在这段视频中,我们将演示如何记录保留复杂的神经回路在整个大脑的准备,从确定单个神经元的电活动。我们使用转基因鱼中,促性腺激素释放激素(GnRH)的神经元与用于识别完整的大脑制备一种荧光蛋白基因的标签。
了解细胞的生理调节复杂的行为的神经回路是通过使用模型的系统,在该系统中,可以进行这项工作,在一个完整的大脑制备的中枢神经系统的神经电路保持不变大大增强。我们使用转基因鱼中,促性腺激素释放激素(GnRH)的神经元与用于识别完整的大脑中的绿色荧光蛋白基因的标签。鱼GnRH神经元有多个种群,它们的功能是依赖于他们的位置在大脑和GnRH基因,他们表达1。我们集中示范GnRH3在终端转基因青鳉鱼( 图1B和C)使用完整的大脑嗅球神经(田纳西州)的神经元位于。研究表明,青鳉的TN-GnRH3神经元是神经调节,中枢神经系统作为信息发射器从外部环境; T嘿,不要直接发挥作用,调节垂体-性腺功能,做知名GNRH1丘脑神经元2,3。进补动作电位射击TN-GnRH3神经元的自发模式的内在属性4-6,频率是调制的同种2和神经肽kisspeptin 1 5的视觉线索。在这段视频中,我们使用了一个稳定的转基因青鳉这TN-GnRH3的神经元表达了含转基因的启动子区域Gnrh3向您展示如何识别神经元,并监察他们在整个大脑的电活动与增强型绿色荧光蛋白7制备例6。
激素3:提供了独特的绿色荧光蛋白转基因鱼模型来研究的神经生理机制神经集成中央控制和调节的行为,都直接和间接地参与再现3 8-10。这个模型系统的显着优势之一是,许多GnRH3表达GFP神经元的大脑腹面,可以相对容易获得的神经元电生理记录,不破坏神经回路6,9,11,12( 图图1B和图1C,图3A和3B)。在这段视频中,我们已经表明了…
The authors have nothing to disclose.
我们感谢孟博士林青女士远东的技术援助。这项工作是从美国国立卫生研究院HD053767(转包NLW),由授出从生理和副校长办公室的研究,美国加州洛杉矶大学(NLW)部的资金支持。
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Microscope | Olympus | BX50W (Upright) | |
Amplifier | Axon Instruments | Axoclamp 200B | |
A-D converter | Computer Interference Corp. | Digidata ITC-18 | |
Cooled CCD camera | PCO Computer Optics | Sensicam | |
Xenon lamp | Sutter Instruments Co. | ||
GFP filter set | Chroma Technologies | ||
Imaging Software | Intelligent Imaging Innovations | Slidebook software | |
Electrophysiology Data Acquisition Software | Axon Instruments | Axograph software | |
Electrophysiology Data Acquisition Software | AD Instruments Inc. | PowerLab | |
Headstage for electrophysiology | Axon Instruments | CV 203BU | |
Micromanipulator | Sutter Instrument Co | MP-285 | |
Recording Chamber Platform | Warner Instrument Corp. | P1 | |
Recording Chamber | Warner Instrument Corp. | RC-26G | |
Electrode Puller | Sutter instruments | P87 | |
Filament for electrode puller | Sutter Instruments | FB330B | 3.0 mm wide trough filament |
1.5 mm glass capillaries | World Precision Instruments | 1B150-4 | Microelectrode for recording |
Syringe | Becton Dickinson | 309586 | 3 ml |
MS-222 | Sigma | E10521-10G | Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt |
Fish saline | mM: 134 NaCl; 2.9 KCl; 2.1 CaCl2; 1.2 MgCl2; 10 HEPES | ||
Electrode solution (loose-patch) | mM: 150 NaCl; 3.5 KCl; 2.5 CaCl2; 1.3 MgCl2; 10 HEPES; 10 glucose | ||
Electrode solution (whole-cell patch) | mM: 112.5 K-gluconate; NaCl; 17.5 KCl; 0.5 CaCl2; 1 MgCl2; 5 MgATP; 1 EGTA; 10 HEPES; 1 GTP; 0.1 leupeptin;10 phospho-creatine |