Northern Blot 检测和定量植物组织总 RNA 提取物中的特异性 microRNA

MicroRNA，即 miRNA，是小的单链非编码 RNA。miRNA 掺入多蛋白复合物，并进一步与互补的靶标 mRNA 序列结合，以负向调节基因表达。

为了从植物组织的总 RNA 中检测特异性 miRNA，添加含有示踪染料和甲酰胺（一种 RNA 变性剂）的凝胶上样染料。在电泳之前加热样品以使 RNA 变性并防止形成二级结构。

将样品和标准 RNA 标记物加载到预组装的变性聚丙烯酰胺凝胶的孔中。运行电泳，促进基于大小的 RNA 片段分离。

将凝胶转移到电印迹盒上的预湿滤纸上。将浸有缓冲液的尼龙印迹膜对准凝胶。然后，堆叠预湿的滤纸。进行电印迹。

电流导致带负电荷的 RNA（包括 miRNA）从凝胶中移出，落到带正电荷的尼龙膜表面。将膜暴露在紫外线下;这会将 RNA 交联到膜上，从而防止 RNA 丢失。

在含有占据非特异性结合位点的封闭剂的杂交缓冲液中孵育膜，以降低背景噪音。

添加与靶 miRNA 互补的放射性标记 RNA 寡核苷酸探针以特异性结合。用缓冲液洗涤膜，去除未结合的探针。

使用荧光粉成像系统检测和量化放射性杂交信号强度。高分辨率信号指示植物组织中的特异性 miRNA 表达。