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Methodenartikel

Umwelt Modulationen der Anzahl der Mittelhirn Dopamin-Neuronen in erwachsenen Mäusen

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DOI:

10.3791/52329

⸱

20. Januar 2015

 ,  ,  ,  ,  , 
1Florey Institute of Neuroscience and Mental Health, The University of Melbourne

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt zwei verschiedene Umweltmanipulationen und ein gleichzeitiges Gehirninfusionsprotokoll, um umweltinduzierte Gehirnveränderungen zu untersuchen, die dem adaptiven Verhalten und der Gehirnreparatur bei erwachsenen Mäusen zugrunde liegen.

Zusammenfassung

Lang anhaltende Veränderungen im Gehirn oder "Plastizität des Gehirns" zugrunde liegen, adaptives Verhalten und Gehirn Reparatur nach Krankheit oder Verletzung. Des Weiteren können Wechselwirkungen mit der Umwelt Plastizität des Gehirns induzieren. In zunehmendem Maße wird Forschung versucht zu ermitteln, welche Umgebungen Plastizität des Gehirns vorteilhaft für die Behandlung des Gehirns und Verhaltensstörungen zu stimulieren. Zwei Umwelt Manipulationen beschrieben, die Erhöhung oder Verringerung der Anzahl der Tyrosin-Hydroxylase immun (TH +, das geschwindigkeitsbestimmende Enzym in Dopamin (DA) Synthese) Nervenzellen im erwachsenen Maushirn. Die erste umfasst Paarung männlichen und weiblichen Mäusen zusammen kontinuierlich für 1 Woche, das Mittelhirn TH + Neuronen bei Männern steigt um ca. 12%, verringert jedoch Hirn TH + Neuronen um ca. 12% bei Frauen. Die zweite besteht aus Gehäuse-Mäuse kontinuierlich für 2 Wochen im "angereicherten Umgebungen" (EE), die Laufräder, Spielzeug, Seile, Nistmaterial usw., die icherhöh Mittelhirn TH + Neuronen von ca. 14% bei Männern. Darüber hinaus wird ein Protokoll zur gleichzeitigen Infusion von Medikamenten direkt in das Mittelhirn in diesen Umwelt Manipulationen zur Identifizierung Mechanismen umweltinduzierten Plastizität des Gehirns zugrunde liegenden beschrieben. Beispielsweise ist EE-Induktion größer Hirn TH + -Neuronen durch gleichzeitige Blockade von synaptischen Eingangs auf Mittelhirnneuronen aufgehoben. Zusammen zeigen diese Daten, dass die Informationen über die Umgebung über synaptischen Eingang zum Mittelhirn-Neuronen übertragen, um ein oder aus Ausdruck "DA" Gene zu wechseln. So geeigneten Umweltreize oder Drug-Targeting der zugrunde liegenden Mechanismen, könnte hilfreich sein für die Behandlung von Hirn- und Verhaltensstörungen Ungleichgewichte im Mittelhirn DA in Verbindung gebracht werden (zB Parkinson-Krankheit, Aufmerksamkeits-Defizit-und Hyperaktivitätsstörung, Schizophrenie und Drogenabhängigkeit).

Einleitung

DArgic Signalisierung von Neuronen im ventralen Tegmentum (VTA) und Substantia nigra pars compacta (SNC) des Mittelhirns wird als wichtig für die Belohnung motiviert kognitive, emotionale und motorische Verhaltensweisen sein. Jedoch verursacht zu viel oder zu wenig Mittelhirn DA Signal viele behindernden Symptome in einer Vielzahl von neurologischen Erkrankungen (zB Parkinson-Krankheit, Aufmerksamkeitsdefizit und Hyperaktivität, Schizophrenie und Drogenabhängigkeit). Medikamente, die erhöhen oder zu verringern DA Signal diese Symptome zu lindern, aber sie produzieren auch Nebenwirkungen zuzuschreiben fehlregulierte Signal und Nebeneffekte. Wirksamkeit von Medikamenten auch lehnt Laufe der Zeit durch kompensatorische Reaktionen des Gehirns. Die Herausforderung besteht daher darin, normale Mittelhirn DA Signal gezielter und physiologische Weise wiederherzustellen, und eine bevorzugte Ansatz ist durch Erhöhung oder Verringerung der Anzahl von Mittelhirn DA Neuronen.

Der Nachweis wurde für sev angesammeltrere Jahrzehnte, dass die Expression von Genen und Proteinen in Metabolisierung und Menschenhandel DA und andere Katecholamine in reifen Erwachsenen Zellen beteiligt ist änderbar (in 1 überprüft). Im Mittelhirn, die Zahl der Tyrosin-Hydroxylase immun (TH +, der geschwindigkeitsbestimmende Enzym im DA-Synthese) Neuronen sinkt dann erhöht folgenden Neurotoxin Verwaltung 2,3, während die Zahl der TH immunonegative (TH) Neuronen zeigt das Gegenteil Muster (dh steigt dann ab 3). Dies ist konsistent mit dem Verlust dann der "DA Phänotyp 'von einigen Zellen zu gewinnen. Die Anzahl der TH + und TH- SNc Neuronen wurde auch gezeigt, die in gleichen aber entgegengesetzten Richtungen nach verschiedenen Behandlungen, die die elektrische Aktivität der Zellen zu verändern 4,5 ändern. Zum Beispiel Infusion des kleinen Leitwert, Calcium-aktivierten Kalium (SK) Kanalantagonist Apamin in Hirn für 2 Wochen verringert die Zahl der TH + und erhöht (durch die gleiche Menge) die number der TH SNc Neuronen 4,5. Demgegenüber Infusion des SK-Kanalagonisten 1- EBIO erhöht die Anzahl der TH + und verringert (um den gleichen Betrag) die Anzahl der TH- SNc Neuronen 4,5. Ähnliche Veränderungen wurden im Anschluss an eine Vielzahl von Behandlungen Targeting SNc neuronale Aktivität, darunter auch einige, die afferenten Eingänge 4 gezielt zu sehen. Dieser scheinbare Regelung der Anzahl der SNc DArgic Neuronen durch neuronale Aktivität und afferenten Input ergibt sich die Möglichkeit, die Umwelt oder das Verhalten können die Anzahl der SNc Neuronen beeinflussen. Tatsächlich erwachsenen Mäusen zu verschiedenen Umgebungen ausgesetzt sind, mehr oder weniger Mittelhirn (SNC und VTA) TH + -Neuronen, und zumindest einige dieser Umgebungsbedingte Änderungen werden durch die gleichzeitige Blockade der synaptischen Eingangs im Mittelhirn 6 aufgehoben. Die Ziele dieser Mitteilung sind: (1) liefern weitere Details über, wie wir unsere Umwelt Manipulationen und Drogen Infusionen umzusetzen; und (2) liefern weitere Daten unterstützen unsere Behauptung, dass der environment regelt die Anzahl von Mittelhirn DA Neuronen, über Zuflüsse.

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Protokoll

HINWEIS: Alle experimentellen Verfahren an Tieren wurden durch die Florey Institut für Neurowissenschaften und psychische Gesundheit Tierethikkommission genehmigt und entsprechen den australischen National Health und Medical Research Council veröffentlichten Verhaltenskodex für die Pflege und Verwendung von Tieren zu wissenschaftlichen Zwecken (7. Auflage, 2004).

1. Umwelt Manipulationen

  1. Geschlecht Pairing
    1. Verwenden geschlechtsreif (> 8 Wochen alt), bei gleichaltrigen männlichen und weiblichen Mäusen.
      HINWEIS: Wir verwenden in der Regel C57BL / 6 Mäusen, haben aber die gleichen Ergebnisse mit Swiss-Mäusen in diesem Protokoll hatte. Wir verwenden in der Regel n = 8 Männchen und n = 8 Frauen für jedes Experiment, eingeteilt in n = 2 Stecker-Stecker-Paare (n = 4 Männer), n = 2 Buchse-Buchse-Paare (n = 4 Frauen) und n = 4 Mann-Frau-Paare (n = 4 Rüden und n = 4 Frauen).
    2. Nach der Ankunft in den Tierhalteeinrichtung, Gruppenhaus die Mäuse nach Geschlecht für> 3 Tage zu akklimatisieren. Hier und throughout das Geschlecht Paarung halten fremde Reize aus der Umwelt (zB Umgebungstemperatur, Licht: Dunkel-Zyklus, Nahrung, Wasser, Handhabung und Reinigung) konstant oder gleichmäßig zu verteilen, um allen Mäusen.
    3. Jede Maus zufällig ordnet einem Stecker-Stecker-Paar, eine Buchse-Buchse-Paar oder eine Mann-Frau-Paar. Legen Sie jedes Paar in einen sauberen Käfig isoliert (2 Mäuse / Käfig) mit freien Zugang zu Nahrung und Wasser, und einfach zu beherbergen sie auf diese Weise kontinuierlich für 7 Tage.
      HINWEIS: Routinetierhaltung ist in diesem Zeitraum OK sondern muss gleichermaßen für alle Mäuse verteilt werden. Achten Sie darauf, Paarung von männlichen und weiblichen Geschwistern zu vermeiden.
  2. Umwelt Enrichment
    1. Verwenden geschlechtsreif (> 8 Wochen alt), bei gleichaltrigen männlichen oder weiblichen Mäusen.
      HINWEIS: Wir verwenden typischerweise n = 18 Mäuse pro Experiment in n = 6 / Behandlungsgruppe eingeteilt.
    2. Nach der Ankunft in den Tierhalteeinrichtung halten sie in Gruppen gehalten in identischen Standard untergebracht (SH) (zB Siehe unten) Bedingungen in dieser Phase für> 3 Tage zu akklimatisieren. Hier und im gesamten Experiment halten fremde Reize aus der Umwelt (zB Umgebungstemperatur, Licht: Dunkel-Zyklus, Nahrung, Wasser, Handhabung und Reinigung) konstant oder gleichmäßig zu verteilen, um allen Mäusen.
    3. Zur Anreicherung der Umwelt zu beginnen, nach dem Zufallsprinzip jedes Maus an einen der drei Gruppen zu: SH; Laufrad (RW) oder Umwelt angereichert (EE) und platzieren Sie jede Gruppe von Mäusen, die zusammen in einem identischen sauberen Käfig mit freien Zugang zu Nahrung und Wasser.
      HINWEIS: Hier größeren Rattenhaltekäfige für alle Gruppen, die Messung 27 cm breit, 42 cm lang und 16 cm Tiefe wurden verwendet.
      1. Darüber hinaus bieten die folgenden Umweltbedingungen für jede Gruppe: SH, das nur Wurf (Papier Pellets oder Sägemehl) auf dem Boden; RW mit SH + 2 Laufräder; EE aus RW und Spielzeuge (Seile, Leitern, Tunnel und Objekte wie leere Papierrollen und Stücke von Tissue-Papier), mit dem Explore, spielen, klettern, verstecken und Nest.
      2. Haus sie auf diese Weise kontinuierlich für 14 Tage.
        HINWEIS: Routinetierhaltung ist in diesem Zeitraum OK sondern muss gleichermaßen für alle Mäuse verteilt werden.
    4. Betreff EE Mäusen zusätzliche "Super-Bereicherung" (SE), indem Sie sie zusammen in einen größeren Käfig mit Roman Spielzeug für 1 Stunde / Tag (gleiche Stunde pro Tag), 5 Tage / Woche.
      HINWEIS: Hier wird eine 46 cm breit, 69 cm lang und 40 cm tiefe Kunststoffwanne verwendet wurde.
      1. Pflegen Neuheit, indem sie eine andere Gruppe von Spielzeug jede Sitzung. Reinigen Sie Spielzeug, das sind an Mäusen mit Seifenwasser und 80% Ethanol, um Gerüche zu entfernen erneut vorgelegt werden.
      2. Nach jeder SE Sitzung geben die Mäuse auf ihre EE Käfig. Handle SH und RW Mäusen das gleiche wie SE-Mäuse (mit Ausnahme der SE selbst) in diesem Zeitraum (zB entfernen und jedes SH und RW Maus aus und in seinen Käfig).

2. Osmotischen Pumpe und Gehirninfusionskanüle Implantate für Drug Infusions

  1. Zubereitung
    1. Steriles osmotische Pumpen und Gehirninfusionssets, die im Handel erhältlich sind. Am Tag vor der Implantation unter aseptischen Bedingungen, Prime die Implantate, indem jede Pumpe, Verbindungsrohr und Kanüle mit steriler Arzneimittel oder Vehikel-Lösung (wie in der Anleitung mit den Pumpen geliefert beschrieben). Schließen Sie sie zusammen und Inkubation in steriler Kochsalzlösung über Nacht bei 37 ° C. Inkubieren drogen- und Fahrzeug gefüllte Implantate getrennt um eine Kreuzkontamination zu vermeiden.
  2. Chirurgie.
    HINWEIS: Je nach Land des Experimentators, werden spezielle Tierversuche Genehmigungen oder Zertifikate erforderlich, um solche Arten von Operationen und postoperative Experimente verfolgen.
    1. Sterilisieren Sie alle chirurgischen Geräten und beschäftigen aseptischen Bedingungen in ganz. Anesthetize eine Maus (zB mit 1-2% Isofluran in Luft) und legen Sie sie in einem Sterotaxic Förderturm. Überprüfen Sie die Narkosetiefe während des gesamten Verfahrens und zu verwalten, weiter Betäubung bei Bedarf (zB Fehlen von Gliedmaßen Rückzug auf schädliche Pfote Prise ist ein Hinweis auf eine adäquate Anästhesie). Stellen Sie sicher, die Augen vor Austrocknung durch Schmiermittel Augensalbe geschützt werden und dass die Körpertemperatur der Maus die bleibt während des gesamten Verfahrens normal.
    2. Machen Sie einen Mittelschnitt durch die Haut ab zwischen den Augen und Finishing 2 cm an der hinteren Kante des Schädels posterior. Blunt die Haut von der darunter liegenden Faszie über den Rücken der Maus zu zerlegen, um eine subkutane "Tasche" groß genug, um bequem zu passen die Pumpe und Verbindungsrohr sobald die Kanüle implantiert ist (das Verbindungsrohr nicht bei Beendigung gebogen werden) zu erzeugen. Kratzen Sie deaktivieren Sie die Blende aus über die Dorsalseite des Schädels.
    3. Mit einer etwa 1,5 mm Durchmesser Zahn Grat, einen Drilldown in den Schädel zu dem entsprechenden stereotaktischen Koordinaten until eine dünne, flexible Schicht der Knochenreste. Peel diese Schicht entfernt mit feinen Pinzetten (dies vermeidet eine Beschädigung des darunter liegenden harten Hirnhaut und des Gehirns mit dem dentalen Bohrers). Stellen Sie sicher, der Schädel aller Blut- und Knochenfragmente zu reinigen, und dass es keine weiteren Blutungen.
    4. Mit der Kanüle durch einen Kanülenhalter gehalten wird, setzen Sie die Pumpe und Verbindungsrohr in das Unterhaut "Tasche", die über die Maus zurück. Als nächstes stellen Sie den Spitze der Kanüle an den entsprechenden stereotaktischen Koordinaten und auf der Oberfläche des Gehirns. Die Kanüle in das Gehirn vorsichtig absenken aber halt ca. 1 mm vor der gewünschten Tiefe.
      ANMERKUNG: Die restlichen Tiefe wird nach Aufbringen der ersten Schicht aus Dentalacryl ausgehandelt werden.
    5. Wieder sicher, dass die Oberfläche des Schädels sauber und trocken ist, dann bereiten Sie ein kleines Volumen der zahnärztlichen Acryl und mit einem Zahnstocher, um sie über die gesamte freiliegende Fläche des Schädels zu glätten, einschließlich in den Grat-Loch durch den Schädel um the Kanüle. Bevor der Acryl härtet, senken die Kanülenspitze die verbleibende Tiefe in das Ziel.
    6. Bereiten weiteres kleines Volumen der Dentalacryl und Schicht dieses über den ersten als auch über dem weißen Kunststoffträger für die Kanüle, um die Kanüle zu fixieren. Wiederholen mit zusätzlichen Schichten aus Acryl, wie notwendig.
    7. Sobald die Acrylausgehärtet ist, entfernen Sie vorsichtig den Kanülenhalter und schneiden Sie die weiße Kunststoff abnehmbare Registerkarte Kanüle mit einer Skalpellklinge mit einer Butanflamme erhitzt. Schließlich Naht der Haut über das gesamte Implantat geschlossen.
  3. Postoperative Behandlung der Tiere
    1. Bewerben Wundsalbe auf die Haut Margen und verwalten eine entzündungshemmende, um der Maus (zB Meloxicam, 3 mg / kg sc). Entfernen Sie die Maus aus dem Rahmen, legen Sie sie unter einer Wärmelampe, und beobachten Sie, bis er wieder zu sich kommt. Sie eine Maus, die Operation, um der Gesellschaft von anderen Tieren unterzogen wurde, bis vollständig erholt nicht zurück.
      HINWEIS: Experimental Manipulationen wie Geschlecht Paarung und Umwelt Anreicherung begonnen oder wieder aufgenommen am Tag nach der Operation so früh werden.
    2. Überwachung ihres Körpergewichts, allgemeinen Verhalten und Aussehen täglich. Behandeln Sie Anzeichen einer Infektion (zB Schwellung, Rötung, Eiter) um chirurgische Einschnitte mit topischen Wundsalbe. Gönnen keine Anzeichen Krankheit, Schmerzen, Stress oder Unbehagen (zB Verlust von> 10% des Körpergewichts, sozialer Rückzug, mangelnde Pflege, "Flusen", Bewegung Dysfunktion, Krampfanfälle) mit systemischen Analgetika und / oder Antibiotika wie nötig.
    3. Euthanize Mäusen, wenn> 15% Gewichtsverlust oder Symptome einer Krankheit, Schmerzen, Stress oder Unbehagen sind nicht behebbar innerhalb 1 Woche nach Heilbehandlung.

3. Hirngewebepräparation, Immunhistochemische Verarbeitung und Stereologie

  1. Perfusion
    1. Unmittelbar nach ökologischen / Droge Manipulationen, bereiten das Gehirn für die Studie.
      Hinweis: In den Experimenten hier berichtet die Anzahl von SNc TH + Neuronen wurden gemessen und in jeder der Behandlungsgruppen.
    2. Erste verwalten eine Überdosis des Narkosemittels, um die Mäuse zu töten (zB 100 mg / kg ip Natriumpentobarbiton). Einmal betäubt, aber bevor das Herz aufhört zu schlagen, legen Sie die Maus auf den Rücken und Krawatte oder fassen beide Vorderbeine.
    3. Mit einem Skalpell weggeschnitten die Haut über der Thorax dann durch den Muskel gerade unterhalb des Brustkorbs einschneiden in die Bauchhöhle. Legen Sie eine Klemme an der Schwertfortsatz des Brustkorbs und heben Sie den Brustkorb nach oben und weg von der Leber Freilegung der Membran.
    4. Schnitt durch die Membran und durch die Rippen seitlich auf beiden Seiten mit großen Scheren, bis der Brustkorb kann über den Kopf, um die Lunge und Herz aussetzen zurückgeklappt werden. Mit einer feinen Schere machen einen kleinen Schnitt im rechten Vorhof als Ausgangspunkt für Blut und Lösungen durchströmt, dann durch die Basis des linken ventri geschnittenkel und legen eine Kanüle nach oben durch den linken Ventrikel, dem linken Atrium und in der Aorta.
    5. Klemmen Sie die Kanüle an Ort und Stelle dann Pumpe warm (37 ° C) mit Heparin und 0,1 M phosphatgepufferter physiologischer Kochsalzlösung (PBS) durch das Gefäßsystem, bis die Lösung Verlassen des rechten Vorhof ist völlig frei von Blut. Als nächstes wird die Pumpe kaltem (4 ° C) Fixierlösung (wie beispielsweise 4% Paraformaldehyd in PBS) durch das Gefßsystem, bis der gesamte Maus ist gut fixiert. Entfernen Sie das Gehirn und in PBS mit 30% Saccharose für 2-3 Tage, bis das Gehirn sinkt.
      Hinweis: andere Arten von Gewebe Vorbereitung könnte abhängig von der Expertise in der entsprechenden Labor angewendet werden.
  2. Vorbereitung der im Streubesitz befindlichen Kryoschnitte
    1. Schneiden Sie die Serienschnitte durch die Hirnregionen von Interesse und sammeln diese in PBS.
      HINWEIS: Wir schneiden 40 & mgr; m dicke Schnitte mit Hilfe eines Kryostaten. Andere Arten von Gewebe Schnitte können je nach Know-how in den entsprechende angewendet werdenng Labor.
  3. Immunhistochemie
    1. Führen Standard Immunhistochemie für Proteine ​​von Interesse. Abschnitte in 5% normalem Ziegenserum und 0,3% Triton X-100 in PBS bei Raumtemperatur inkubiert für 30 min, dann eine Immunreaktion mit einem polyklonalen Kaninchen-Anti-TH (1: 400) bei 4 ° C für 48 Stunden inkubiert, anschließend polyklonaler biotinylierter Ziege-Anti -rabbit (1: 1000) bei Raumtemperatur für 2 Std.
    2. Weiter, Inkubation in Avidin-Peroxidase (1: 500) bei Raumtemperatur für 1 h, dann in Kobalt- und Nickel-verstärkten Diamino-benzidin (0,5 mg / ml) bei Raumtemperatur für 18-20 min; für die letzten 3-5 min der Diamino-Benzidin Inkubation Zugabe von Wasserstoffperoxid (0,01%) an Chromogen Ausfällung katalysieren. Dreimal für 10 Minuten jeden Waschabschnitte in PBS vor, nach und zwischen jeder der oben genannten Schritte.
    3. Montieren Sie die Abschnitte über verkleistert Objektträger, Luft trocknen, dann Nissl-Färbung (neutral rot), entwässern in Alkohol, klar (X-3B) und Deckglas.
  4. Stereologie
    1. Schätzen Sie die Gesamtzahl der TH + und TH- SNc (und VTA und LC) Neuronen mit unvoreingenommene stereo Methoden. Stellen Sie sicher, dass die stereologist ist blind für die Behandlung erhalten. Ausschließen Glia auf der Grundlage Soma Durchmesser <5 um und zählen nur jene Zellen, die mit einem sichtbaren Kern.
    2. Identifizieren Sie die SNc (und VTA und LC) von den räumlichen Positionen der TH + Zellen und anatomischen Landmarken / Grenzen nach den Hirnatlas von Paxinos und Watson 7. Graf TH + Zellen innerhalb einer Zählung Rahmen (55 x 55 & mgr; m = 3025 & mgr; m 2) in regelmäßigen vordefinierten Zeitabständen (x = 140 um, y = 140 um für SNc; x = 100 um, y = 100 & mgr; m für VTA und LC) während jeder Kern in jedem vierten Abschnitt.

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Ergebnisse

Erwachsene Mäuse diesen Umwelt Manipulationen unterworfen wurden Zahlen Hirn (SNC und VTA), aber nicht LC verändert, TH + -Neuronen und EE sowie gleichzeitige Hirn Infusion von Picrotoxin oder Bicucullin (GABA A-Rezeptor-Antagonisten) aufhebt EE-Induktion größer SNc TH + Neuronen. Diese Daten wurden zuvor in 6 veröffentlicht. Die vorliegenden Daten wurden in Wiederholungsversuchen als Teil dieser früheren Studie durchgeführt zusammengestellt, aber noch nicht an anderer Stelle veröffentlicht.

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Diskussion

Umwelt Manipulationen

Die Motivation für die Gestaltung dieser Umwelt Manipulationen (Geschlecht Paarung und Umweltanreicherung) war es, ob die Umwelt zu bestimmen, und / oder das Verhalten von der Umwelt aufgefordert, sich mit den Veränderungen in der Anzahl der Mittelhirn DA Neuronen verbunden. Der Schwerpunkt lag daher auf die Bereitstellung von Umgebungen und stimulierende Verhaltensweisen, die wahrscheinlich im Mittelhirn DA Signal engagieren. Dazu gehörten Paarung mit dem ande...

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

Diese Studie wurde durch den Projektzuschuss des National Health and Medical Research Council of Australia (NHMRC) 1022839 unterstützt. AJH ist FT3 Future Fellow (FT100100835 des Australian Research Council (ARC). Das Florey Institute of Neuroscience and Mental Health bedankt sich für die Unterstützung durch den Operational Infrastructure Support Grant der Regierung von Victoria.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
IsofluoraneBaxter Healthcare Pty Ltd, Baxter Drive, NSW 2146, AustralienAHN3640
ALZET Osmotische Pumpe 1002DURECT Corporation, Postfach 530 Cupertino, CA 95015-05300004317
ALZET Infusionsset für das Gehirn 1DURECT Corporation, Postfach 530 Cupertino, CA 95015-05300004760
ALZET Kanülenhalter 1DURECT Corporation, Postfach 530 Cupertino, CA 95015-05300008860
Vertex Monomer Selbsthärtend (dentales Acryllösungsmittel)Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, Niederlanden/a
Vertex Self Curing (dentales Acrylpulver)Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, Niederlanden/a
METACAM (Meloxicam)Troy Laboratories, 98 long Street, smithfield NSW 2164 AustralienL10100
Natrium-PentobarbitonLethabarb, Virbac, Milperra, NSW, Australien571177
Normales Ziegenserum-Chemicon-Temecula, CAS26-Liter-Triton
X-100Merck Millipore Hauptquartier , 290 Concord Road, Billerica, MA 018211.08603.1000
Polyklonales Kaninchen Anti-Tyrosin-HydroxylaseMerck Millipore Hauptquartier , 290 Concord Road, Billerica, MA 01821AB152
Polyklonales biotinyliertes Ziegen-Anti-KaninchenDako Australia Pty. Ltd., Suite 4, Level 4, 56 Berry street, North Sydney, NSW, Australien 2060EO432
AvidinperoxidaseSigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AUA3151-1mg
Diamino-benzidinSigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AUD-5637
Stereo-ErmittlerMicroBrightField Bioscience, 185 Allen Brook Lane, Suite 101, Williston, VT 05495n/a

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Environmental EnrichmentGeschlechterpaarungTH-positive Neuronenosmotische Pumpeninfusionstereotaktische OperationGABAerge synaptische ÜbertragungGehirnplastizitätBlockade des synaptischen Inputs
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