Este trabajo proporciona una descripción detallada de cómo construir un modelo animal de la fase anhepática (isquemia hepática) en ratas para facilitar la investigación básica sobre lesiones por isquemia-reperfusión después del trasplante de hígado.
Artículo de método
Este trabajo proporciona una descripción detallada de cómo construir un modelo animal de la fase anhepática (isquemia hepática) en ratas para facilitar la investigación básica sobre lesiones por isquemia-reperfusión después del trasplante de hígado.
El trasplante ortotópico de hígado (OLT) en ratas es un modelo animal probado y probado utilizado para estudios preoperatorios, intraoperatorios y postoperatorios, incluyendo lesiones por isquemia-reperfusión (IRI) de órganos extrahepáticos. Este modelo requiere numerosos experimentos y dispositivos. La duración de la fase anhepática está estrechamente relacionada con el tiempo para desarrollar IRI después del trasplante. En este experimento, utilizamos cambios hemodinámicos para inducir daño extrahepático de órganos en ratas y determinamos el tiempo máximo de tolerancia. El tiempo hasta la lesión orgánica más grave varió para diferentes órganos. Este método se puede replicar fácilmente y también se puede utilizar para estudiar IRI de los órganos extrahápticos después del trasplante de hígado.
La lesión por isquemia y reperfusión (IRI) es una complicación común después del trasplante de hígado. Hepatic IRI es un proceso patológico que implica daño celular mediado por isquemia y deterioro anormal de la reperfusión hepática. El IRI hepático y la respuesta inmune innata local se pueden dividir en IRI caliente y frío, según las diferencias en el entorno clínico1. Hot IRI es inducido por lesión de células madre, generalmente como resultado de trasplante de hígado, shock, y trauma2. Cold IRI es una complicación del trasplante hepático causado por células endoteliales y circulación periférica3.
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El Comité de Ética Animal aprobó el experimento de la Universidad Médica guangxi (nº20190920). Todos los animales fueron suministrados por el Centro de Experimentación Animal de la Universidad Médica de Guangxi. Utilizamos ratas Sprague Dawley macho Sprague (200-250 g, 10-12 semanas), mantenidas bajo la temperatura ambiente de 25 ± 2°C y humedad de 50 ± 10%. La alimentación se detuvo 24 horas antes de la operación; sin embargo, se proporcionó agua.
NOTA: Un operador puede realizar todas las operaciones sin una base de microcirugía o microscopio quirúrgico.
1. Operación
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Tolerancia de las ratas a la isquemia hepática
En este modelo animal, los sitios en los que los vasos sanguíneos fueron ligados durante el funcionamiento se muestran en la Figura 1. Las ratas se dividieron aleatoriamente en 5 grupos por isquemia durante 15 minutos (grupo I15), 30 minutos (grupo I30), 45 minutos (grupo I45), 60 minutos (I60) y grupo sham, con 10 ratas en cada grupo. La tasa de supervivencia de cada grupo se observó 14 días después de la operación. Todas la.......
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OLT en ratas es un modelo ideal para estudiar la preservación de órganos en trasplante de hígado, IRI, rechazo de trasplante, tolerancia inmune, patología de trasplante y farmacología, homotransplantación y xenotrasplantación. En la actualidad, es ampliamente utilizado en la investigación experimental del trasplante de hígado.
Durante los estudios piloto, primero administramos anestesia intraperitoneal de sodio pentobarbital y encontramos que esto condujo a una alta mortalidad postoperatoria y.......
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Los autores de este manuscrito no tienen conflictos de interés que revelar.
Nos gustaría reconocer las sugerencias útiles dadas por el Dr. Wen-tao Li y el Dr. Ji-hua Wu del Segundo Hospital Afiliado de la Universidad Médica de Guangxi. Los autores quieren agradecer a nuestros compañeros de equipo por comentarios y discusiones útiles. Los autores también quieren agradecer a los críticos anónimos y editores de JoVE por sus comentarios. Un agradecimiento especial debería ir a los padres del Dr. Yuan por su continuo apoyo y aliento. El trabajo fue apoyado por la Fundación de Ciencias Naturales de Ningbo (2014A610248).
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Solución de paraformaldehído al 4% | Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd | P804536 | |
| horno de secado de aire | Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd. | BPG | |
| Alanina aminotransferasa (ALT)Kit | Elabscience Biotechnology Co., Ltd | E-BC-K235-S | |
| amoníaco | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10002118 | |
| kit de amilasa | Elabscience Biotechnology Co., Ltd | E-BC-K005-M | |
| etanol anhidro | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 100092183 | |
| Animal máquina de anestesia | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | R640 | |
| aspartato aminotransferasa (AST)kit | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03040 | |
| . | SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd. | 2400 | |
| Biosystems (cuando sea necesario) | Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd. | Centrífuga BL-420F | |
| Baiyang Medical Instrument Co., Ltd. | BY-600A | ||
| cubreobjetos Jiangsu | Shitai Experimental Equipment Co. Ltd | 10212432C | |
| Kit de creatinina | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03076 | |
| máquina de deshidratación | Hungría 3DHISTECH Co., Ltd | Donatello Serie 2 | |
| máquina de incrustación | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | Máquina congelada KH-BL1 | |
| Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | ||
| solución de colorante de hematoxilina-eosina | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G1005 | |
| cera de parafina de alta eficiencia | Shanghai huayong cera de parafina co., Ltd | Q / YSQN40-91 | |
| ácido clorhídrico | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10011018 | |
| pinzas para lentes intraoculares (LIO) | Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd. | JTZRN | |
| Isoflurano | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | — | |
| micro tijeras (cuando necesario) | Fábrica de instrumentos quirúrgicos de Shanghái | WA1010 | |
| portaagujas | Fábrica de instrumentos quirúrgicos de Shanghái | J32010 | |
| goma neutra | Shanghái Huashen Healing Equipment Co., Ltd. | — | |
| microscopio óptico normal | Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd | Nikon Eclipse CI | |
| pinzas oftálmicas | Fábrica de instrumentos quirúrgicos de Shanghái | J3CO30 | |
| pinzas oftálmicas | Fábrica de instrumentos quirúrgicos de Shanghái | JD1060 | |
| tijeras oftálmicas | Fábrica de instrumentos quirúrgicos de Shanghái | J1E0 | |
| cortadora patológica | Shanghai Leica Instrument Co., Ltd | RM2016 | |
| pipetas | Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd. | ||
| retractores Beijing | Jinuotai Technology Development Co., Ltd. | Escáner JNT-KXQ | |
| Hungría 3DHISTECH Co., Ltd | Pannoramic 250 | ||
| diapositiva | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G6004 | |
| xileno | Sinopharm Reactivos químicos Co. Ltd | 1330-20-7 |
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