Interferenzreflexionsmikroskopie zur markierungsfreien Visualisierung der Mikrotubuli-Dynamik

Die Interferenzreflexionsmikroskopie ermöglicht die Abbildung von Mikrotubuli, die dynamisch wachsen und schrumpfen.

Befestigen Sie Paraffinstreifen auf einem Deckglas und legen Sie ein etwas kleineres Deckglas darauf. Erhitzen Sie, um das Paraffin zu schmelzen und einen versiegelten Kanal zu bilden. Pipettieren Sie eine antikörperhaltige Lösung durch den Kanal. Die Antikörper heften sich an die Deckglasoberfläche. Fügen Sie eine Blockierungslösung hinzu, die die ungebundenen Antikörperregionen blockiert und eine unspezifische Proteinbindung verhindert.

Legen Sie das Deckglas auf den Mikroskoptisch. Stellen Sie die Probenheizung auf eine Temperatur ein, die das Wachstum der Mikrotubuli erleichtert.

Pipettieren Sie Mikrotubuli-Samen, die mit einem nicht hydrolysierbaren Guanosintriphosphat, GTP, stabilisiert wurden. Die Samen binden an das mit Antikörpern beschichtete Deckglas. Fügen Sie einen Puffer hinzu, der unmarkiertes Tubulin, GTP und Reduktionsmittel enthält.

Bei optimalen Temperatur- und Pufferbedingungen fungieren die Seeds als Keimbildungsstellen und ermöglichen eine unmarkierte Tubulinbindung und das Wachstum von Mikrotubuli.

Beginnen Sie mit der Bildgebung. Das einfallen