使用液相色谱-串联质谱分析原发性痛经大鼠的原始和加工的Cyperi Rhizoma样品

代谢组学测量整体和动态代谢反应，与确定传统中药的整体疗效一致。由于身体代谢反应引起的药物成分的变化可以通过代谢组学来确定。利用该技术可以缩小中药有效成分的筛选范围。

通过研究单个成分可以避免片面性。该方法可以同时测定吸收到血液中的内源性代谢物和外源性成分。代谢组学已广泛应用于中医药、药物毒理学、健康管理、体育、食品等领域的研究。

首先，确定所需的Cyperi rhizoma提取物，或CR，或用醋或CRV处理的Cyperi rhizoma，以治疗一组六只Sprague Dawley大鼠三天。使用此公式计算每只大鼠要施加的CR或CRV的体积。要处理CRV，请充分混合100克CR和20克醋，每100毫升含有超过5.5克乙酸，并孵育12小时。

孵育后，将混合物在 110 至 120 摄氏度的铁锅中翻炒 10 分钟。然后，取出混合物，让它在室温下冷却。要制备CR提取物，请用10倍于CR量的纯水浸泡CR两个小时，确保药材低于液位。

接下来，将水和药物的混合物用大火煮沸，并在小火下煮沸20分钟。然后，通过100目滤布过滤内容物，并收集滤液。然后，将收集的滤液浓缩到带有旋转蒸发器的提取物中至每毫升一克。

要制备 CRV 提取物，请执行浸泡、煮沸和浓缩的步骤，如 CR 提取所示。为了测试CR和CRV提取物，将500微升提取物移液到1.5毫升微量离心管中的500微升甲醇中，并涡旋30秒以混合。将样品在 16， 500 g 下在 4 摄氏度下离心 15 分钟。

然后，取出上清液，并将其转移到样品瓶中进行测试。测试样品后，使用分析软件执行主成分分析或PCA和建模。将代谢物的标准化数据导入软件，然后使用Autofit构建分析模型。

最后，使用分数获得PCA的分数散点图。要执行正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA），请将代谢物以及CR和CRV组的标准化数据导入软件。然后，将 CR 和 CRV 数据导入到各自创建的组中。

然后，使用自动拟合构建分析模型，并使用分数获取OPLS-DA的分数散点图。最后，使用VIP获取投影中的可变显著性或OPLS-DA中的VIP值。要识别潜在的差异代谢物，请筛选出VIP值大于1的代谢物。

然后，使用统计软件通过学生的T检验计算筛选代谢物的P值。接下来，要鉴定差异代谢物，请使用注释的代谢物，并筛选出要在KEGG数据库中匹配的差异代谢物。通过绘制热图显示CR和CRV组中差异代谢物的变化。

要检查潜在的代谢途径，请访问MetaboAnalyst数据库。使用途径分析上传不同的代谢物以获得潜在的代谢途径。将不同的代谢物上传到KEGG数据库，以分析潜在的代谢途径。

分析的痛经模型实验显示前列腺素水平存在显著差异。模型CR组和CRV组的大鼠在注射催产素后表现出大量的扭动反应。PCA分析结果表明，在正负离子模式下，CR组和CRV组与模型组的团簇均有显著分离。

采用OPLS-DA筛查代谢差异，散点图结果表明CR组和CRV组是分开的。进行单变量统计分析以确定代谢变化。显示了火山图，其中每个点对应于不同的代谢物。

在阳性模式下观察到63种代谢物和阴性模式下的30种代谢物发生显着变化。使用KEGG和HDMB数据库测定差异代谢物，并列出精确匹配的化合物。计算CR组和CRV组间差异代谢物的定量值并进行聚类。

色块表示每种代谢物相对于其他代谢物的表达方式。与CR组相比，CRV组4种差异代谢物水平升高，11种代谢物水平在正离子模式下下降。在负离子模式的情况下，四种差异代谢物增加，七种代谢物减少。

KEGG通路分析结果表明，差异代谢产物在正负模式下与9个通路相关。差异代谢物越多，结果越好，因此可以链接足够的代谢途径，筛选的关键代谢途径将更准确。