0 次观看 • 5:43 分钟 • April 30th, 2023
– 生物发光成像可实现对癌细胞的无创追踪，以研究其在动物肿瘤模型体内的分布情况。为建立小鼠模型，取一只麻醉后的小鼠，对其腹部区域进行消毒。做手术切口以定位脾脏，将其从腹腔中拉出，并暴露其下方的胰腺。
接下来，将转导的胰腺癌细胞与适宜的水凝胶基质混合后，注入小鼠胰腺中。这些经基因修饰的细胞表达荧光素酶。保持注射器位置不动，使细胞-基质悬液凝固，以尽量减少渗漏。
将器官放回腹腔并缝合切口。让小鼠恢复。待肿瘤形成后，对小鼠进行麻醉，并通过尾静脉注射荧光素底物溶液。使分子到达表达荧光素酶的细胞所在的肿瘤部位。
在细胞内，荧光素酶催化底物分子的氧化反应，从而产生发光现象。将小鼠置于生物发光成像室中，以获取肿瘤图像，用于研究肿瘤生长动态。在以下实验方案中，我们将展示通过注射表达荧光素酶的胰腺癌细胞，建立生物发光原位胰腺癌小鼠模型的方法。
－使用无菌外科器械，在中线左侧约2毫米处的皮肤上做一个1.5厘米长的切口。然后，在下方的腹肌上做一个1.5厘米长的切口。接着，用无菌镊子找到脾脏，并将其轻柔地从腹腔中取出。将脾脏固定在无菌棉签上，以暴露其下方的胰腺。随后，找到紧邻脾脏的胰腺尾部。
重悬Matrigel细胞悬液，取20微升注入胰腺尾部。注射后，保持注射器位置不动30至60秒，直至Matrigel充分凝固。此关键步骤可最大限度减少细胞泄漏。
拔出针头后，检查注射部位，确保未发生渗漏。然后将脾脏和胰腺复位至腹腔内。使用可吸收编织4-0缝线配合圆针，以连续缝合法缝合小鼠的腹壁肌层。
接下来，使用带切割针的不可吸收单股6-0缝线，以连续缝合方式闭合外部皮肤，并涂抹碘伏。然后将小鼠移离吸入麻醉剂，皮下注射0.05至0.1毫克/千克的丁丙诺啡作为术后镇痛药。将小鼠置于放置在37°C加热垫上的笼子中，自由获取食物和水，使其恢复。
术后最初几天内需密切观察小鼠。若小鼠出现疼痛症状（如弓背或活动减少），可在36小时内每12小时皮下注射一次布托啡诺。手术部位愈合后（7至10天），对小鼠进行麻醉并拆除外部缝线。
为开始对胰腺癌细胞进行生物发光示踪，使用 2% 至 3% 吸入用异氟烷再次麻醉小鼠，并在眼睛上涂抹润滑剂以防止干燥。麻醉成功后，通过尾静脉注射每千克体重 150 毫克的 D-荧光素酶底物，并等待一到两分钟，使荧光素酶底物到达细胞。
将小鼠置于生物发光成像系统的右侧，使肿瘤朝向相机。此处我们使用的是Lumina II成像系统。然后使用成像软件采集白光和生物发光图像，具体操作如其他JoVE文章中所述。成像完成后，将小鼠移离吸入麻醉剂，并将其放回饲养笼中使其恢复。在肿瘤生长过程中重复这些步骤，以研究肿瘤生长动力学。