La córnea es la única que carece de los tejidos vasculares. Sin embargo, el fuerte crecimiento de los vasos sanguíneos y la supervivencia puede ser inducida en la córnea por potentes factores angiogénicos. Por lo tanto, la córnea puede dar con nosotros en una herramienta valiosa para los estudios de angiogénesis. Este protocolo muestra cómo realizar el modelo de ratón de ensayo de córnea bolsillo y la forma de evaluar la angiogénesis inducida por factores angiogénicos utilizando este modelo.
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Artículo de método
Un modelo de ratón de la Prueba de bolsillo para el Estudio de la angiogénesis de córnea
En este artículo
Resumen
Resumen
Una córnea normal es clara de los tejidos vasculares. Sin embargo, los vasos sanguíneos pueden ser inducidas a crecer y sobrevivir en la córnea cuando potentes factores angiogénicos son administrados 1. Esta singularidad ha hecho el ensayo de bolsillo córnea uno de los modelos más utilizados para los estudios de la angiogénesis. La córnea compone de múltiples capas de células. Por tanto, es posible incluir una pastilla que contiene el factor angiogénico de interés en la córnea para investigar su efecto angiogénico 2,3. Aquí, le ofrecemos una demostración paso a paso de cómo (I) producir el factor angiogénico que contienen gránulos (II) incorporar la pastilla en la córnea (III) analizar la angiogénesis inducida por el factor angiogénico de interés. Ya que el factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF) es conocido como uno de los factores angiogénicos más potentes 4, aquí se utiliza para inducir la angiogénesis en la córnea.
Protocolo
Todos los equipos y los reactivos utilizados son estériles. El protocolo fue aprobado por el Cuidado de Animales y el empleo Comisión (ACUC) en el NEI / NIH (protocolo de estudio en animales NEI-553), y se realizó de acuerdo a las directrices del NIH y los reglamentos.
1. La producción de la angiogénesis que contiene el factor de pellets
En esta parte, las pastillas que contienen el factor angiogénico de interés están preparados.
- Hacer el 10% (w / v) sucralfato con PBS. Almacenar a temperatura ambiente.
- Hacer el 12% (w / v) de poli-HEMA con etanol absoluto. Almacenar a temperatura ambiente....
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Discusión
La córnea del ratón de bolsillo modelo de ensayo fue descrito por primera vez en 1979 por Muthukkaruppan VR y Auerbach R 6. Protocolos detallados han sido publicados por diferentes laboratorios 2,3,7,8. Nuestro laboratorio ha modificado y utilizado este método en nuestros estudios durante muchos años 4. La córnea del ratón ensayo de bolsillo es un modelo relativamente simple, con una gran reproducibilidad. Otra ventaja de este modelo es que ya que la córnea normalmente no tiene vasos san.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Nuestra investigación es apoyada por el Programa de Investigación Intramural del NIH, el Instituto Nacional del Ojo.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Equipo | Empresa | Número de catálogo | |
| Microscopio de disección | Mundial de Instrumentos de Precisión | PZMIV-BS | |
| Von Graefe cuchillo de cataratas (1.5x25mm hoja, plano) | Ambler quirúrgica | 3401E | |
| Dumont # 5 fórceps | Herramientas de Bellas Ciencia | 11252-50 | |
| Con lámpara de hendidura | Zeiss | 30 SL-M |
Tabla 1. Equipos
| Reactivo | Empresa | Catálogo # | Comentarios |
|---|---|---|---|
| bFGF (factor de crecimiento de fibroblastos) | Peprotech INC | 100-18B | |
| Sucralfato (sacarosa octasulfate-complejo de aluminio) | Sigma | S0652 | 10% en PBS |
| poli-HEMA (poli (2-hidroxietil metacrilato)) | Sigma | P3932 | 12% de etanol |
Tabla 2. Reactivos y materiales
Referencias
- Cao, Y., Linden, P., Shima, D., Browne, F., Folkman, J. In vivo angiogenic activity and hypoxia induction of heterodimers of placenta growth factor/vascular endothelial growth factor. The Journal of clinical investigation. 98, 2507-2511 (1996).
- Rogers, M. S., Birsner, A. E., D'Amato, R. J.
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Reimpresiones y permisos
