迁移率偏移亲和毛细管电泳：一种基于蛋白质-配体复合物迁移差异分析样品-配体相互作用的方法

配体（如金属离子）通过非共价作用与特定蛋白质结合，形成蛋白质-金属离子复合物。这种结合会改变蛋白质的整体电荷，从而可以利用亲和毛细管电泳对这些复合物进行表征。

首先，取一根内表面带有带电硅醇基团的预处理薄壁玻璃毛细管。用EDTA溶液冲洗毛细管。EDTA是一种螯合剂，可去除任何金属离子杂质。接着，从毛细管的正极端（阳极）通过流体动力学方式注入含有目标蛋白的样品溶液。 

施加高电压以产生电渗流，促使处于天然构象且带有固有电荷的蛋白质在毛细管内向阴极移动。记录未结合蛋白质从毛细管中的迁移模式。

接下来，将含有特定配体溶液与蛋白质样品一同引入毛细管中，并施加相同的电压。在毛细管内，配体分子通过非共价作用与目标蛋白质结合，形成复合物。

这会诱导蛋白质发生构象变化，从而改变其固有的电荷，并影响其电荷与大小的比值。这些变化调节了蛋白质与毛细管带电表面之间的相互作用，导致其流动行为与未结合的蛋白质不同。

记录这些电泳迁移率的变化，其与蛋白质-配体相互作用的强度相关。

在完成无配体条件下的测量方法制备后，开始准备含配体条件下的测量方法：首先使用0.1摩尔的EDTA溶液在2.5 bar压力下冲洗毛细管1分钟，然后用去离子水冲洗毛细管，接着使用配体溶液在2.5 bar压力下冲洗毛细管1.5分钟以平衡毛细管。

然后，在0.05 bar压力下注入乙酰苯胺溶液6秒，将进样端和出样端的小瓶更换为含有配体的缓冲液小瓶。施加0.05 bar压力2.4秒，以将乙酰苯胺溶液进一步从毛细管末端推入。施加10.0千伏电压运行6分钟，并在200纳米波长处检测乙酰苯胺峰。

用 EDTA、去离子水和配体溶液冲洗毛细管后，注入蛋白质样品，并将进样和出样小瓶更换为含有新鲜配体的缓冲液小瓶。最后，重复进行有无配体条件下的测量。