwang pharm. Co., Ltd. 645902030
0.25% Ropivacaine Huons Co., Ltd. 670600150
Equipment
3.0 mm Cannula  WOOJU Medical Instruments Co. ML30200
60-mL Luer-Lock syringe BD (Becton Dickinson)  309653
Centrifuge Barrel Kit  CPL Co., Ltd. 30-0827044
Tissue homogenizer that contains blades CPL Co., Ltd. 30-0827045
Rotating incubator mixer Medikan Co., Ltd MS02060092
Centrifuge Hanil Scientific Inc. CE1133
Magnetic Resonance Imaging Philips Medical Systems Inc. 18068
Ultrasound Imaging System Samsung Medison co., Ltd CT-LK-V10-ICM-09.05.2007

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Arnoczky, S. P. Building a meniscus. Biologic considerations. Clinical Orthopaedics and Related Research. (367 Suppl), S244-S253 (1999).
  2. Barry, F. P. Mesenchymal stem cell therapy in joint disease. Novartis Foundation Symposium. 249, 86-241 (2003).
  3. Usuelli, F. G., et al. Adipose-derived stem cells in orthopaedic pathologies. British Medical Bulletin. 124 (1), 31-54 (2017).
  4. Zhang, H. N., Li, L., Leng, P., Wang, Y. Z., Lv, C. Y. Uninduced adipose-derived stem cells repair the defect of full-thickness hyaline cartilage. Chinese Journal of Traumatology. 12 (2), 92-97 (2009).
  5. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).
  6. Zuk, P. A., et al. Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Engineering. 7 (2), 211-228 (2001).
  7. Baer, P. C., Geiger, H. Adipose-derived mesenchymal stromal/stem cells: tissue localization, characterization, and heterogeneity. Stem Cells International. 2012, 812693 (2012).
  8. Zhu, Y., et al. Adipose-derived stem cell: a better stem cell than BMSC. Cell Biochemistry and Function. 26 (6), 664-675 (2008).
  9. Bellei, B., Migliano, E., Tedesco, M., Caputo, S., Picardo, M. Maximizing non-enzymatic methods for harvesting adipose-derived stem from lipoaspirate: technical considerations and clinical implications for regenerative surgery. Scientific Reports. 7 (1), 10015 (2017).
  10. Pak, J., Lee, J. H., Park, K. S., Jeong, B. C., Lee, S. H. Regeneration of Cartilage in Human Knee Osteoarthritis with Autologous Adipose Tissue-Derived Stem Cells and Autologous Extracellular Matrix. BioResearch Open Access. 5 (1), 192-200 (2016).
  11. Alexander, R. W. Understanding Adipose-derived Stromal Vascular Fraction (AD-SVF) Cell Biology and Use on the Basis of Cellular, Chemical, Structural and Paracrine Components: A Concise Review. Journal of Prolotherapy. 4, e855-e869 (2012).
  12. Benders, K. E., et al. Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration. Trends in Biotechnology. 31 (3), 169-176 (2013).
  13. Korean Food and Drug Administration (KFDA). Cell therapy: Rules and Regulations. KFDA. , (2009).
  14. Pak, J. Regeneration of human bones in hip osteonecrosis and human cartilage in knee osteoarthritis with autologous adipose-tissue-derived stem cells: a case series. Journal of Medical Case Reports. 5, 296 (2011).
  15. Pak, J., Chang, J. J., Lee, J. H., Lee, S. H. Safety reporting on implantation of autologous adipose tissue-derived stem cells with platelet-rich plasma into human articular joints. BMC Musculoskeletal Disorders. 14, 337 (2013).
  16. Pak, J., Lee, J. H., Kartolo, W. A., Lee, S. H. Cartilage Regeneration in Human with Adipose Tissue-Derived Stem Cells: Current Status in Clinical Implications. BioMed Research International. 2016, 4702674 (2016).
  17. Pak, J., Lee, J. H., Lee, S. H. A novel biological approach to treat chondromalacia patellae. PLoS One. 8 (5), e64569 (2013).
  18. Pak, J., Lee, J. H., Lee, S. H. Regenerative repair of damaged meniscus with autologous adipose tissue-derived stem cells. BioMed Research International. 2014, 436029 (2014).
  19. Aust, L., et al. Yield of human adipose-derived adult stem cells from liposuction aspirates. Cytotherapy. 6 (1), 7-14 (2004).
  20. De Ugarte, D. A., et al. Comparison of multi-lineage cells from human adipose tissue and bone marrow. Cells Tissues Organs. 174 (3), 101-109 (2003).
  21. Guilak, F., et al. Clonal analysis of the differentiation potential of human adipose-derived adult stem cells. Journal of Cellular Physiology. 206 (1), 229-237 (2006).
  22. Mitchell, J. B., et al. Immunophenotype of human adipose-derived cells: temporal changes in stromal-associated and stem cell-associated markers. Stem Cells. 24 (2), 376-385 (2006).
  23. Oedayrajsingh-Varma, M. J., et al. Adipose tissue-derived mesenchymal stem cell yield and growth characteristics are affected by the tissue-harvesting procedure. Cytotherapy. 8 (2), 166-177 (2006).
  24. Liberase TL information available from Sigma Millipore online. , https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/roche/05401020001?lang=en®ion=US (2018).
  25. Liberase TM information available from Sigma Millipore online. , https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/roche/Libtmro?lang=en®ion=US (2018).
  26. Childs, J. D., Piva, S. R. Psychometric properties of the functional rating index in patients with low back pain. European Spine Journal. 14 (10), 1008-1012 (2005).
  27. Price, D. D., McGrath, P. A., Rafii, A., Buckingham, B. The validation of visual analogue scales as ratio scale measures for chronic and experimental pain. Pain. 17 (1), 45-56 (1983).
  28. Pilgaard, L., Lund, P., Rasmussen, J. G., Fink, T., Zachar, V. Comparative analysis of highly defined proteases for the isolation of adipose tissue-derived stem cells. Regenerative Medicine. 3 (5), 705-715 (2008).
  29. D'Ambrosi, R., Indino, C., Maccario, C., Manzi, L., Usuelli, F. G. Autologous Microfractured and Purified Adipose Tissue for Arthroscopic Management of Osteochondral Lesions of the Talus. Journal of Visualized Experiments. (131), e56395 (2018).
  30. Packer, J. D., Chang, W. T., Dragoo, J. L. The use of vibrational energy to isolate adipose-derived stem cells. Plastic Reconstructive Surgery-Global Open. 6 (1), e1620 (2018).
  31. Hanke, C. W., Bernstein, G., Bullock, S. Safety of tumescent liposuction in 15,336 patients. National survey results. Dermatologic Surgery. 21 (5), 459-462 (1995).
  32. Illouz, Y. G. Complications of liposuction. Clinics in Plastic Surgery. 33 (1), 129-163 (2006).
  33. Dixit, V. V., Wagh, M. S. Unfavourable outcomes of liposuction and their management. Indian Journal of Plastic Surgery. 46 (2), 377-392 (2013).
  34. Lehnhardt, M., et al. Major and lethal complications of liposuction: a review of 72 cases in Germany between 1998 and 2002. Plastic and Reconstructive Surgery. 121 (6), 396e-403e (2008).
  35. Iyer, S. S., Rojas, M. Anti-inflammatory effects of mesenchymal stem cells: novel concept for future therapies. Expert Opinion on Biological Therapy. 8 (5), 569-581 (2008).
  36. Zhang, J., Middleton, K. K., Fu, F. H., Im, H. J., Wang, J. H. HGF mediates the anti-inflammatory effects of PRP on injured tendons. PLoS One. 8 (6), e67303 (2013).
  37. Li, N. Y., Yuan, R. T., Chen, T., Chen, L. Q., Jin, X. M. Effect of platelet-rich plasma and latissimus dorsi muscle flap on osteogenesis and vascularization of tissue-engineered bone in dogs. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 67 (9), 1850-1858 (2009).
  38. Parsons, P., et al. The biological effect of platelet rich-plasma on the fracture healing process. The Journal of bone and joint surgery. British volume. 91-B, 293 (2009).
  39. Wu, W., Chen, F., Liu, Y., Ma, Q., Mao, T. Autologous injectable tissue-engineered cartilage by using platelet-rich plasma: experimental study in a rabbit model. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 65 (10), 1951-1957 (2007).
  40. Cooper, T. W., Eisen, A. Z., Stricklin, G. P., Welgus, H. G. Platelet-derived collagenase inhibitor: characterization and subcellular localization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 82 (9), 2779-2783 (1985).
  41. Uzuki, M., Sawai, T. A. A comparison of the affinity of sodium hyaluronate of various molecular weights for degenerated cartilage: a histochemical study using hyaluronic acid binding protein. International Congress Series. 1223, 279-284 (2001).
  42. Pagano, C., et al. Molecular and morphometric description of adipose tissue during weight changes: a quantitative tool for assessment of tissue texture. International Journal of Molecular Medicine. 14 (5), 897-902 (2004).

Tags

רפואה גיליון 139 רפואה נגזר רקמת שומן בתאי גזע מטריצה חוץ-תאית חידוש סחוסים בבני אדם דלקת מפרקים ניוונית רפואה רגנרטיבית תאי הגזע Mesenchymal
פרוטוקול קליני של ייצור רקמת שומן-Derived השבר בכלי הדם סטרומה עבור פוטנציאל התחדשות הסחוס
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Pak, J., Lee, J. H., Pak, N. J.,… More

Pak, J., Lee, J. H., Pak, N. J., Park, K. S., Jeon, J. H., Jeong, B. C., Lee, S. H. Clinical Protocol of Producing Adipose Tissue-Derived Stromal Vascular Fraction for Potential Cartilage Regeneration. J. Vis. Exp. (139), e58363, doi:10.3791/58363 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter