CTC-Immunfluoreszenz-Assay : Eine Technik zur Charakterisierung zirkulierender Tumorzellen

- Verdünnen Sie zunächst die isolierten zirkulierenden Tumorzellen oder CTCs auf die erforderliche Konzentration mit einer Anti-Bindungslösung, die die Zellen vor Flüssigkeitsscher- und Druckschäden schützt. Montieren Sie als Nächstes einen mit Polylysin beschichteten Objektträger und eine Zytozentrifugen-Filterkarte zu einer Zytozentrifugen-Trichterbaugruppe. Übertragen Sie die Zellsuspension in den Trichteranschluss der Anordnung, gefolgt von einer Zytozentrifugation.

Die Zentrifugalkraft konzentriert und lagert eine Monoschicht von Zellen auf einer kreisförmigen Fläche auf dem Objektträger ab. Isolieren Sie den mit Zellen abgelagerten Bereich mit einem Silikonisolator. Nach dem Trocknen fixieren Sie die Zellen mit Paraformaldehyd. Als nächstes inkubieren Sie die Zellen mit einer geeigneten Blocklösung, die Proteine enthält, die leicht an unspezifische Bindungsstellen auf der Zelloberfläche binden.

Markieren Sie nun die Zellen mit einer fluoreszenzmarkierten Antikörperlösung. Die Fluorophor-markierten Antikörper erkennen und binden an spezifische Zielmoleküle auf der Zelloberfläche. Waschen Sie die Probe, um ungebundene Antikörper zu entfernen. Fügen Sie eine Einbettlösung hinzu,