Summary
Questo lavoro descrive un protocollo che utilizza un approccio risolti dai componenti per studiare la sensibilizzazione agli allergeni pollenici in una coorte di pazienti provenienti dalla Cina meridionale con rinite allergica e / o asma.
Abstract
La sensibilizzazione al polline dell'erba impone un rischio globale per le malattie allergiche delle vie aeree. Sebbene la prevenzione si basi sull'indagine locale degli allergeni pollini, i dati su questo argomento sono limitati nella Cina meridionale. Tutti i dati disponibili sono stati ottenuti tramite questionari di autocertificazione, test di prick cutanei e test IgE totali o specifici utilizzando estratti grezzi. Per molti motivi questi metodi sono inaffidabili. La reattività del siero serpente all'erba di Bermuda, l'erba di Timothy e gli allergeni di Humulus scandens in una coorte di pazienti provenienti da Greater Guangzhou (la città più grande della Cina meridionale e le sue periferie) con rinite allergica e / o asma sono state esaminate usando un analizzatore di immunoassay completamente automatizzato come componente - strumento diagnostico (CRD) risolto.
Per la prima volta, è stata dimostrata una prevalenza notevolmente elevata della positività sIgE in erba bermuda nei meridionali cinesi con rinite allergica e / o asma. In questi pazienti, una sottile prevalenza di sensibilizzazioneAnche per l'erba di Timothy e gli scandini di Humulus , che possono derivare dalla reattività incrociata, in quanto i due ultimi non sono comuni nella regione. Questo è stato anche supportato dall'individuazione di componenti allergeni.
Gli analizzatori di immunoassay completamente automatizzati possono offrire consistenza soddisfacente tra regioni, laboratori e istituzioni e nel tempo. L'automatismo dello strumento può consentire una rilevazione standardizzata che non sarebbe stata immediatamente rivelata prima dell'avvento del CRD.
Questo è uno studio che utilizza un approccio CRD per indagare la sensibilizzazione agli allergeni pollenici dell'erba in Cina meridionale. Aggiunge le evidenze attuali in letteratura. Studi futuri sono necessari per convalidare questi risultati. Tuttavia, sebbene CRD sia uno strumento utile, i risultati ottenuti con l'analizzatore immunologico completamente automatizzato non dovrebbero sostituire altre indagini di laboratorio, valutazioni cliniche e competenze mediche.
Introduction
Il polline erba rappresenta quasi il 50% delle allergie legate all'immunoglobulina E (IgE) e, a causa della sua natura aerea, impone un rischio globale di malattie allergiche delle vie aeree, in particolare l'asma e la rinite allergica 1 , 2 , 3 , 4 . La prevenzione delle allergie polline di erbe in una regione si basa su informazioni sulla distribuzione locale degli allergeni pollenici. Purtroppo lo spettro degli allergeni sensibilizzanti varia da luogo a luogo, un'osservazione generalmente nota come specificità regionale.
In Cina, un vasto territorio dell'Asia orientale, la specificità regionale della sensibilizzazione del polline erboso è ulteriormente complicata da dati limitati attualmente disponibili dalla parte meridionale del paese negli ultimi decenni 5 . Tale pacchione nei dati ha portato ad una difficoltà nel mostrare la sensibilità generale del polline dell'erbaIn questo grande paese 6 . Inoltre, i dati molto limitati sui meridionali cinesi sono stati ottenuti in gran parte da questionari di autocertificazione, test di prick cutanei (piuttosto che da test di siero di laboratorio), misure totali IgE (anziché IgE specifiche allergene) e rilevamento di allergeni a Piuttosto che alle molecole di componenti allergene).
L'auto-segnalazione di sintomi allergici può essere inaffidabile quando si tratta di allergeni specifici. I test di pelli cutanei, pur ampiamente accessibili, implicano l'uso di estratti di allergeni grezzi non standardizzati, che possono contenere altri componenti sensibilizzanti che confondono l'interpretazione dei risultati. L'affidabilità del test cutaneo della pelle dipende anche dalla manipolazione abile da parte di allergisti o infermieri specializzati, l'uso recente di istamina e la conformità del paziente (a volte molto difficile per i bambini piccoli). L'IgE totale è utile per la screening di un'allergia, ma non determina sensibilmenteE offendere allergeni in un paziente. Inoltre, quasi tutti gli allergeni contengono una serie di molecole di componenti allergeni. La sensibilizzazione dei componenti principali ( es. Der p 1 e Der p 2 da acari della polvere domestica) può suggerire un'allergia "genuina" (allergia ad un allergene specifico, piuttosto che falsa positività dovuta a reazioni trasversali con altri allergeni), ma sensibilizzazione A determinati ( cioè il Der p 10 cross-reattivo, un tropomosiosina) non può essere 7 .
Prima di introdurre la diagnostica risolta con componenti (CRD), questi fallimenti deludenti impedivano studi di allergene in Cina. CRD rileva con precisione i componenti di un allergene utilizzando molecole allergene ricombinanti o purificate, rendendo quindi la misurazione facilmente quantificabile e caratterizzabile 8 . Negli ultimi decenni, gli studi di allergia hanno spesso impiegato estratti grezzi di allergeni che inevitabilmente contengono una serie di componenti irrilevanti. Molti di questi coI componenti sono inerti, ma occasionalmente, alcuni potrebbero portare a confondere reazioni positive. L'uso di molecole allergene ricombinanti o purificate in CRD può aggirare questo e quindi fornire una migliore precisione di test. Quando vengono elaborati in microarray, un approccio CRD rapida o identifica la sensibilizzazione a centinaia di molecole di allergeni nei singoli soggetti. Attualmente manca uno studio CRD ben progettato sulla sensibilizzazione del polline erboso nel sud della Cina. Idealmente, un tale studio dovrebbe includere una popolazione locale di notevole copertura geografica, tenendo conto dei pollini d'erba comunemente riportati in Cina e affrontare gli aspetti tecnici sopra menzionati. Per raggiungere un livello pratico di rilevanza clinica e per facilitare l'assunzione di campioni di siero, le prime indagini sulla sensibilizzazione dei pollini d'erba come allergeni inalanti possono anche essere concentrati su pazienti con disturbi respiratori allergici, piuttosto che sulla popolazione generale.
Questo lavoro descrive un metodoUtilizzato per testare la reattività del sIgE sierico all'erba di Bermuda, l'erba Timothy e gli scandini Humulus nei pazienti di Greater Guangzhou (la più grande città della Cina meridionale e le sue periferie) con rinite allergica e / o asma utilizzando l'approccio CRD 5 . Questi risultati sulla sensibilizzazione a questi pollini subtropicali e temperati dell'erba nel sud della Cina aggiungono elementi importanti a quelli attualmente in letteratura.
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Protocol
Il protocollo di studio, incluso l'uso del campione di siero umano, è stato approvato dal Comitato Etico, primo ospedale affiliato di Guangzhou Medical University. Tutti i partecipanti hanno fornito un consenso informato scritto, indipendentemente o tramite i loro genitori (nel caso dei bambini). Il protocollo è stato registrato in linea (Registro di prova clinico cinese, Registro no: ChiCTR-DCC-13004003, fare riferimento a http://www.chictr.org/cn/).
1. Identificazione della popolazione dello studio
NOTA: Il repository di informazione sull'allergia del Laboratorio chiave di Stato della malattia respiratoria (AIR-SKLRD) è la principale fonte di reclutamento del paziente, in quanto AIR è il database più documentato di pazienti per test di allergeni nella Cina meridionale 9 , 10 . AIR ha conservato campioni di siero di pazienti per quasi un decennio. In breve, questi campioni conservati sono stati precedentemente preparati mediante centrifugazione di 5 mL oF sangue venoso phlebotomized per 10 min a 3.000 xg e recupero del supernatante. I campioni di siero sono stati collocati in frigoriferi da -80 ° C per l'immagazzinamento a lungo termine. I campioni che hanno incontrato i criteri di inclusione del paziente erano pronti per essere utilizzati per tutti i test nello studio in corso.
- Dalla base del database AIR, recuperare i dati sui pazienti con rinite allergica e / o asma che hanno sottoposto i test sierici per l'allergene erboso sIgE tra gennaio 2013 e giugno 2015, il periodo di studio pre-progettato.
- Selezionare i pazienti con rinite allergica e / o asma da lieve a moderata secondo la rinite allergica e il suo effetto sull'asma (ARIA) 11 e sull'iniziativa globale per l'asma (GINA). Assegnali come "gruppo di studio".
- Escludere i pazienti con incompleta documentazione medica, quelli persi per il follow-up, quelli che rifiutano di dare consensi informati sull'uso dei loro campioni di siero per scopi scientifici, quelli con iLa disfunzione medica, quelli attualmente in immunoterapia o agenti immunomodulatori, o quelli che si trovano ad avere infezioni parassitarie.
- Selezionare una coorte contemporanea di pazienti con allergie non respiratorie ( es. Eczema, dermatite allergica e allergia alimentare) secondo gli stessi criteri di esclusione e assegnarli come "gruppo di controllo".
- Assicurarsi che i campioni di siero siano stati raccolti prima di qualsiasi prescrizione o trattamento è stato dato per ridurre al minimo gli effetti confondenti sui risultati del laboratorio. Escludere qualsiasi campione di siero che non soddisfi questo requisito.
- Assicurarsi che tutti i soggetti siano residenti permanenti da tutte le parti del Grande Cantone ( vale a dire, nati o hanno vissuto lì per più di 10 anni).
2. Flusso di studio e misurazioni di interesse
- Recuperare i campioni di siero di pazienti ammissibili dalla biobank. Per testare un componente allergenico / allergene, utilizzare 140 μL di siero (compresa 100 μl per riempireLo spazio morto).
NOTA: Il volume totale del siero totale necessario per ogni paziente in questo studio è: 3 allergeni specifici e 8 componenti allergeni, sIgE = 140 μL * 11 = 1.540 μL. - Quando si utilizza questo strumento, prima di tutto testare i campioni di siero per sIgEs a allergeni interi dell'erba di Bermuda, erba Timothy e Hagenus scandens . Seguire le istruzioni riportate nella Sezione 3.
NOTA: Questi pollini sono stati selezionati per le misurazioni perché gli erba di Bermuda 13 , 14 , 15 e Humulus scandens 16 sono stati ampiamente riportati in Cina, mentre l'erba Timothy 17 , 18 , 19 è una tipica specie vegetale che vive in ambienti che vanno dalla tropicale al temperato Zone ed è più studiata in tutto il mondo. - In secondo luogo, prova i campioni di siero identificati nel passaggio 2.3 per avereSIgEs a allergeni interi per la presenza di sIgEs ai componenti allergeni di Bermuda [Cyn d 1 (g216)], Timothy [Phlp 1 (g205), Phl p 4 (g208), Phl p 5 (g215), Phl p 6 (g209 ), Phl p 7 (g210), Phl p11 (g211) e Phl p 12 (g212)], e determinanti carboidrati cross-reattivi [CCD (o214)]. Seguire le istruzioni riportate nella Sezione 3.
3. Procedura di prova completamente automatizzata usando il sistema di analisi Immunoassay
NOTA: L'intera procedura di test di allergen sIgE, completamente automatizzata e descritta altrove 7 , 8 , 9 , 10 , segue il protocollo del produttore.
- Avviare l'analizzatore di immunoassay completamente automatizzato ( ad es. ImmunoCAP1000) e utilizzarlo per eseguire l'immunoassay durante lo studio. Accendere il computer IDM incorporato.
NOTA: L'analogo dell'immunoassayYzer è in modalità stand-by. - Con "Primary Power" acceso, accendere la "Power System" e attendere 3 minuti fino a quando il software incorporato inizia. Fare clic su "Carica risciacquo" e "Carica soluzione di lavaggio".
- Aggiungere 140 μL di siero in una fiala per ogni test di componenti allergeni / allergeni. Etichettare ogni fiala contenente 140 μL di siero con un numero di identificazione unico per ogni paziente.
- Dall'interfaccia IDM, eseguire le seguenti operazioni facendo clic sul menu.
- Controllare la finestra "Richiedi elenco" sull'ID per assicurarsi che "sIgE" sia il metodo di prova da scegliere.
- Caricare i tubi di campionamento nei rack di campionamento e nei tubi di controllo della qualità nei rack di controllo di qualità, con codici a barre.
NOTA: Per ciascun paziente, è stato inizialmente previsto un test per sIgE a 3 allergeni specifici e 8 componenti allergeni o 346 * 11 (3.806) tubi campione. Per ogni tubo di campionamento, 3 tubi di controllo qualitàChe contengono bassi, medi e elevati livelli di controllo sIgE (vedere la tabella dei materiali per i dettagli) sono stati abbinati. Infine, solo il 58 pazienti che hanno provato positivi nel test primario (fase 2.3) sono stati ulteriormente esaminati nel test secondario (fase 2.3). Il caricamento dei tubi può essere impostato automaticamente sulla console del computer. - Selezionare "Load Reagents" nella schermata "Processing Assay". Completa il caricamento del rack di campionamento e di controllo qualità, soluzione di sviluppo, coniugato, calibratori, portante, pipette, soluzione di arresto e soluzione di lavaggio secondo la "lista di caricamento" (vedere la tabella dei materiali per i dettagli).
- In "Carica e inizio", premi "OK".
NOTA: Al termine della misurazione, i risultati vengono visualizzati sull'IDM. - Dall'interfaccia IDM, selezionare i dati da esportare. Fai clic su "Menu", "Approva" e "Salva con nome" e esporta i risultati della misurazione sIgE come un foglio di foglio di calcolo. Importa il file foglio di calcolo in un software statistico ( ad esempio, SPSS) 10 . Utilizzando un modulo specifico per i coefficienti di Spearman dal menu SPSS, analizzare le correlazioni nella sensibilizzazione tra questi pollini d'erba (sIgE positivo all'intero allergene) e componenti polline (sIgE positivo alle molecole allergene).
4. Definizione della reattività di sIgE
NOTA: Per un campione di siero non diluito, la gamma di misura specifica IgE è di 0,35 a 100 kU / L.
- Diluire i campioni con valori sIgE> 100 kU / L 1: 5 e re-assay. Se il valore rimane superiore a 100 kU / L, procedere con ulteriori diluizioni fino a raggiungere un livello finale fino a 1000 kU / L.
- Sulla base del valore di soglia di 0,35 kU / L, considerare un livello di sIgE superiore a 0,35 kU / L per essere positivo 5 , 7 , 10 . Valuta il reattivo(≥0,35 e <0,70 kU / L), classe 2 (≥0,70 e <3,50 kU / L), classe 3 (≥3,50 e <17,50 kU / L), classe 4 (≥ 17,50 e <50,00 kU / L), classe 5 (≥50,00 e <100,00 kU / L) e classe 6 (≥100,00 kU / L).
5. Analisi statistica
- Analizzare i dati con software statistico ( es. SPSS) 10 . Rapporti i dati quantitativi come la media e la deviazione standard, i dati qualitativi come intervalli medi e interquartile (IQR) e i dati categorici come percentuale dei risultati positivi.
- Utilizzare un test chi-quadrato per il confronto tra le categorie di proporzioni, un t-test indipendente per i dati quantitativi e un test di rango-somma per i dati qualitativi.
- Utilizzare il test di Pearson per analisi di correlazione tra i dati parametrici, con i coefficienti di correlazione espressi come "r" e il test di Spearman per i valori non parametrici, con tI coefficienti di correlazione espressi come " r s ". Considerare che la significatività statistica sia quando P valori <0.05.
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Representative Results
L'analizzatore immunologico completamente automatizzato utilizzato in questo studio ha una struttura a fase solida ricoperta da accoppiamenti covalenti di allergeni o componenti allergeni che reagiscono con le molecole di interesse (sIgE) in campioni di siero del paziente. Con un programma automatico, l'analizzatore esce da tutte le IgE non specifiche con 150 μL di soluzione di risciacquo e ripete questa 5 volte. Quindi aggiunge anticorpi anti-IgE etichettati con enzimi (50 μL) per generare un complesso. L'anticorpo anti-IgE etichettato con enzima (coniugato) è un anticorpo secondario che si lega ad un IgE specifico. Gli anticorpi anti-IgE non legati vengono eliminati lavando con 150 μL di soluzione di lavaggio (ripetuto 3 volte). Il complesso legato viene trattato con un agente sviluppante (50 μL) per 9 minuti a 37 ° C. L'agente sviluppante è un agente digestivo enzimatico che taglia tutti gli anticorpi anti-IgE legati. Quest'ultima emette fluorescenza in condizioni alcaline. La reazione viene interrotta conL'aggiunta di soluzione di arresto alcalino. Successivamente, lo strumento comprime la struttura a fase solida per spremere l'eluato e per misurare la fluorescenza dell'elua ottenuto ad una lunghezza d'onda di 470 nm. La fluorescenza è linearmente correlata al livello assoluto delle molecole di analita di interesse nell'elua. Un maggiore valore di fluorescenza significa più sIgE nel campione di siero. Per interpretare i risultati del test, il sistema trasforma automaticamente le risposte per i campioni alle concentrazioni utilizzando una curva di calibrazione. I dati di misura vengono trasferiti elettronicamente al software IDM, che integra funzioni per il calcolo dei risultati analitici, il calcolo delle statistiche e il reporting dei risultati.
A seguito dei criteri di inclusione e di esclusione, il presente studio ha studiato il siero da 346 pazienti. Il gruppo di studio comprendeva 78 soggetti con solo rinite allergica, 92 con solo asma e 88 concomitantiCon asma e rinite. Il gruppo di controllo ha incluso 88 pazienti con allergie non respiratorie. Questi pazienti erano di età compresa tra 1-87 anni e sono stati confermati come residenti permanenti da tutte le parti del Grande Cantone, la regione di studio. Tutti i gruppi di studio e il gruppo di controllo sono stati comparabili in caratteristiche demografiche e sociali, tra cui il sesso, l'età e la storia della famiglia. Dei pazienti del gruppo di studio, il 22,5% ha provato positivo all'erba di Bermuda, al 13,6% all'erba di Timothy e al 7,0% per gli Hagenus scandens . Nel gruppo di studio, il tasso di sensibilizzazione a qualsiasi polline erboso era molto superiore a quello del gruppo di controllo ( Tabella 1 ). Tutti i pazienti simmetrici dell'erba di Bermuda erano anche negativi per l'erba Timothy e gli scandini Humulus . È interessante osservare che i pazienti con rinite allergica e / o asma hanno dimostrato una sensibilizzazione al seno di Bermuda (n = 58, 22,5%) rispetto a quelle con altre allergie (n = 4, 4,5%).
scandens o CCD era inferiore al 30%. Al contrario, i pazienti con reattività reattiva a base di erba bermuda di classe 4 avevano una probabilità di 67-100% di positività concomitante a Cyn d 1, allergeni di erbe Timothy, scandini Humulus o CCD ( Figura 1 ). I livelli di reattività del sermone di Bermuda hanno dimostrato una correlazione significativa, con probabilità di positività ad altri IgE di polline d'erba ( r s = 0,669, P <0,001).
La sensibilizzazione del timothy erba è stata ulteriormente valutata da sIgE ai componenti di erba Timothy. Tra i 35 pazienti eritopotenti Timothy, la componente allergene più frequentemente rilevata era Phl p 4 (100%, 35/35), seguita da Phl p 1(17,1%, 6/35). Tre pazienti ciascuno (3/35, 8,6%) erano positivi per uno di Phl p 5, 6, 7, 11 e 12 ( Tabella 2 ). I livelli di sIgE del siero di Phl p 4 sono correlati fortemente con i livelli totali di allergenico e di CCD ( r s = 0.941 e 0.928 rispettivamente, P <0.001, Tabella 3 ). Il 41,4% (24/58) dei pazienti erbatrici Bermuda e il 68,6% (24/35) dei pazienti eritemati Timothy erano sensibili al CCD. L'analisi della correlazione di rango di Spearman ha mostrato una significativa associazione nella sensibilizzazione tra CCD e altri allergeni erbosi ( Tabella 3 ).
Figura 1: Co-sensibilizzazione tra i pazienti positivi a Bermuda Erba sIgE.
Questa figura mostra la percentuale di pazienti con diverse classi di reattività di sIgE all'erba di Bermuda (n = 58) e un concomitanteAnticensibilizzazione all'erba di Timothy, Hagenus scandens , CCD e altri componenti dell'allergene in erba. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
| Tasso di test positivi [% (n / pazienti)] | |||
| Erba di Bermuda | Erba di Timoteo | Humulus scandens | |
| Pazienti con AR e / o AS | 22,5% (58/258) † † ‡ | 13,6% (35/258) † | 7,0% (18/258) |
| Pazienti con AR | 21,8% (17/78) †† | 10,2% (8/78) | 7,7% (6/78) |
| Pazienti con AS | 22,8% (21/92)†† | 14,1% (13/92) † | 5,4% (5/92) |
| Pazienti con AR e AS | 22,7% (20/88) †† | 15,9% (14/88) | 8,0% (7/88) |
| Età | |||
| <14 anni o più | 18,6% (8/43) | 14,0% (6/43) | 7,0% (3/43) |
| > 4 anni | 23,3% (50/215) | 13,5% (29/215) | 7,0% (15/215) |
| Sesso | |||
| Maschio | 25,7% (35/136) | 13,9% (19/136) | 7,4% (10/136) |
| Femmina | 18,8% (23/122) | 13,1% (16/122) | 6,6% (8/122) |
| Pazienti con altre allergie | 4,5% (4/88) ** | 1,1% (1/88) ** | 0 * |
Tabella 1: Pazienti con test sIgE positivi per erba bermuda, Timothy Grass e scaglie Humulus basati su soggetti della malattia e dettagli demografici. Una maggiore percentuale di pazienti affetti da malattie respiratorie allergiche era positiva per l'erba Bermuda (χ 2 = 14,35, P <0,001), erba Timothy (χ 2 = 10,88, P <0,001) e Humulus scandens (χ 2 = 5,14, P = 0,02 ) Rispetto agli altri controlli di allergia ( ** P <0.01, * P <0.05). La percentuale di pazienti con un test erbaceo positivo di Bermuda era notevolmente superiore alla proporzione all'erba di Timothy ( ‡; P <0,05) e Hagenus scandens ( †† P <0,01). La percentuale di pazienti con un test erboso Timothy positivo era superiore a quello dei Hagen scandens ( † P <0,05). La percentuale di test positivi per l'erba della Bermuda, l'erba Timothy e il HUMPUS scandens sIgE non varia notevolmente tra i gruppi minori e quelli adulti (χ 2 = 0,07, P = 0,79, χ 2 = 0,06, P = 0,80, χ 2 = 0,11, P = 0,74, rispettivamente). Le percentuali di sensibilità al polline erboso non erano statisticamente differenti tra i maschi e le femmine (χ 2 = 1.338, P = 0.25, χ 2 = 0.063, P = 0.80, χ 2 = 0.38, P = 0.54 rispettivamente). Allo stesso modo, non sono state indicate significative differenze nei tassi di sensibilità tra i pazienti con rinite e asma (χ 2 = 0,030, P = 0,985, χ 2 P = 0,558; Χ 2 = 0,528, P = 0,768; rispettivamente).
| Pazienti (%) | Phl p 4 | Phl p 1 | Phl p 5 | Phl p 6 | Phl p 11 | Phl p 7 | Phl p 12 | |
| 28 (80,0%) | + | |||||||
| 4 (11,4%) | + | + | ||||||
| 1 (2,9%) | + | + | + | + | + | + | ||
| 2 (5,7%) | + | + | + + | + | + | + | ||
| Totale | 35 (100%) | 6 (17,1%) | 3 (8,6%) | 3 (8,6%) | 3 (8,6%) | 3 (8,6%) | 3 (8,6%) | |
| SIgE a (kU / L) | 0,52, 0,06-2,02 | 0,02, 0,01-0,10 | 0,04, 0,03-0,24 | 0,12, 0,03-0,34 | 0,05, 0,02-0,27 | 0,03, 0,02-0,36 | 0,10, 0,04-0,28 |
Tabella 2: Sensibilizzazione Timothy Erba secondo la positività e i livelli di componenti Timothy Grass (N = 35). +, Test positivi; A , i livelli di sIgE (kU / L) sono mostrati come media e IQR. Dei 35 pazienti affetti da eritema di Timothy, l'80,0% era esclusivamente Phl p 4-positivo, mentre 11,4% era positivo a Phl p 4 o Phl p 1.
| Allergene | Bermuda | Timoteo | Humulus scandens | CCD |
| Bermuda | - | 0,709 ** | 0,682 ** | 0,565 ** |
| Cyn d 1 | 0,583 ** | 0,787 ** | 0.751 ** | 0.865 ** |
| Timoteo | 0,709 ** | - | 0,921 ** | 0,856 ** |
| Phl p 4 | 0.645 ** | 0,941 ** | 0,886 * | 0.928 ** |
| Phl p 1 | 0,616 ** | 0,681 ** | 0,712 ** | 0,507 ** |
| Phl p 5 | 0.46 | 0,273 | 0.590 * | 0,624 * |
| Phl p 6 | 0.445 | 0.306 | 0,583 * | 0,569 |
| Phl p 7 | 0,681 * | 0.481 | 0,632 * | 0,531 |
| Phl p 11 | 0,589 * | 0,372 | 0,620 * | 0,568 |
| Phl p 12 | 0,671 * | 0,411 | 0,565 | 0.446 |
| Humulus scandens | 0,682 ** | 0,921 ** | - | 0,853 ** |
Tabella 3: Coefficienti di correlazione † per la positività tra CCD e gli allergeni pollenici erbosi. † viene presentato come il coefficiente di correlazione r s ; Le analisi di correlazione di Spearman sono state eseguite per questo set di dati non parametrico. * P <0,05, ** P <0,01.
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Discussion
Gli analizzatori di immunoassay completamente automatizzati possono offrire consistenza soddisfacente tra regioni, laboratori e istituzioni e nel tempo. Tale procedura automatica è stata trovata a sostenere sostanzialmente la ricerca sul banco e gli studi clinici, consentire la rilevazione standardizzata di molti componenti allergeni e / o allergeni e identificare la probabilità cross-reattività allergica che non sarebbe stata immediatamente rivelata prima dell'avvento dei CRD. Inoltre, l'intera procedura di test può essere completata con un controllo di qualità rigoroso, permettendo metodi ad alto rendimento, come richiesto in un sondaggio di una grande regione geografica. Sebbene la procedura di test sia per la maggior parte gestita da una console del computer, è necessario attirare diversi problemi critici. È obbligatorio che lo strumento sia usato in modo rigoroso rispetto al manuale dell'utente; Qualsiasi aberrazione potrebbe provocare errori di prova inutili, danni meccanici o danni personali da raggi laser o ad alta tensione elettrica. Sempre enAssicurarsi che una corretta e corretta curva di calibrazione sia stata memorizzata nel sistema, in quanto ciò è legato all'esattezza del test. Altrimenti, la concentrazione di sIgE di un calibratore specificato dovrebbe essere misurata prima dei test del campione di siero. Successivamente, il sistema può calcolare e memorizzare automaticamente la curva di calibrazione per un successivo utilizzo. Come per altre tecniche di laboratorio, è anche importante osservare la sicurezza della manipolazione del siero umano per proteggere i tecnici dalle infezioni e per evitare di contaminare l'ambiente.
Per la prima volta, utilizzando un analizzatore immunologico completamente automatizzato come approccio CRD, questo studio ha mostrato una notevole prevalenza della positività sIgE in erba bermuda (22,5%) nei pazienti con rinite allergica e / o asma a Guangzhou, Cina meridionale. Poiché l'erba Timothy e gli scandini Humulus non sono comuni, anche inesistenti a Guangzhou, i tassi di positività dell'erba di Timothy (13,6%) e di Humulus scandens sIgE (7,0%) mDa attribuire alla reattività reattiva tra pollini d'erba.
Analizzando gli allergeni del polline erboso, è stato chiaramente dimostrato che tutti i pazienti affetti da IgE positivi per l'erba Timothy erano anche positivi all'epoca specifica dell'antina Timothy Phl p 4. Molto pochi (17,1%) sono stati testati positivi a Phl p 1, sorprendentemente diversi dai dati In Europa, dove il tasso di positività a Phl p 1 è molto più elevato di quello di Phl p 4 18 , 20 , 21 . Poiché Phl p 1 è la componente principale dell'erba di Timothy, il tasso prevalente della positività Phl p 4 su Phl p 1 in questa popolazione di studio può anche suggerire una probabilità cross-reattività diversa dalla sensibilizzazione "genuina", poiché Phl p 4 condivide una somiglianza strutturale Con CCD e un certo numero di altri allergeni, tra cui alberi, verdure e frutti tropicali 19 , 22 , 23, 24 . La rilevanza clinica di questa osservazione potrebbe essere che la maggioranza dei pazienti eritopoti Timothy in questo studio non avrebbe mai dovuto essere consigliato di ricevere l'immunoterapia Timothy erba, che attualmente utilizza Phl p 1 25 .
Dovranno essere menzionate diverse limitazioni dei metodi e delle tecniche di studio. Innanzitutto, poiché fino a 3 diverse strisce di calibratore possono essere poste in un vassoio / reagente Vassoio nell'analizzatore di immunoassay, al massimo, tre batch di test possono essere eseguiti contemporaneamente. Quando è necessario un carico di lavoro pesante, come in un maggiore indagine regionale, occorre ancora una quantità considerevole di tempo da elaborare. In secondo luogo, la cross-reattività con IgA umana, IgD, IgM e IgG è inesistente a concentrazioni fisiologiche quando si utilizza l'analizzatore di questo studio, per cui sono necessari altri approcci di ricerca quando si tratta di reattività reattiva con queste immunoglobuline. In terzo luogo, nonostante la sofisticazione del devicI risultati ottenuti con l'analizzatore immunologico completamente automatizzato non dovrebbero sostituire altre indagini di laboratorio, valutazioni cliniche e competenze del medico quando si effettua una diagnosi definitiva. In quarto luogo, a causa della tardiva introduzione di CRD allergene in Cina, diversi prodotti commerciali di componenti pollinici erbosi subtropicali non sono disponibili o non sono stati approvati per la ricerca fino a poco tempo fa. Pertanto, utilizzando questa tecnica come un approccio CRD per gli allergeni si basa sostanzialmente sulla disponibilità commerciale di forniture di prodotto dal produttore per un uso specifico in una regione. Nelle regioni tropicali e subtropicali con una onnipresente complessità di pollini vegetali, uno studio CRD può essere insufficiente e difficile a causa della mancanza di corrispondenti prodotti allergeni per le prove. Un tale dilemma potrebbe compromettere notevolmente l'efficienza di questa tecnica.
Tuttavia, alle ultime conoscenze, questo è uno studio pionieristico che utilizza l'approccio CRDO esaminare la sensibilizzazione agli allergeni pollenici dell'erba nel sud della Cina. Ulteriori studi possono continuare in questo modo e convalidare questi risultati.
Finora, le tecniche usando l'analizzatore di immunoassay completamente automatico sono state accettate come standard d'oro per i test sanguigni allergenici in vitro 26 , 27 . Dato i dati molto limitati sulla sensibilizzazione allergica all'interno del vasto territorio della Cina, studi di grandi campioni che utilizzano l'immunodosaggio completamente automatizzato come un approccio CRD possono colmare le lacune e aggiungere le prove disponibili in questo campo. È importante notare che tali studi, generalmente multicentrici e nazionali, potrebbero richiedere la creazione di reti di immunoassay basate su un protocollo di standardizzazione.
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Disclosures
Gli autori non hanno niente da rivelare.
Acknowledgments
Ringraziamo Yueming Su per la sua assistenza nella preparazione della figura. Questo studio è stato finanziato dalla Fondazione Guangdong di Scienza e Tecnologia (N. progetto: 2014A020212352), dall'Ufficio di formazione di Guangzhou (1201630044, 1201630393) e dalla National Science Foundation di Cina (NSFC 81572063; NSFC 81601394).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ImmunoCAP 1000 Instrument | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3800-01 | |
| Phadia Information Data Manager Software Package | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3801-11 | |
| Software Package, ImmunoCAP 1000 | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3801-12 | |
| g2 (Bermuda grass) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4131-01 | |
| g6 (Timothy grass) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4100-01 | |
| w22 (Japanese Hop) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4452-01 | |
| g216 (nCyn d 1) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4972-01 | |
| g205 (rPhl p 1) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5234-01 | |
| g208 (nPhl p 4) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5288-01 | |
| g215 (rPhl p 5b) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5338-01 | |
| g209 (rPhl p 6) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5289-01 | |
| g210 (rPhl p 7) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5290-01 | |
| g211 (rPhl p 11) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5291-01 | |
| g212 (rPhl p 12) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5292-01 | |
| o214 Cross-reacting carbohydrate determinants (CCDs) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5339-01 | |
| Specific IgE Conjugate 400 | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9310-08 | |
| Specific IgE Calibrator Strip | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9459-08 | |
| Specific IgE Curve Control Strip | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9312-08 | |
| Specific IgE Anti-IgE ImmunoCAP | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4417-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Negative Control | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9445-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control L | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9528-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control M | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9529-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control H | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9530-01 | |
| Development Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9439-08 | |
| Stop Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 34-2271-58 | |
| Washing Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9202-08 | |
| FluoroC | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9264-01 | |
| Maintenance Solution Kit | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9476-01 |
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