迁移率变化亲和毛细管电泳:一种根据蛋白质-配体复合物的差异迁移分析样品-配体相互作用的方法

体（例如金属离子）与特定蛋白质非共价结合，形成蛋白质-金属离子复合物。这种结合改变了蛋白质的总电荷，从而允许使用亲和毛细管电泳表征这些复合物。

首先，取一个薄的、预处理的玻璃毛细管，内表面有带电的硅醇基团。用EDTA溶液冲洗毛细管。EDTA是一种螯合剂，可以去除任何金属离子杂质。现在，将含有所需蛋白质的样品溶液从其正端或阳极流体动力学地注入毛细管中。

施加高压以产生电渗流，迫使具有固有电荷的天然构象中的蛋白质在毛细管内向阴极移动。记录未结合蛋白质从毛细管迁移模式。

接下来，将特定的配体溶液与蛋白质样品一起引入毛细管中，并施加相同的电压。在毛细管内部，配体分子与靶蛋白非共价结合，形成复合物。

这会引起蛋白质的构象变化，导致其固有电荷发生变化，并影响电荷尺寸比。这些变化调节了它们与毛细管带电表面的相互作用，导致它们与未结合的蛋白质相比

记录电泳迁移率的这些变化，这些变化与蛋白质-配体相互作用的强度相关。

准备好无配体测量方法后，准备有配体测量的方法，首先使用0.1摩尔EDTA溶液在2.5bar下冲洗毛细管1分钟。然后，用去离子水冲洗毛细管。接下来，使用配体溶液在 2.5 bar 下冲洗毛细管 1.5 分钟来平衡毛细管。

然后，以0.05 bar的浓度注入乙酰苯胺溶液6秒，并将入口和出口小瓶更换为含有配体的缓冲小瓶。施加 0.05 bar 2.4 秒，以将乙酰苯胺溶液从毛细管尖端进一步推入。施加10.0千伏6分钟，在200纳米波长下检测乙酰苯胺峰。

像以前一样用EDTA，去离子水和配体溶液冲洗毛细管后，注入蛋白质样品，并将入口和出口小瓶更换为新鲜的含配体缓冲瓶。最终，重复使用和不使用配体的测量。