Fabricación de micro-tejidos, utilizando los módulos de gel de colágeno las células que contienen

Resumen

Creación de micro-tejidos, utilizando geles de colágeno cilíndricos, llamados módulos, que contienen células incluidas y que la superficie está recubierta de células endoteliales.

Resumen

Este protocolo describe la fabricación de un tipo de micro-tejidos llamados módulos. El concepto de módulo genera tejidos uniforme, escalable y vascularizado. Los módulos pueden ser hechos de colágeno, así como otros materiales gelable o reticulables. Son aproximadamente 2 mm de longitud y 0,7 mm de diámetro en la fabricación, pero disminuye de tamaño con las células incrustado o cuando los módulos están cubiertos con las células endoteliales. Los módulos individuales son tan pequeñas que las células están incrustadas dentro del límite de la difusión de oxígeno y otros nutrientes, pero los módulos se pueden agruparse para formar los tejidos que son más grandes perfusable. Estos tejidos son modulares en la construcción debido a los diferentes tipos de células pueden ser integrados en cubierta o en los módulos antes de que se empaquetan para formar tejidos complejos. Existen tres pasos principales para hacer los módulos de: (1) neutralizar el colágeno y la incrustación de células en el mismo, (2) gelificantes el colágeno en el tubo y corte de los módulos y (3) revestimiento de los módulos con las células endoteliales.

Protocolo

1) Preparación del tubo

1. Cortar 2 a 3 m de longitud de tubo de polietileno (0,76 mm de diámetro x 1,22 mm OD).
2. Enhebrar una aguja 20 G1 en un extremo de la tubería.
3. Bobina de la tubería y el lugar en un convertidor de autocierre bolsa (7 1 / 2 "x 13"). Los dos extremos de la tubería debe ser colocado en el extremo sin sellar de la bolsa y se pega con cinta adhesiva de gas de esterilización.
4. Selle la bolsa y el gas esterilizar.

2) La neutralización de colágeno

Nota: 1 ml de colágeno se llena de unos 2 m de tubería de polietileno.

1. Coloque la cantidad neces....

Discusión

Hemos fabricado varias diferentes micro-tejidos con módulos integrados con diferentes tipos de células ^1.11. Hemos incorporado con éxito los cardiomiocitos primarios, islotes, las células adiposas madre mesenquimales y las células del estroma, así como varias líneas celulares HepG2 incluyendo, NIH 3T3 y clonar las células del hígado 9. Hemos revestido los módulos con varios tipos de células incluyendo las células endoteliales de aorta de rata endoteliales, las células endoteliales de vena umbilical y las célu.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tubo Intramedic PE60	BD Biosciences	427416	Se puede usar tubo de distinto diámetro para cambiar el diámetro de los módulos
Solución salina tamponada con fosfato (PBS)	GIBCO, por Life Technologies	20012-027
Tripsina-EDTA	GIBCO, por Life Technologies	25200-072
Colágeno ácido Purcol, 3 mg/mL	Cedarlane Labs	5005-B
Bicarbonato de sodio	Sigma-Aldrich	S5761
Aguja de 20G	BD Biosciences	305175	El diámetro de la aguja debe ser similar al diámetro del tubo
Jeringa de 3 mL	BD Biosciences	309585
Tubo de 15 mL	BD Biosciences	352096
Tubo de 50 mL	BD Biosciences	352070
Bolsa autocierre Convertors 7 1/2” x 13”	Cardinal Health	92713
Pipeta serológica de punta ancha de 10 ml	BD Biosciences	357504
Pipeta serológica de 10 ml	BD Biosciences	357551
Pipeta serológica de 5 ml	BD Biosciences	357543