Name: 微组织使用胶原蛋白的模块的制备凝胶含有细胞 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-13T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 28 s
Description: 了解使用胶原蛋白凝胶制备模块化微组织的方法，通过聚乙烯管成型并包被内皮细胞。该技术适用于体外细胞相互作用研究及体内组织工程应用。

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资金由美国国立卫生研究院（EB 001013）、加拿大自然科学与工程研究理事会及加拿大健康研究院提供。我们感谢 A. P. McGuigan 博士在模块开发过程中提供的专业知识与帮助。

1）导管的制备
<ol>
<li>	剪取 2 至 3 米长的聚乙烯管（内径 0.76 mm × 外径 1.22 mm）。</li>
<li>	将一根 20 G1 针头穿入管的一端。</li>
<li>	将管盘绕成线圈状，放入自封式灭菌袋（7 1/2" × 13"）。管的两端应置于袋的未封口端，并用气体灭菌胶带固定。</li>
<li>	密封袋子并进行气体灭菌。</li>
</ol>
2) 胶原蛋白的中和
注意：1 ml 胶原蛋白可填充约 2 m 的聚乙烯管。
<ol>
<li> 将所需量的胶原蛋白放入15 ml锥形管中，置于冰上保存，以用于制备所需长度的管状结构。</li>
<li> 每毫升胶原蛋白中加入128 μL的10倍浓度α-MEM，并通过反复移液混合溶液。注意：（1）当α-MEM与酸化胶原蛋白混合后，溶液应变为黄色；（2）混合时应尽量减少气泡产生。</li>
<li> 加入0.8 M碳酸氢钠中和胶原蛋白，直至胶原蛋白pH达到7.4。作为pH值的粗略判断标准，当黄色胶原蛋白溶液变为浅粉色时即为中和完成。注意：通常每毫升胶原蛋白需要30至60 μL碳酸氢钠。</li>
<li> 中和后的胶原蛋白在使用前应始终置于冰上，因为若不在4°C条件下保存，中和后的胶原蛋白会发生凝胶化。</li>
</ol>
3）细胞包埋（可选）
注意：根据细胞类型的不同，可将细胞以每毫升100万至2000万个细胞的浓度包埋。请使用适合您要包埋细胞类型的培养基。
<ol>
<li> 吸去细胞培养液，加入 5 mL 磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤。</li>
<li> 吸去 PBS，加入 3 mL 胰蛋白酶-EDTA 溶液。</li>
<li> 将细胞在 37°C 下用胰蛋白酶-EDTA 溶液孵育 5 分钟。</li>
<li> 用 7 mL 培养液重悬细胞。</li>
<li> 进行细胞计数。</li>
<li> 将所需数量的细胞转移至 15 mL 圆锥形离心管中用于包埋。</li>
<li> 在 300 × g 条件下离心 5 分钟，使细胞沉淀。</li>
<li> 吸去细胞沉淀上方的培养液。</li>
<li> 用中和的胶原溶液重悬细胞，并置于冰上保存。</li>
</ol>
4）胶原蛋白凝胶化
<ol>
<li> 在生物安全柜中，剪开装有聚乙烯管的袋子的密封端。</li>
<li> 使用无菌镊子将3 ml注射器连接到聚乙烯管一端的20G针头上。保持聚乙烯管置于袋内。</li>
<li> 使用无菌镊子将聚乙烯管的另一端插入中和后的胶原液中，直至管尖到达锥形管底部。保持锥形管置于冰上。</li>
<li> 缓慢回抽注射器活塞，将胶原液吸入聚乙烯管中。 
注意：若胶原液被过快吸入管中，则会在胶原内形成气泡。</li>
<li> 将胶原液吸入管后，拔出20G针头，并将两端重新放回袋中。用胶带密封袋子。</li>
<li> 将袋子在37°C孵育60分钟。若胶原中含有细胞，则每15分钟翻转袋子一次，以防止细胞沉降到模块的一侧。</li>
</ol>
5）切割含有凝胶化胶原的管路
<ol>
<li> 对切割装置的刀头、刀片以及用于盛放管路的托盘进行高压灭菌。</li>
<li> 组装切割装置。</li>
<li> 将管路放置于切割装置前方的无菌托盘中，并将管路装入切割装置内。</li>
<li> 在切割装置出口处放置一个50 mL锥形管，内含25 mL培养基，用于收集切割后的模块。 
注意：即使为仅含胶原的模块，也应使用含有胎牛血清（FBS）的培养基，因为若培养基中不含FBS，模块无法从管路中分离。若模块中含有细胞，则使用所包埋细胞所需的培养基；若模块中无包埋细胞，则使用内皮细胞的培养基。</li>
<li> 将切割装置设置为切割2 mm长度的管路，并进行切割。</li>
<li> 将切割后的模块置于50 mL锥形管中，在37°C下孵育60分钟。</li>
</ol>
6) 从管路中移除胶原模块
<ol>
<li> 将含有管道中模块的 50 mL 离心管涡旋震荡 10 秒。 
	注意：分离高细胞密度嵌入的模块时应轻柔操作，以避免破损。</li>
<li> 让模块沉降至管底，约需 5 分钟。</li>
<li> 使用宽口 10 mL 血清移液管将已沉降的模块转移至 15 mL 离心管中。</li>
<li> 重复步骤 6.1 至 6.3 两次。</li>
<li> 进入步骤 7 以用内皮细胞包被模块，或将模块转移至未经组织培养处理的培养板中。</li>
</ol>
7) 用内皮细胞包被模块
<ol>
<li> 将模块放入15 mL圆底离心管底部，加入5 mL培养基以浸没细胞。</li>
<li> 吸去内皮细胞的培养基，并用5 mL PBS洗涤。</li>
<li> 吸去PBS，加入3 mL胰蛋白酶-EDTA溶液。</li>
<li> 在37°C条件下，将细胞在胰蛋白酶-EDTA中孵育5分钟。</li>
<li> 用7 mL培养基重悬细胞。</li>
<li> 进行细胞计数。每毫升紧密排列的模块底部需含有5×106个内皮细胞。</li>
<li> 在300 × g离心5分钟以收集细胞，并用5 mL内皮细胞培养基重悬。</li>
<li> 将含有内皮细胞的5 mL培养基加入模块中。 
注意：此操作可形成两种培养基各占50%的混合体系，我们发现该比例有利于两种细胞类型的存活与功能维持。若拟使用专门配制的共培养培养基，应先测试其是否可有效维持两种细胞的表型，再投入使用。</li>
<li> 将模块与内皮细胞在静态和动态条件下共同孵育。</li>
<li> 对于静态孵育，通过轻柔翻转混匀模块与内皮细胞，然后将离心管直立置于37°C环境中孵育15分钟，重复一次。</li>
<li> 动态接种内皮细胞时，在37°C下轻轻摇动离心管60分钟。</li>
<li> 重复进行两次静态孵育。</li>
<li> 将模块转移至未经组织培养处理的培养板中，在37°C下孵育过夜。</li>
<li> 次日，将模块转移至新的未经组织培养处理的培养板中，加入新鲜培养基（若使用共培养体系，则采用50:50混合培养基），以去除未贴附的内皮细胞。</li>
<li> 继续孵育已覆盖内皮细胞的模块，直至细胞完全覆盖模块表面（覆盖率100%）。此过程通常需要约7天。</li>
</ol>
8) 代表性结果：
模块刚从试管中取出时呈圆柱形。如果模块内含有包埋的细胞和/或表面包被有内皮细胞，则其体积可收缩达50%，并形成椭圆形（图1）。在光学显微镜下观察，模块也会变得更加致密和不透明（图1）。当模块表面的内皮细胞达到融合状态时，会形成紧密连接，可通过VE-钙黏蛋白（VE-Cadherin）的免疫荧光染色观察到（图2）。传质分析表明，这些模块能够在不形成因氧气传输不足导致的坏死核心的情况下，支持高密度细胞生长（8×107 个细胞/cm3），而这一问题在较大的组织中常常存在（例如，大直径模块，D = 1.4 mm）（图3）。
<img src="/files/ftp_upload/2177/2177fig1.jpg" alt="显微镜：生物膜模块生长比较，第0天 vs 第3天，尺寸参数，荧光标记。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 
图1： 模块的制备与收缩。在人脐静脉内皮细胞（HUVEC-C）接种后的三天内，模块发生收缩，其直径和长度显著减小（p &lt; 0.001）（A）。在制备时，嵌入的HepG2细胞在模块内均匀分布，并保持高存活率（B）。[活细胞 绿色；死细胞 红色] [改编自Corstorphine 2010]

<img src="/files/ftp_upload/2177/2177fig2.jpg" alt="荧光显微镜图像；细胞结构可视化；绿色荧光蛋白标记。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 2"> 
图 2： 模块表面接种RAEC并培养10天后，内皮细胞紧密连接处的VE-钙黏蛋白免疫荧光染色。比例尺 = 50 μm。

<img src="/files/ftp_upload/2177/2177fig3.jpg" alt="细胞培养生长比较，显微镜图像显示小模块和大模块随时间的变化。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 3"> 
图 3： 典型模块（初始直径 0.76 mm）和大模块（初始直径 1.4 mm）的 Masson 三色染色结果展示了氧扩散限制的影响。构建七天后，大模块的核心区域（右下面板）已形成大量死细胞，仅剩一层薄薄的存活细胞边缘（约 200μm 厚）。相反，小模块则保持了均匀且高密度的活细胞分布。[模块内包埋 HepG2 细胞，并包覆内皮细胞。] [引自 Corstorphine 2010]

<img src="/files/ftp_upload/2177/2177fig4.jpg" alt="组织显微图像；A：荧光，B：暗场；细胞结构分析。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图4"> 
图4：（A）在泊洛沙胺-胶原模块上接种的HMEC-1细胞。接种后第1天，泊洛沙胺-胶原模块仍保持其圆柱形结构，与仅含胶原的模块相比，细胞附着性能有限。比例尺 = 200 μm。（B）含有基于PLGA的可生物降解微球的胶原模块的光学显微镜图像。比例尺 = 500 μm。

<img src="/files/ftp_upload/2177/2177fig5.jpg" alt="生物膜形成分析中的微生物生长形态与荧光显微镜观察" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图5"> 
图5： 示例 体外 检测。(A) 血管生成检测：在与脂肪源性干细胞共培养5天后，可轻松检测并量化内皮细胞接种模块上形成的毛细血管样结构。(B) 模块上活/死细胞染色的共聚焦显微镜图像，其中活细胞染色呈绿色，死细胞染色呈红色。

<img src="/files/ftp_upload/2177/2177fig6.jpg" alt="组织学显微镜图像；组织样本分析；细胞结构观察；病理学研究。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图6"> 
图6： 含有嵌入式间充质干细胞并表面覆盖一层内皮细胞的胶原模块。该模块在微流控腔室中暴露于剪切应力（约0.64 dyn/cm2）下培养7天，开始在接触点处出现融合现象。内皮细胞经vWF染色呈棕色，间充质干细胞的细胞核呈蓝色（H&amp;E染色）。比例尺 = 100μm。

<img src="/files/ftp_upload/2177/2177fig7.jpg" alt="显示异常增生的组织显微图像，提示可能存在癌变。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图7"> 
图7： 在小鼠皮肤下植入数百个含有脂肪源性干细胞（ASC）并由人微血管内皮细胞（HMEC）包被的胶原模块，以研究ASC与HMEC之间的相互作用 体内 用于脂肪再生应用。

<ol><li>Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+vessel+tissue+engineering+driven+by+endothelialized+modules%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules.</a> , (2010).</li>
<li>Corstorphine, L. E., Sefton, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effectiveness+factor+and+diffusion+limitations+in+collagen+gel+modules+containing+HepG2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Effectiveness factor and diffusion limitations in collagen gel modules containing HepG2 cells.</a> J Tissue Eng Regen Med. , (2010).</li>
<li>Gupta, R., Van Rooijen, N., Sefton, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+of+endothelialized+modular+constructs+implanted+in+an+omental+pouch+in+nude+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Fate of endothelialized modular constructs implanted in an omental pouch in nude rats.</a> Tissue Eng. Part A 15, 2875-2887 (2009).</li>
<li>Leung, B. M., Sefton, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modular+tissue+engineering+construct+containing+smooth+muscle+cells+and+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">A modular tissue engineering construct containing smooth muscle cells and endothelial cells.</a> Ann Biomed Eng. 35, 2039-2049 (2007).</li>
<li>McGuigan, A. P., Leung, B., Sefton, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+cell-containing+gel+modules+to+assemble+modular+tissue-engineered+constructs+%5Bcorrected%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Fabrication of cell-containing gel modules to assemble modular tissue-engineered constructs [corrected].</a> Nat Protoc. 1, 2963-2969 (2006).</li>
<li>McGuigan, A. P., Sefton, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+organoid+engineered+by+modular+assembly+enables+blood+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Vascularized organoid engineered by modular assembly enables blood perfusion.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 11461-11466 (2006).</li>
<li>McGuigan, A. P., Sefton, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modular+tissue+engineering%3A+fabrication+of+a+gelatin-based+construct%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Modular tissue engineering: fabrication of a gelatin-based construct.</a> J Tissue Eng Regen Med. 1, 136-145 (2007).</li>
<li>McGuigan, A. P., Sefton, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+fabrication+of+sub-mm-sized+modules+containing+encapsulated+cells+for+modular+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Design and fabrication of sub-mm-sized modules containing encapsulated cells for modular tissue engineering.</a> Tissue Eng. 13, 1069-1078 (2007).</li>
<li>McGuigan, A. P., Sefton, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+criteria+for+a+modular+tissue-engineered+construct%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Design criteria for a modular tissue-engineered construct.</a> Tissue Eng. 13, 1079-1089 (2007).</li>
<li>McGuigan, A. P., Sefton, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+thrombogenicity+of+human+umbilical+vein+endothelial+cell+seeded+collagen+modules%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The thrombogenicity of human umbilical vein endothelial cell seeded collagen modules.</a> Biomaterials. 29, 2453-2463 (2008).</li>
<li>Sosnik, A., Leung, B., McGuigan, A. P., Sefton, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen%2Fpoloxamine+hydrogels%3A+cytocompatibility+of+embedded+HepG2+cells+and+surface-attached+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Collagen/poloxamine hydrogels: cytocompatibility of embedded HepG2 cells and surface-attached endothelial cells.</a> Tissue Eng. 11, 1807-1816 (2005).</li>
</ol>

无利益冲突声明。

我们利用嵌入不同类型细胞的模块制备了多种不同的微组织1-11我们已成功包埋了原代心肌细胞、胰岛细胞、脂肪干细胞、间充质基质细胞，以及包括HepG2、NIH 3T3和克隆9肝细胞在内的多种细胞系。我们还使用多种内皮细胞对模块进行包被，包括大鼠主动脉内皮细胞、人脐静脉内皮细胞和人微血管内皮细胞。此外，已制备出由胶原与泊洛沙胺聚合物混合物构成，或含有药物缓释微球的模块（图4）。多种 体外 已证明这些检测方法可与多种模块兼容，包括免疫荧光、蛋白质印迹、血管生成、Alamar Blue 增殖检测以及活/死细胞染色（图5）。这些模块还已被用于微流控芯片（图6），并植入小鼠和大鼠体内（图7），以研究不同类型细胞之间的相互作用，以及宿主反应对微组织的重塑过程。这些模块具有广泛的应用前景，可用于研究三维组织培养对细胞的影响、不同细胞在三维构型中的相互作用、微组织在微流控芯片中的重塑过程 体内 宿主反应对微组织的重塑。

<table><tbody><tr><td>内径管PE60</td><td>BD Biosciences</td><td>427416</td><td>可使用不同直径的导管来改变模块的直径</td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（PBS）</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>20012-027</td><td></td></tr><tr><td>胰蛋白酶-EDTA</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25200-072</td><td></td></tr><tr><td>酸性化胶原蛋白，3 mg/mL</td><td>Cedarlane Labs</td><td>5005-B</td><td></td></tr><tr><td>碳酸氢钠</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>20G针头</td><td>BD Biosciences</td><td>305175</td><td>针头直径需与导管直径相近</td></tr><tr><td>3 mL注射器</td><td>BD Biosciences</td><td>309585</td><td></td></tr><tr><td>15 mL离心管</td><td>BD Biosciences</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>50 mL离心管</td><td>BD Biosciences</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Convertors 自封袋 7 1/2&amp;#8221; x 13&amp;#8221;</td><td>Cardinal Health</td><td>92713</td><td></td></tr><tr><td>10 ml宽口移液管</td><td>BD Biosciences</td><td>357504</td><td></td></tr><tr><td>10 ml移液管</td><td>BD Biosciences</td><td>357551</td><td></td></tr><tr><td>5 ml移液管</td><td>BD Biosciences</td><td>357543</td><td></td></tr></tbody></table>

利用含细胞的胶原凝胶模块制备微组织

Fabrication of Micro-tissues using Modules of Collagen Gel Containing Cells

本方案描述了一种称为模块的微组织的制备方法。模块化方法可生成均一、可扩展且具有血管化的组织。模块可由胶原蛋白以及其他可凝胶化或可交联材料制成。制备完成时模块长约2 mm，直径约0.7 mm，但在包埋细胞后或经内皮细胞包被后会收缩。单个模块体积足够小，使包埋细胞处于氧气及其他营养物质的扩散极限范围内；但多个模块可堆叠组装形成更大的可灌注组织。由于可在模块中包埋或在其表面包被不同类型的细胞，再将其组装成复杂组织，因此该组织具有模块化结构。模块制备主要包括三个步骤：（1）中和胶原蛋白并将其与细胞混合；（2）在管中使胶原蛋白凝胶化并切割成模块；（3）用内皮细胞包被模块。

利用含有包埋细胞且表面涂覆内皮细胞的圆柱形胶原凝胶（称为模块）来构建微组织。

本方案描述了一种称为“模块”的微组织的制备方法。模块化方法可生成均一、可扩展且具有血管化的……

本实验的总体目标是制备可用于组织工程实验的模块化微组织。首先，使用注射器将胶原蛋白溶液吸入聚乙烯导管中，随后使胶原蛋白凝胶化，从而完成第一步。第二步是将聚乙烯导管切割成两毫米长的片段，以形成微组织模块。该操作流程的第三步是将模块与管路分离，最后用内皮细胞对模块进行包被。最终得到的微组织可用于体外细胞实验，通过微流控室研究细胞间的相互作用。此外，还可将这些微组织植入体内，以生成可用于研究微组织在活体中相互作用及重塑过程的组织。大家好，我是来自多伦多大学 Sepan 实验室的 Brendan Long。目前在构建大型三维组织替代物时面临的主要障碍之一，是在植入后缺乏快速的血管化。在本视频中，我们将向您展示如何构建由内皮细胞包被的模块化组织，以帮助克服这一限制。本次操作演示将由来自Septin实验室的术后研究员Deem Chamberlain完成。需要中和的胶原蛋白量取决于聚乙烯管的长度。在本演示中，我们将使用一根长度为2米、内径为0.76毫米、外径为1.22毫米的聚乙烯管。为准备导管，将一根20 G的针头插入导管一端，然后将导管放入自封式气体灭菌袋中进行灭菌。由于1毫升胶原蛋白溶液可填充约2米长的聚乙烯导管，我们将中和1毫升胶原蛋白溶液。将胶原蛋白溶液加入15毫升锥形管中，并将管子置于冰上保存。向管中加入128微升10倍浓度的α-MEM（每毫升胶原蛋白），并通过反复吹打混匀溶液。注意尽量减少气泡产生，随着α-MEM与酸化胶原混合，溶液应变为黄色。接下来，通过加入0.8摩尔的碳酸氢钠中和胶原蛋白。为大致估计pH值，加入碳酸氢钠直至黄色的胶原溶液变为浅粉色。通常每毫升胶原蛋白需要 30 至 60 微升以达到 pH 7.4。为防止中和后的胶原蛋白发生凝胶化，请将其置于冰上直至使用。开始胶原蛋白凝胶化操作时，将装有已灭菌聚乙烯管的袋子移至生物安全柜中，在保持管子仍在袋内的同时剪开袋子的封口端。使用灭菌镊子将一个3 mL注射器连接到先前插入管路一端的20号针头上。将管路的另一端插入中和后的胶原蛋白溶液中，直至管尖到达锥形管底部，锥形管需保持在冰上。下一步操作必须缓慢进行，否则会将气泡引入胶原蛋白溶液中。缓慢回拉注射器活塞，将胶原蛋白吸入聚乙烯管中。当胶原蛋白完全进入管内后，拔出20号针头，并将管子两端重新放回袋中。用胶带密封袋子后，在37摄氏度下孵育60分钟。将使用预组装的切割装置来切割导管。开始此操作时，将导管放置在切割装置前方的无菌托盘中，并从切割装置的出口处将导管装入切割装置内，同时准备一个含有25毫升内皮细胞培养基的50毫升锥形管。为收集切割后的模块，将切割装置设置为切割长度为2毫米的导管段，然后进行导管切割。将切割后的模块置于50毫升锥形管中，在37摄氏度下孵育60分钟。为从管壁上分离胶原模块，将含有模块的50毫升锥形管在中等速度下涡旋震荡10秒。随后静置约五分

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科研

JoVE Journal

Bioengineering

生物工程

微组织使用胶原蛋白的模块的制备凝胶含有细胞

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用于可注射再生治疗和高通量药物筛选的三维微组织

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微加工具有长程纤维取向的三维胶原水凝胶

以下方案介绍了一种基于剪切的挤出方法，用于制备具有纳米级图案化纤维的胶原蛋白水凝胶，该方法可广泛应用于多种组织工程领域。...

用于组织工程的纳米纤维图案化胶原蛋白的制备

了解使用胶原蛋白凝胶制备模块化微组织的方法，通过聚乙烯管成型并包被内皮细胞。该技术适用于体外细胞相互作用研究及体内组织工程应用。

利用含细胞的胶原凝胶模块制备微组织

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