微球聚合酶链式反应扩增单链 DNA

微球 PCR 使用与其表面的寡核苷酸偶联的微小球体，从而能够优先扩增单链 DNA。

要开始微球 PCR，取包含模板单链 DNA 链、带有附加核苷酸标签的正向引物、热稳定 DNA 聚合酶、dNTP 和显示单链寡核苷酸探针的微球的反应混合物。

将试管放入热循环仪中，并在定义的条件下运行。

在第一个循环中，在退火温度下，模板 DNA 与微球表面的探针结合，使模板 DNA 起到正义链的作用。在延伸过程中，聚合酶延伸 DNA，双链体保持附着在微球上。

在下一个循环中，在变性过程中，模板 DNA 与微球分离，留下探针链与表面结合——作为新链的模板。

在退火过程中，标记的引物与反义链结合。随后，聚合酶将其延伸以合成带有核苷酸标签的正义链。

重复该循环数次，生成多个正义单链 DNA 拷贝，这些 DNA 进入溶液中，同时双链污染物保持附着。

将 PCR 产物转移到含有上样缓冲液的试管中。将产品和标记物上样到凝胶的不同孔中，并使用琼脂糖凝胶电泳进行分离。

模板 DNA 形成一个微弱的低分子量条带，而一个强烈的高分子量条带证实了单链 DNA 扩增。