Summary
Ce travail décrit un protocole qui utilise une approche résolue par les composants pour étudier la sensibilisation aux allergènes de pollen de gazon dans une cohorte de patients du sud de la Chine avec une rhinite allergique et / ou de l'asthme.
Abstract
La sensibilisation au pollen d'herbe impose un risque global pour les maladies allergiques des voies aériennes. Bien que la prévention repose sur une enquête locale sur les allergènes du pollen, les données sur ce sujet sont limitées dans le sud de la Chine. Toutes les données disponibles ont été obtenues par des questionnaires autodéclarés, des tests cutanés et des tests IgE totaux ou spécifiques en utilisant des extraits bruts. Pour de nombreuses raisons, ces méthodes ne sont pas fiables. La réactivité au sérum sIgE à l'herbe des Bermudes, à l'herbe Timothy et aux allergènes Humulus scandens dans une cohorte de patients de la Grande Canton (la plus grande ville du sud de la Chine et sa périphérie) avec une rhinite allergique et / ou un asthme ont été examinées à l'aide d'un analyseur d'immunoessai entièrement automatisé en tant que composant Outil de diagnostic résolu (CRD).
Pour la première fois, on a démontré une prévalence considérablement élevée de la positivité de l'herbage Bermuda chez les sudistes chinois avec une rhinite allergique et / ou un asthme. Chez ces patients, une prévalence subtile de sensibilisationÀ l'herbe de Timothy et Humulus scandens a également été noté, ce qui peut résulter d'une réactivité croisée, car les deux derniers ne sont pas fréquents dans la région. Cela a également été soutenu par la détection des composants allergènes.
Les analyseurs d'immunodosage entièrement automatisés peuvent offrir une cohérence satisfaisante entre les régions, les laboratoires et les établissements et au fil du temps. L'automatisé de l'instrument peut permettre une détection standardisée qui n'aurait pas été facilement révélée avant l'avènement de CRD.
Il s'agit d'une étude qui utilise une approche CRD pour étudier la sensibilisation aux allergènes de pollen de gazon dans le sud de la Chine. Il ajoute à la preuve actuelle dans la littérature. Des études futures sont nécessaires pour valider ces résultats. Cependant, bien que CRD soit un outil utile, les résultats obtenus avec l'analyseur de dosage immunologique entièrement automatisé ne devraient pas remplacer d'autres études de laboratoire, évaluations cliniques et expertise médicale.
Introduction
Le pollen d'herbe représente près de 50% des allergies liées à l'immunoglobuline E (IgE) et, en raison de sa nature aérienne, impose un risque global de maladies allergiques des voies respiratoires, en particulier l'asthme et la rhinite allergique 1 , 2 , 3 , 4 . La prévention contre les allergies au pollen dans une région repose sur des informations sur la répartition locale des allergènes du pollen. Malheureusement, le spectre des allergènes sensibilisants varie d'un endroit à l'autre - une observation généralement connue sous le nom de spécificité régionale.
En Chine, un vaste territoire de l'Asie de l'Est, la spécificité régionale de la sensibilisation au pollen d'herbe est compliquée par des données limitées actuellement disponibles dans la partie sud de ce pays au cours des dernières décennies 5 . Une telle pénurie de données a entraîné une difficulté à montrer le sens général du pollen d'herbeDans ce grand pays 6 . De plus, les données très limitées sur les ressortissants chinois ont été largement obtenues à partir de questionnaires auto-rapportés, de tests cutanés (plutôt que de tests sériques de laboratoire), de mesures totales d'IgE (plutôt que d'IgE spécifiques d'allergènes (sIgE)) et de détection de sIgE aux allergènes ( Plutôt que de molécules de composants allergènes).
L'auto-déclaration des symptômes allergiques peut être peu fiable en ce qui concerne les allergènes spécifiques. Les tests de piqûre cutanée, bien que largement accessibles, impliquent l'utilisation d'extraits d'allergènes bruts non standardisés, qui peuvent contenir d'autres composants sensibilisants qui confondent l'interprétation des résultats. La fiabilité du test cutané cutané dépend également de la manipulation habile par des allergologues ou des infirmières spécialisées, l'utilisation récente d'histamine et la compliance du patient (parfois très difficile pour les jeunes enfants). L'IgE totale est utile pour le dépistage d'une allergie mais ne détermine pas judicieusementEtruit des allergènes chez un patient. En outre, presque tous les allergènes contiennent un certain nombre de molécules de composants allergènes. La sensibilisation aux composants majeurs ( p. Ex ., Der p 1 et Der p 2 des acariens domestiques) peut suggérer une allergie "authentique" (allergie à un allergène spécifique, plutôt qu'une fausse positivité due à des réactions croisées avec d'autres allergènes), mais une sensibilisation À certains ( c.-à-d., Le Der-10 à réaction croisée, une tropomyosine) ne peut pas 7 .
Avant la mise en place des diagnostics résolus par des composants (CRD), ces retards décevants entravaient les études d'allergènes en Chine. CRD détecte précisément les composants d'un allergène en utilisant des molécules allergènes recombinantes ou purifiées, ce qui rend la mesure facilement quantifiable et caractérisable 8 . Au cours des dernières décennies, les études sur les allergies ont souvent utilisé des extraits bruts d'allergènes qui contiennent inévitablement un certain nombre de composants non pertinents. Beaucoup de ces coLes composants sont inertes, mais parfois, certains peuvent conduire à des réactions positives confondantes. L'utilisation de molécules allergènes recombinantes ou purifiées dans CRD peut contourner ceci et donc fournir une meilleure précision de test. Lorsqu'il est traité en microarrays, une approche CRD permet d'écouter ou d'identifier rapidement la sensibilisation à des centaines de molécules allergènes chez des sujets individuels. Une étude CRD bien conçue sur la sensibilisation au pollen d'herbe dans le sud de la Chine manque actuellement. Idéalement, une telle étude devrait inclure une population locale d'une couverture géographique considérable, compte pour les pollens d'herbe communément signalés en Chine et abordent les aspects techniques mentionnés ci-dessus. Pour atteindre un niveau pratique de pertinence clinique et pour faciliter le recrutement d'échantillons de sérum, une enquête précoce sur la sensibilisation aux pollens d'herbe comme allergènes inhalés peut également être axée sur les patients atteints de troubles respiratoires allergiques plutôt que sur la population générale.
Ce travail décrit une méthodeUtilisé pour tester la réactivité sérique chez Bermuda Grass, Timothy grass et Humulus scandens chez les patients de la Grande Canton (la plus grande ville du sud de la Chine et ses environs) avec une rhinite allergique et / ou un asthme utilisant l'approche CRD 5 . Ces résultats sur la sensibilisation à ces pollens subtropicaux et tempérés dans le sud de la Chine ajoutent des preuves importantes à celles actuellement dans la littérature.
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Protocol
Le protocole d'étude, y compris l'utilisation de l'échantillon de sérum humain, a été approuvé par le Comité d'éthique, premier hôpital affilié de l'Université médicale de Guangzhou. Tous les participants ont offert un consentement écrit, soit de façon autonome, soit par l'intermédiaire de leurs parents (dans le cas d'un enfant). Le protocole a été enregistré en ligne (Chinese Clinical Trial Registry, Reg No .: ChiCTR-DCC-13004003, voir http://www.chictr.org/cn/).
1. Identification de la population étudiée
REMARQUE: Le référentiel d'informations sur les allergies du Laboratoire clé d'état des maladies respiratoires (AIR-SKLRD) est la principale source de recrutement de patients, car AIR est la plus grande base de données documentée sur les patients pour les tests d'allergènes dans le sud de la Chine 9 , 10 . AIR a stocké des échantillons de sérum de patients depuis près d'une décennie. En bref, ces échantillons stockés ont été préalablement préparés par centrifugation de 5 mL oF sang veineux phlébotomisé pendant 10 min à 3 000 xg et récupération du surnageant. Les échantillons de sérum ont été placés dans des réfrigérateurs de -80 ° C pour un stockage à long terme. Les échantillons répondant aux critères d'inclusion des patients étaient prêts à être utilisés pour tous les tests dans la présente étude.
- À partir de la base de données AIR, récupérer des données sur les patients atteints de rhinite allergique et / ou d'asthme qui ont subi des tests de sérum pour l'allergène à l'herbe entre janvier 2013 et juin 2015, la période d'étude pré-conçue.
- Sélectionnez les patients atteints de rhinite allergique légère à modérée et / ou d'asthme selon la rhinite allergique et son impact sur l'asthme (ARIA) 11 et l'Initiative mondiale pour l'asthme (GINA) 12 lignes directrices. Assignez-les en tant que «groupe d'étude».
- Exclure les patients avec des dossiers médicaux incomplets, ceux perdus pour le suivi, ceux qui refusent de donner un consentement éclairé concernant l'utilisation de leurs échantillons de sérum à des fins scientifiques, ceux qui ont identifié iLa déficience nucléaire, ceux actuellement en immunothérapie ou les agents immunomodulateurs, ou ceux qui ont eu des infections parasitaires.
- Sélectionnez une cohorte contemporaine de patients atteints d'allergies non respiratoires ( c.-à-d., Eczéma, dermatite allergique et allergie alimentaire) selon les mêmes critères d'exclusion et assignez-les comme «groupe témoin».
- Assurez-vous que les échantillons de sérum ont été prélevés avant que des ordonnances ou des traitements ne soient administrés pour minimiser les effets de confusion sur les résultats du laboratoire. Exclure tout échantillon de sérum ne remplissant pas cette exigence.
- Assurez-vous que tous les sujets sont des résidents permanents de toutes les parties de la Grande Canton ( c'est-à-dire nés ou ont vécu ici depuis plus de 10 ans).
2. Étude des flux et des mesures d'intérêt
- Récupérer les échantillons de sérum des patients admissibles de la banque biologique. Pour tester un composant allergène / allergène, utiliser 140 μL de sérum (y compris 100 μL à remplirL'espace mort).
REMARQUE: Le volume sérique total maximal nécessaire pour chaque patient dans cette étude est: 3 allergènes spécifiques et 8 composants allergènes, sIgE = 140 μL * 11 = 1 540 μL. - Lorsque vous utilisez cet instrument, testez principalement les échantillons de sérum pour les sIgE à des allergènes entiers de Bermuda Grass, Timothy Grass et Humulus scandens . Suivez les instructions de la section 3.
NOTE: Ces pollens ont été sélectionnés pour les mesures parce que Bermuda grass 13 , 14 , 15 et Humulus scandens 16 ont été largement signalés en Chine, tandis que Timothy grass 17 , 18 , 19 est une espèce végétale typique qui vit dans des environnements allant du tropical au tempéré Zones et est le plus étudié dans le monde entier. - En second lieu, tester les échantillons de sérum identifiés à l'étape 2.3 pour avoirSIgEs à des allergènes entiers pour la présence de sIgE à des composants allergènes de Bermudes [Cyn d 1 (g216)], Timothy [Phlp 1 (g205), Phl p 4 (g208), Phl p 5 (g215), Phl p 6 (g209 ), Phl p 7 (g210), Phl p 11 (g211) et Phl p 12 (g212)], et les déterminants des glucides réactifs croisés [CCD (o214)]. Suivez les instructions de la section 3.
3. Procédure de test entièrement automatisée utilisant le système d'analyse des immunodosages
REMARQUE: toute la procédure de test d'allergène sIgE, entièrement automatisé et décrit ailleurs 7 , 8 , 9 , 10 , suit le protocole du fabricant.
- Démarrez l'analyseur de dosage immunologique entièrement automatisé ( par exemple, ImmunoCAP1000) et utilisez-le pour effectuer l'immunoessai tout au long de l'étude. Activez l'ordinateur intégré de gestion des données d'information (IDM).
NOTE: L'analyse immunologiqueYzer est habituellement en mode veille. - Lorsque "Primary Power" est allumé, allumez "System Power" et attendez 3 minutes jusqu'à ce que le logiciel intégré commence. Cliquez sur "Load Rinse Solution" et "Load Washing Solution".
- Ajouter 140 μL de sérum dans un flacon pour chaque test d'allergène / composant allergène. Étiquetez chaque flacon contenant 140 μL de sérum avec un numéro d'identification unique à chaque patient.
- À partir de l'interface IDM, exécutez les étapes suivantes en cliquant sur le menu.
- Vérifiez la fenêtre "Liste des demandes" sur le IDM pour vous assurer que "sIgE" est la méthode de test choisie.
- Chargez les tubes d'échantillonnage dans les supports d'échantillons et les tubes de contrôle de qualité dans les racks de contrôle de qualité, avec des codes à barres.
NOTE: Pour chaque patient, les tests ont initialement été prévus pour sIgE à 3 allergènes spécifiques et 8 composants allergènes, ou 346 * 11 (3,806) tubes d'échantillonnage. Pour chaque tube d'échantillonnage, 3 tubes de contrôle de qualitéQui contiennent des niveaux bas, moyens et élevés de contrôle sIgE (voir le tableau des matériaux pour plus de détails) ont été appariés. Finalement, seulement 58 patients qui ont testé un résultat positif dans le test primaire (étape 2.3) ont été examinés plus avant dans le test secondaire (étape 2.3). Le chargement des tubes peut être réglé automatiquement sur la console de l'ordinateur. - Sélectionnez "Charger les réactifs" dans l'écran "Analyse du dosage". Complétez le chargement de l'échantillon et des racks de contrôle de la qualité, solution de développement, conjugué, étalonneurs, support, pipettes, solution d'arrêt et solution de lavage selon la «liste de charge» (voir la table des matériaux pour plus de détails).
- Dans «Charger et Démarrer», appuyez sur «OK».
REMARQUE: À la fin de la mesure, les résultats apparaissent sur l'IDM. - À partir de l'interface IDM, sélectionnez les données à exporter. Cliquez sur "Menu", "Approuver" et "Enregistrer sous" et exportez les résultats de mesure sIgE en tant que fichier de tableur. Importez la feuille de calcul à un logiciel statistique ( p. Ex. SPSS) 10 . En utilisant un module spécifique pour les coefficients de Spearman à partir du menu SPSS, analyse les corrélations de sensibilisation entre ces pollens d'herbe (sIgE positif à l'allergène entier) et les composants du pollen (sIgE positif aux molécules allergènes).
4. Définition de la réactivité sIgE
REMARQUE: Pour un échantillon de sérum non dilué, la gamme de mesure spécifique d'IgE est de 0,35 à 100 kU / L.
- Diluer les échantillons avec des valeurs de sIgE> 100 kU / L 1: 5 et re-dosage. Lorsque la valeur reste supérieure à 100 kU / L, procédez à d'autres dilutions jusqu'à atteindre un niveau de point final jusqu'à 1 000 kU / L.
- Sur la base de la valeur de seuil de 0,35 kU / L, considérez un niveau de sIgE supérieur à 0,35 kU / L pour être positif 5 , 7 , 10 . Évaluez le réactif≥0,35 et <0,70 kU / L), classe 2 (≥0,70 et <3,50 kU / L), classe 3 (≥ 3,50 et <17,50 kU / L), classe 4 (≥ 0,15 et <0,00 kU / L) 17.50 et <50.00 kU / L), classe 5 (≥50.00 et <100.00 kU / L) et classe 6 (≥100.00 kU / L).
5. Analyse statistique
- Analyser les données avec un logiciel statistique ( p. Ex. SPSS) 10 . Indiquer les données quantitatives en tant que moyenne et écart type, les données qualitatives en tant que fourchette médiane et interquartile (IQR) et les données catégoriques comme proportion de résultats positifs.
- Utilisez un test chi-carré pour la comparaison entre les groupes de proportions, un test t non apparié pour les données quantitatives et un test de somme de classement pour les données qualitatives.
- Utilisez le test de Pearson pour les analyses de corrélation entre les données paramétriques, avec les coefficients de corrélation exprimés en "r" et le test de Spearman pour les valeurs non paramétriques, avec tLes coefficients de corrélation exprimés par " r s ". Considérons que la signification statistique soit lorsque P- valeurs <0,05.
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Representative Results
L'analyseur de dosage immuno-automatisé entièrement automatisé utilisé dans cette étude a une structure en phase solide recouverte de couplages covalents d'allergènes ou de composants allergènes qui réagissent avec les molécules d'intérêt (sIgE) dans des échantillons de sérum du patient. Avec un programme automatique, l'analyseur élimine toutes les IgE non spécifiques avec 150 μL de solution de rinçage et les répète 5 fois. Ensuite, il ajoute des anticorps anti-IgE marqués aux enzymes (50 μL) pour générer un complexe. L'anticorps anti-IgE marqué aux enzymes (conjugué) est un anticorps secondaire qui se lie à une IgE spécifique. Les anticorps anti-IgE non consolidés sont éliminés par lavage avec 150 μl de solution de lavage (répétés 3 fois). Le complexe lié est traité avec un agent de développement (50 μL) pendant 9 min à 37 ° C. L'agent de développement est un agent digérant les enzymes qui coupe tous les anticorps anti-IgE liés. Ce dernier émet de la fluorescence sous un état alcalin. La réaction s'arrête avecL'ajout d'une solution d'arrêt alcalin. Après cela, l'instrument comprime la structure en phase solide pour extraire l'éluat et pour mesurer la fluorescence de l'éluat résultant à une longueur d'onde de 470 nm. La fluorescence est linéairement corrélée au niveau absolu des molécules d'analyte intéressant l'éluat. Une valeur de fluorescence plus élevée signifie plus de sIgE dans l'échantillon de sérum. Pour interpréter les résultats du test, le système transforme automatiquement les réponses pour les échantillons en concentrations en utilisant une courbe d'étalonnage. Les données de mesure sont transmises électroniquement au logiciel IDM, qui intègre des fonctions pour le calcul des résultats analytiques, le calcul des statistiques et le reporting des résultats.
Suivant les critères d'inclusion et d'exclusion, la présente étude a étudié le sérum chez 346 patients. Le groupe d'étude comprenait 78 sujets atteints de rhinite allergique seule, 92 avec l'asthme seul et 88 concomitantsL'asthme et la rhinite. Le groupe de contrôle comprenait 88 patients atteints d'allergies non respiratoires. Ces patients étaient âgés de 1 à 87 ans et ont été confirmés comme résidents permanents de toutes les régions de la Grande Canton, la région d'étude cible. Tous les groupes d'étude et le groupe témoin étaient comparables dans les caractéristiques démographiques et sociales, y compris le genre, l'âge et les antécédents familiaux. Parmi les patients du groupe d'étude, 22,5% ont été positifs à Bermudes, 13,6% à Timothy Grass et 7,0% à Humulus scandens . Dans le groupe d'étude, le taux de sensibilisation à tout pollen d'herbe était beaucoup plus élevé que dans le groupe témoin ( tableau 1 ). Tous les patients de Bermuda Grass SIgE négatifs ont également été négatifs pour Timothy grass et Humulus scandens . Il est intéressant de noter que les patients atteints de rhinite allergique et / ou d'asthme ont démontré un taux de sensibilisation remarquablement plus élevé à Bermuda (n = 58, 22,5%) que ceux souffrant d'autres allergies (n = 4, 4,5%).
Humulus scandens ou CCD était inférieure à 30%. En revanche, les patients atteints de réactivité à la graine de Bermuda de classe 4 avaient 67 à 100% de chances de positivité concomitante chez Cyn d 1, les allergènes Timothy Grass, Humulus scandens ou CCD ( figure 1 ). Les niveaux de réactivité de l'herbe Bermuda ont démontré une corrélation significative, avec des chances de positivité pour d'autres IgE de pollen d'herbe ( r s = 0,669, P <0,001).
La sensibilisation à l'herbe Timothy a encore été évaluée par les composants de l'herbicide Timothy à Timothy. Parmi les 35 patients positifs à la pelouse de Timothy, le composant allergène le plus fréquemment détecté était Phl p 4 (100%, 35/35), suivi de Phl p 1(17,1%, 6/35). Trois patients chacun (3/35, 8,6%) étaient positifs pour l'un des Phl p 5, 6, 7, 11 et 12 ( tableau 2 ). Les taux de sérum Phl p 4 sIgE se sont fortement corrélés avec les niveaux d'allergènes de l'herbe Timothy et de la CCD ( r s = 0,941 et 0,928, respectivement, P <0,001; Tableau 3 ). 41,4% (24/58) chez les malades Bermudes et 68,6% (24/35) des patients sensibilisés à l'herbe Timothy étaient sensibles au CCD. L'analyse de corrélation de rang de Spearman a montré une association significative dans la sensibilisation entre CCD et autres allergènes d'herbe ( tableau 3 ).
Figure 1: Co-sensibilisation chez les patients positifs à Bermuda Grass SIgE.
Cette figure montre le pourcentage de patients avec différentes classes de réactivité sIgE à Bermuda (n = 58) et une concomitLa sensibilisation des fourmis à l'herbe de Timothy, Humulus scandens , CCD et autres composants d'allergènes d'herbe. Cliquez ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
| Taux de tests positifs [% (n / patients)] | |||
| Bermuda | Timothy Grass | Humulus scandens | |
| Patients avec AR et / ou AS | 22,5% (58/258) †† ‡ | 13,6% (35/258) † | 7,0% (18/258) |
| Patients avec AR | 21,8% (17/78) †† | 10,2% (8/78) | 7,7% (6/78) |
| Patients avec AS | 22,8% (21/92)†† | 14,1% (13/92) † | 5,4% (5/92) |
| Patients avec AR et AS | 22,7% (20/88) †† | 15,9% (14/88) | 8,0% (7/88) |
| Âge | |||
| <14 ans ou moins | 18,6% (8/43) | 14,0% (6/43) | 7,0% (3/43) |
| > 4 ans | 23,3% (50/215) | 13,5% (29/215) | 7,0% (15/215) |
| Sexe | |||
| Mâle | 25,7% (35/136) | 13,9% (19/136) | 7,4% (10/136) |
| Femelle | 18,8% (23/122) | 13,1% (16/122) | 6,6% (8/122) |
| Patients souffrant d'autres allergies | 4,5% (4/88) ** | 1,1% (1/88) ** | 0 * |
Tableau 1: Patients atteints d'examens sIgE-positifs pour Bermuda Grass, Timothy Grass et Humulus scandens basés sur l'entité de la maladie et les détails démographiques. Une proportion plus élevée de patients atteints de maladies respiratoires allergiques était positive pour les herbes de Bermudes (χ 2 = 14,35, P <0,001), Timothy grass (χ 2 = 10,88, P <0,001) et Humulus scandens (χ 2 = 5,14, P = 0,02 ) Par rapport aux autres contrôles d'allergie ( ** P <0,01, * P <0,05). La proportion de patients ayant un test positif de Bermuda était remarquablement supérieure à la proportion d'herbe Timothy ( ‡; P <0,05) et Humulus scandens ( †† P <0,01). La proportion de patients ayant un test positif de Timothy était plus élevée que celle de Humulus scandens ( † P <0,05). La proportion des tests positifs à l'herbe Bermuda, à l'herbe Timothy et à Humulus scandens sIgE n'a pas varié de manière significative entre les groupes mineur et adulte (χ 2 = 0,07, P = 0,79; χ 2 = 0,06, P = 0,80; χ 2 = 0,11, P = 0,74; respectivement). Les taux de sensibilités au pollen d'herbe n'ont pas été statistiquement différents entre les hommes et les femmes (χ 2 = 1,338, P = 0,25; χ 2 = 0,063, P = 0,80; χ 2 = 0,38, P = 0,54, respectivement). De même, aucune différence significative dans les taux de sensibilité n'a été indiquée entre les patients atteints de rhinite et d'asthme (χ 2 = 0,030, P = 0,985; χ 2 P = 0,558; Χ 2 = 0,528, P = 0,768; respectivement).
| Les patients (%) | Phl p 4 | Phl p 1 | Phl p 5 | Phl p 6 | Phl p 11 | Phl p 7 | Phl p 12 | |
| 28 (80,0%) | + | |||||||
| 4 (11,4%) | + | + | ||||||
| 1 (2,9%) | + | + | + | + | + | + | ||
| 2 (5,7%) | + | + | + + | + | + | + | ||
| Total | 35 (100%) | 6 (17,1%) | 3 (8,6%) | 3 (8,6%) | 3 (8,6%) | 3 (8,6%) | 3 (8,6%) | |
| SIgE a (kU / L) | 0,52, 0,06-2,02 | 0,02, 0,01-0,10 | 0,04, 0,03-0,24 | 0,12 0,03-0,34 | 0,05, 0,02-0,27 | 0,03, 0,02-0,36 | 0,10, 0,04-0,28 |
Tableau 2: Sensibilisation de Timothy Grass selon la positivité et les niveaux de Timothy Grass (N = 35). +, Des tests positifs; A , sIgE niveaux (kU / L) sont indiqués comme la médiane et IQR. Parmi les 35 patients positifs pour l'herbe Timothy, 80.0% étaient uniquement Phl p 4 positifs, tandis que 11.4% étaient positifs pour Phl p 4 ou Phl p 1.
| Allergène | Bermudes | Timothée | Humulus scandens | CCD |
| Bermudes | - | 0,709 ** | 0,682 ** | 0,565 ** |
| Cyn d 1 | 0,583 ** | 0,787 ** | 0,751 ** | 0,865 ** |
| Timothée | 0,709 ** | - | 0.921 ** | 0,856 ** |
| Phl p 4 | 0,645 ** | 0,941 ** | 0,886 * | 0.928 ** |
| Phl p 1 | 0,616 ** | 0,681 ** | 0,712 ** | 0.507 ** |
| Phl p 5 | 0,46 | 0,273 | 0,590 * | 0,624 * |
| Phl p 6 | 0.445 | 0,306 | 0,583 * | 0,569 |
| Phl p 7 | 0.681 * | 0.481 | 0,632 * | 0,531 |
| Phl p 11 | 0,589 * | 0,372 | 0,620 * | 0,568 |
| Phl p 12 | 0,671 * | 0.411 | 0,565 | 0,446 |
| Humulus scandens | 0,682 ** | 0.921 ** | - | 0,853 ** |
Tableau 3: Coefficients de corrélation † pour la positivité entre le CCD et les allergènes au pollen d'herbe. † est présenté comme le coefficient de corrélation r s ; Les analyses de corrélation de Spearman ont été effectuées pour cet ensemble de données non paramétriques. * P <0,05, ** P <0,01.
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Discussion
Les analyseurs d'immunodosage entièrement automatisés peuvent offrir une cohérence satisfaisante entre les régions, les laboratoires et les établissements et au fil du temps. Une telle procédure automatique a été considérée comme supportant de manière substantielle la recherche bancaire et les études cliniques, permettant la détection standardisée de nombreux allergènes et / ou composants allergènes, et identifient une réactivité croisée allergène probable qui n'aurait pas été facilement révélée avant l'avènement des CRD. En outre, toute la procédure de test peut être complétée par un contrôle de qualité strict, permettant des méthodes à haut débit, comme requis dans une enquête sur une grande région géographique. Bien que la procédure de test soit principalement exécutée par une console d'ordinateur, plusieurs problèmes critiques devraient être portés à l'attention. Il est obligatoire que l'instrument soit utilisé dans le respect rigoureux du manuel d'utilisation; Toute aberration pourrait entraîner des erreurs de test inutiles, des dommages mécaniques ou des pertes personnelles du rayon laser ou une tension électrique élevée. Toujours enEn veillant à ce qu'une courbe d'étalonnage correcte et correcte ait été enregistrée dans le système car elle est liée à la précision du test. Sinon, la concentration de sIgE d'un calibreur spécifié doit être mesurée avant les tests de l'échantillon de sérum. Par la suite, le système peut calculer automatiquement et stocker la courbe d'étalonnage pour une utilisation ultérieure. Comme pour les autres techniques de laboratoire, il est également important d'observer la sécurité de la manipulation du sérum humain pour protéger les techniciens contre les infections et éviter de contaminer l'environnement.
Pour la première fois, en utilisant un analyseur d'immunoessai entièrement automatisé comme approche CRD, cette étude a montré une prévalence considérable de la positivité de l'herbicide Bermuda (22,5%) chez les patients atteints de rhinite allergique et / ou d'asthme à Guangzhou, dans le sud de la Chine. Étant donné que Timothy grass et Humulus scandens ne sont pas communs, même inexistants, à Guangzhou, les taux de positivité de Timothy Grass (13,6%) et Humulus scandens sIgE (7,0%) mPeut être attribué à la réactivité croisée entre les pollens d'herbe.
En analysant les allergènes au pollen d'herbe, il a été clairement démontré que tous les patients positifs à l'IgE de Timothy Grass étaient également positifs à l'antigène spécifique de Timothy Phl p 4. Très peu (17,1%) ont été testés positifs à Phl p 1, ce qui était étonnamment différent des données En Europe, où le taux de positivité pour Phl p 1 est beaucoup plus élevé que celui de Phl p 4 18 , 20 , 21 . Étant donné que Phl p 1 est la composante principale de l'herbe de Timothy, le taux prédominant de positivité de Phl p4 sur Phl p 1 dans cette population d'étude peut également suggérer une réactivité croisée probable autre que la sensibilisation "authentique", car Phl p 4 partage une similarité structurelle Avec CCD et un certain nombre d'autres allergènes, y compris les arbres, les légumes et les fruits tropicaux 19 , 22 , 23, 24 . La pertinence clinique de cette observation pourrait être que la majorité des patients positifs à l'herbe de Timothy dans cette étude n'auraient jamais été conseillés de recevoir l'immunothérapie de Timothy Grass, qui utilise actuellement Phl p 1 25 .
Plusieurs limites des méthodes et techniques d'étude doivent être mentionnées. D'abord, étant donné que jusqu'à 3 bandes d'étalonnage différentes peuvent être placées dans un plateau à pipettes / réactifs dans l'analyseur de dosage immunologique, au maximum, trois lots d'essai peuvent être exécutés en même temps. Lorsqu'une lourde charge de travail est requise, comme lors d'un sondage régional plus important, il faut encore beaucoup de temps pour traiter. Deuxièmement, la réactivité croisée avec l'IgA humaine, IgD, IgM et IgG est inexistante aux concentrations physiologiques lors de l'utilisation de l'analyseur à partir de cette étude, de sorte que d'autres approches de recherche sont nécessaires lorsque la réactivité croisée avec ces immunoglobulines est concernée. Troisièmement, malgré la sophistication du devicE, les résultats obtenus avec l'analyseur de dosage immunologique entièrement automatisé ne doivent pas remplacer d'autres recherches de laboratoire, évaluations cliniques et expertise médicale lorsqu'un diagnostic définitif est effectué. Quatrièmement, en raison de l'introduction tardive d'un CRD d'allergène en Chine, plusieurs produits commerciaux de composants de pollen de ruisseau subtropical ne sont pas disponibles ou n'ont été approuvés pour des recherches que récemment. Par conséquent, l'utilisation de cette technique comme approche CRD pour les allergènes repose essentiellement sur la disponibilité commerciale des produits fournis par le fabricant pour une utilisation spécifique dans une région. Dans les régions tropicales et subtropicales avec une complexité omniprésente des pollens végétaux, une étude CRD peut être insuffisante et difficile en raison du manque de produits allergènes correspondants pour les tests. Un tel dilemme pourrait compromettre grandement l'efficacité de cette technique.
Néanmoins, à la connaissance la plus récente, il s'agit d'une étude pionnière qui utilise l'approche CRD tO examiner la sensibilisation aux allergènes de pollen de gazon dans le sud de la Chine. D'autres études peuvent continuer dans cette veine et valider ces résultats.
Jusqu'à présent, les techniques utilisant l'analyseur de dosage immunologique entièrement automatique ont été acceptées comme étalon-or pour les tests sur les allergènes in vitro 26 , 27 . Compte tenu des données très limitées sur la sensibilisation aux allergènes dans le vaste territoire de la Chine, des études à grande échelle utilisant l'immunoessai entièrement automatisé comme approche CRD peuvent combler les lacunes et ajouter aux preuves disponibles dans ce domaine. Il est important de noter que de telles études, en général des collaborations multicentriques et nationales, peuvent nécessiter la mise en réseau d'immunodosages selon un protocole de normalisation.
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Disclosures
Les auteurs n'ont rien à dévoiler.
Acknowledgments
Nous remercions Yueming Su pour son aide dans la préparation de la figure. Cette étude a été financée par la Fondation Guangdong de Science et Technologie (Projet n °: 2014A020212352), le Guangzhou Education Bureau (1201630044; 1201630393) et la National Natural Science Foundation of China (NSFC 81572063; NSFC 81601394).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ImmunoCAP 1000 Instrument | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3800-01 | |
| Phadia Information Data Manager Software Package | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3801-11 | |
| Software Package, ImmunoCAP 1000 | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3801-12 | |
| g2 (Bermuda grass) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4131-01 | |
| g6 (Timothy grass) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4100-01 | |
| w22 (Japanese Hop) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4452-01 | |
| g216 (nCyn d 1) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4972-01 | |
| g205 (rPhl p 1) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5234-01 | |
| g208 (nPhl p 4) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5288-01 | |
| g215 (rPhl p 5b) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5338-01 | |
| g209 (rPhl p 6) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5289-01 | |
| g210 (rPhl p 7) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5290-01 | |
| g211 (rPhl p 11) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5291-01 | |
| g212 (rPhl p 12) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5292-01 | |
| o214 Cross-reacting carbohydrate determinants (CCDs) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5339-01 | |
| Specific IgE Conjugate 400 | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9310-08 | |
| Specific IgE Calibrator Strip | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9459-08 | |
| Specific IgE Curve Control Strip | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9312-08 | |
| Specific IgE Anti-IgE ImmunoCAP | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4417-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Negative Control | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9445-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control L | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9528-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control M | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9529-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control H | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9530-01 | |
| Development Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9439-08 | |
| Stop Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 34-2271-58 | |
| Washing Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9202-08 | |
| FluoroC | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9264-01 | |
| Maintenance Solution Kit | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9476-01 |
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