La terapia génica miocárdica para la cardiopatía isquémica es muy prometedora para futuras terapias. Aquí, presentamos un modelo animal grande para evaluar la eficacia de la terapia génica en el corazón isquémico.
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Artículo de método
Modelo animal grande para evaluar la eficacia de la terapia génica en el corazón isquémico
En este artículo
Resumen
Resumen
La enfermedad arterial coronaria es una de las principales causas de mortalidad y morbilidad en todo el mundo. A pesar de la progresión de la terapéutica actual, una proporción considerable de pacientes con enfermedad arterial coronaria siguen siendo sintomáticos. La angiogénesis terapéutica mediada por terapia génica ofrece un nuevo método terapéutico para mejorar la perfusión miocárdica y aliviar los síntomas. La terapia génica con diferentes factores angiogénicos se ha estudiado en pocos ensayos clínicos. Debido a la novedad del método, el progreso de la terapia génica miocárdica es un camino continuo desde el banco hasta la cabecera. Por lo tanto, se necesitan modelos animales grandes para evaluar la seguridad y la eficacia. Cuanto más identifica el modelo animal grande la enfermedad original y los criterios de valoración utilizados en las clínicas, más predecibles son los resultados de los ensayos clínicos. Aquí, presentamos un modelo animal grande para evaluar la eficacia de la terapia génica en el corazón porcino isquémico. Utilizamos métodos de imagen clínicamente relevantes, como imágenes de ultrasonido y 15H2O-PET. Para dirigir las transferencias de genes al área deseada, se utiliza el mapeo electroanatómico. El objetivo de este método es: (1) imitar la enfermedad arterial coronaria crónica, (2) inducir angiogénesis terapéutica en áreas hipóxicas del corazón, y (3) evaluar la seguridad y eficacia de la terapia génica mediante el uso de criterios de valoración relevantes.
Introducción
La enfermedad arterial coronaria es responsable de la gran proporción de mortalidad y carga de enfermedad en todo el mundo1. Las estrategias de tratamiento actuales son las intervenciones percutáneas, el tratamiento farmacológico y la cirugía de derivación2. Sin embargo, a pesar de la progresión de estas terapias actuales, muchos pacientes sufren de la llamada angina refractaria, lo que subraya la necesidad insatisfecha de nuevos enfoques de tratamiento3. La angiogénesis terapéutica mediada por terapia génica podría dirigirse a este grupo de pacientes.
La terapia génica....
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Protocolo
Los experimentos presentados aquí se realizan utilizando cerdos domésticos hembras de aproximadamente 10 semanas de edad y están aprobados por la Junta de Experimentación Animal en Finlandia. Los animales pesan 30-40 kg al comienzo del protocolo, lo que permite el mismo equipo de procedimiento y modalidades de imagen posibles para los humanos. La isquemia crónica se induce 14 días antes de la transferencia génica, y el tiempo de seguimiento después de la transferencia génica depende del vector viral utilizado. El protocolo del estudio se muestra en la Figura 1. Este protocolo se puede utilizar para realizar inyecciones de terapia génica a....
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Resultados
El éxito de la operación de isquemia se puede confirmar con este protocolo mediante angiografía coronaria y determinando el área hipocinética mediante ecografía transtorácica (Figura 1) antes de proceder a la entrega del gen. El estado de la oclusión coronaria se puede evaluar mediante angiografía coronaria, y el mapeo electroanatómico asegura las áreas isquémicas e hibernantes.
La eficacia de la terapia génica se puede analizar midiendo la tensión circunferencial.......
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Discusión
Los puntos de tiempo de este protocolo pueden modificarse de acuerdo con el vector viral utilizado. Además, los análisis inmunohistológicos pueden seleccionarse de acuerdo con el gen terapéutico. También es posible agregar más puntos de tiempo y puntos finales al protocolo si es necesario.
Este protocolo comprende etapas, que son esenciales para tener éxito e imposibles de corregir después. En primer lugar, si no se induce una isquemia adecuada, el animal debe ser excluido de otros procedimien.......
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Divulgaciones
Los autores declaran no tener conflictos de intereses.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer a Maria Hedman, Tiina Laitinen, Tomi Laitinen, Pekka Poutiainen, Annika Viren y Severi Sormunen por su ayuda y el permiso de 15imágenes O-PET en el Hospital Universitario de Kuopio; y Heikki Karhunen, Minna Törrönen y Riikka Venäläinen del Centro Nacional de Animales de Laboratorio por su asistencia en el trabajo con animales.
Este estudio cuenta con el apoyo de subvenciones de la Academia Finlandesa, ERC y CardioReGenix EU Horizon 2020.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 1% PFA | VWR | VWRC28794.295 | Preparado a partir de paraformaldehído en polvo 15 |
| % sacarosa | VWR | VWRC27480.294 | Preparado a partir de sacarosa sólida |
| 4% PFA | VWR | VWRC28794.295 | Preparado a partir de polvo de paraformaldehído |
| Catéter flexible 5 F | Cordis | 534-550S | |
| Catéter 6 F AR2 | Cordis | 670-112-00 | |
| Vaina introductora 6 F | Cordis | 504-606X | |
| 8 F vaina introductora | Cordis | 504-608X | |
| acetilsalicílico | Productor variable | ||
| Amiodarona | Productor variable | ||
| Estación angiográfica | GE Healthcare | ||
| Angiolaboratory set | Mö lnlycke | diseñado para las necesidades de nuestro laboratorio de angio, contiene paños estériles, copas e hisopos | |
| Bisoprolol | Productor variable | ||
| Cefuroxima | Productor variable | ||
| Clopidogrel | Productor variable | ||
| Stent Coroflex Blue | B.Braun Medical | 5029012 | El número de catálogo depende del tamaño del stent |
| Crile pinzas | |||
| Ciclotrón | GE Healthcare | ||
| Dobutamina | Productor variable | ||
| Sistema de mapeo electroanatómico | Sistemas de administración de productos biológicos, Johnson & Johnson company | ||
| Enoxaparin | Productor variable | ||
| Fentanilo | Productor variable | ||
| Catéter de inyección intramiocárdica | Johnson & Johnson | ||
| Agente de contraste de yodo | Iomeron | ||
| Cuchillo | Productor variable | ||
| Lidocaína | Productor variable | ||
| Nitrógeno | Productor | ||
| variable MgSO4 | Productor variable | ||
| Aguja 18 G | Cordis | 12-004943 | |
| Bomba | |||
| Escáner PET-CT | Siemens Healthcare | ||
| politetrafluoroetileno | |||
| Propofol | Productor variable | ||
| Bisturí n.º 11 | VWR | SWAN0503 | |
| Dinitrato sublingual | Takeda | ||
| Ecógrafo | Philips |
Referencias
- Naghavi, M., et al. Global, regional, and national age-sex specifc mortality for 264 causes of death, 1980-2016: A systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. Lancet. 390 (10100), 1151-1210 (2017).
- Knuuti, J., et al.
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Reimpresiones y permisos
