Induktion einer nekrotisierenden Enterokolitis im humanen epithelialen enteroiden Modell

Erhalten Sie aus menschlichem Dünndarmgewebe gewonnene Krypten – röhrenförmige Einstülpungen, die Stammzellen und verschiedene Arten von Epithelzellen enthalten.

Gib die Darmkrypten in eine gekühlte Kellermatrix.

Übertragen Sie diese Mischung in eine Multiwell-Platte, wodurch eine dreidimensionale Kuppel entsteht.

Wachstumsmedium hinzufügen und inkubieren.

Stammzellen organisieren sich selbst, vermehren sich und differenzieren sich in mehrere Arten von Darmzellen, die Enterosphären bilden.

Im Laufe der Zeit reifen die Enterosphären zu Enteroiden heran – dreidimensionale, sich selbst erneuernde Strukturen, die den Darmkrypten ähneln.

Geben Sie Lipopolysaccharide oder LPS, ein bakterielles Endotoxin, in die enteroidhaltige Vertiefung und inkubieren Sie.

LPS-Moleküle binden an den Toll-like-Rezeptor im Enteroid und initiieren eine entzündungsfördernde Reaktion, die zur Akkumulation reaktiver Sauerstoffspezies führt. Dies löst eine Kaskade von Ereignissen aus, die zur Apoptose führen.

Infolgedessen ist die Integrität des Enteroids beeinträchtigt, was zum Eindringen von LPS in das Lumen führt, was die Entzündungsreaktion weiter verstärkt.

Dies ahmt die Entwicklung der nekrotisierenden E