Summary
Målet med dette manuskript er at beskrive KitV558Δ/+ musemodellen og teknikker til vellykket dissektion og behandling af museprøver.
Abstract
Gastrointestinal stromal tumor (GIST) er den mest almindelige humane sarkom og er typisk drevet af en enkelt mutation i KIT-receptoren. På tværs af tumortyper er der udviklet adskillige musemodeller for at undersøge den næste generation af kræftbehandlinger. I GIST bruger de fleste in vivo-undersøgelser imidlertid xenograft-musemodeller, der har iboende begrænsninger. Her beskriver vi en immunkompetent, genetisk manipuleret musemodel af gastrointestinal stromal tumor, der huser en KitV558Δ/+ mutation. I denne model drives mutant KIT, onkogenet, der er ansvarlig for de fleste GIST'er, af dets endogene promotor, hvilket fører til en GIST, der efterligner det histologiske udseende og immuninfiltration, der ses i humane GIST'er. Desuden er denne model blevet brugt med succes til at undersøge både målrettede molekylære og immunterapier. Her beskriver vi opdræt og vedligeholdelse af en KitV558Δ/+ musekoloni. Derudover beskriver dette papir behandling og indkøb af GIST, dræning af mesenterisk lymfeknude og tilstødende cecum i KitV558Δ /+ mus samt prøveforberedelse til molekylære og immunologiske analyser.
Introduction
GIST er det mest almindelige sarkom hos mennesker med en forekomst på ca. 6.000 tilfælde i USA1. GIST ser ud til at stamme fra de gastrointestinale pacemakerceller, der hedder de interstitielle celler i Cajal, og er typisk drevet af en enkelt mutation i tyrosinkinase KIT eller PDGFRA2. Kirurgi er grundpillen i behandling for GIST og kan være helbredende, men patienter med avanceret sygdom kan behandles med tyrosinkinasehæmmeren (TKI), imatinib. Siden introduktionen for over 20 år siden har imatinib transformeret behandlingsparadigmet i GIST og forbedret overlevelsen i avanceret sygdom fra 1 til over 5 år 3,4,5. Desværre er imatinib sjældent helbredende på grund af erhvervede KIT-mutationer, så der er behov for nye behandlinger for denne tumor.
Musemodeller er et vigtigt forskningsværktøj i undersøgelsen af nye terapier i kræft. Flere subkutane xenograft- og patientafledte xenograftmodeller er blevet udviklet og undersøgt i GIST 6,7. Immundefekte mus repræsenterer imidlertid ikke fuldt ud human GIST, da GIST'er har forskellige immunprofiler afhængigt af deres onkogene mutation, og ændring af det gastrointestinale tumormikromiljø forbedrer virkningerne af TKI-terapi 8,9. KitV558Δ/+ musen har en heterozygot kimlinje sletning i Kit exon 11, som koder for juxtamembrane domænet, det mest almindeligt muterede sted i human GIST10. KitV558Δ/+ mus udvikler en enkelt cecal GIST med 100% penetrans, og tumorer har lignende histologi, molekylær signalering, immuninfiltration og respons på terapi som human GIST 8,11,12,13. Her beskriver vi avl, behandling og prøveisolering og -behandling i KitV558Δ/+ mus til brug i molekylær og immunologisk forskning i GIST.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle mus blev anbragt under patogenfrie forhold ved University of Pennsylvania i henhold til NIH-retningslinjer og med godkendelse fra University of Pennsylvania IACUC. Eutanasi blev udført efter University of Pennsylvania Laboratory Animal Resources standardoperationsprocedurer.
1. KitV558Δ/+ museavl
- Kryds kitV558Δ/+ musene mere end 10 gange på en C57BL/6J-baggrund ved hjælp af C57BL/6J-mus. For at gøre dette skal du opdrætte hannen KitV558Δ/+ mus med hunmus af C57BL/6J i forholdet 1:2.
BEMÆRK: Det homozygote KitV558Δ/V558Δ genotype er dødeligt i utero. Det er muligt at avle kitV558Δ/+ hunmus med C57BL/6J-hanmus, men kuldstørrelsen er ca. halv så stor som den, der ses fra hunmus af vildtype C57BL/6J. Desuden producerer kitV558Δ/+ hunmus begrænsede kuld efter 4 måneders alderen. - Genotype hvalpene ved 7-14 dages alderen ved tåklipning for at bekræfte tilstedeværelsen af KitV558Δ/+ genotypen. Brug den forreste primer: TCTCCTCCAGAAACCCATGTATGAA; reporter 1: CCTCGACAACCTTCCA; omvendt primer: TTGCGTCGGGTCTATGTAAACAT; og reporter 2: TCTCCTCGACCTTCCA til genotypning.
2. KitV558Δ/+ musebehandling
- Alder og køn matcher KitV558Δ/+mus før behandling. Brug alders- og kønsmatchede mus i kohorter, da tumorer fra hunmus V558Δ/+ mus er større end hos hanmus. Behandl musene ved 8-12 uger gamle, på hvilket tidspunkt tumorer er etableret (figur 1).
- Giv tyrosinkinasehæmmere oralt eller ved intraperitoneal (i.p.) injektion; KitV558Δ/+ tumorer er følsomme over for tyrosinkinasehæmmere. Giv imatinib i en dosis på 600 mg/l i drikkevand eller i.p. injektioner på 45 mg/kg to gange dagligt. Mål tumorvægtreduktion ved hjælp af digitale skalaer efter dissektion af tumor som vist i trin 3, hvilket er ca. 50% efter 1 uge og 80% efter 4 uger efter behandling med imatinib (figur 2).
3. KitV558Δ/+ museorganhøst
- Afliv mus ved CO2 narkose med en strømningshastighed på 60% kammervolumen pr. Min. Lad mus være i kammeret i mindst 2 minutter efter respiration er ophørt, og udfør derefter cervikal dislokation for at bekræfte døden.
- Steriliser alle instrumenter, brug handsker under hele proceduren, og oprethold et sterilt felt. Forbered huden med 70% ethanol. Lav et 2 cm midterlinje lodret snit ved hjælp af en saks og kom ind i bukhulen. Skarpt lyse eventuelle intra-abdominale adhæsioner.
- For at fjerne den drænende mesenteriske lymfeknude skal du følge nedenstående trin.
- Identificer cecum og løft dets mesenteri overlegent. Ca. midtvejs til bunden af colonic mesentery, identificer den mesenteriske lymfeknude og disseker den skarpt. Lymfeknuden er offwhite og ca. 0,5 cm x 0,5 cm i størrelse.
- Opdel lymfeknudevæv i tredjedele til proteinisolering, histologi og enkeltcellesuspension efter behov. For enkeltcellesuspensioner skal lymfeknudevæv placeres i 20 ml serumfrie medier (RPMI) og opbevares på is.
- For isolering af GIST og cecum skal du følge nedenstående trin.
- Cecum i KitV558Δ/+ mus er for det meste erstattet af en GIST. Opdel forsigtigt det ileokolic kryds fra tumorens bund. For at samle cecum skal du dele tyktarmen igen, 2 cm proximal til bunden af tumoren.
- I 50%-60% af KitV558Δ/+ mus indeholder tumorhovedet en hætte af cecalvæv, som typisk indeholder serøs væske, men kan sjældent indeholde pus (figur 3). Disseker hættevævet skarpt væk fra tumorvævet.
- Opdel tumorvæv og / eller cecum i tredjedele til proteinisolering, histologi og enkeltcellesuspension efter behov. For enkeltcellesuspensioner anbringes tumorvæv eller cecum i HBSS med 2% FCS, nok til at dække prøven og holde på is.
4. Western blot-analyse af GIST-væv
- Forbered vævslysisbuffer indeholdende 50 mM TrisHCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1% ikke-naturligt vaskemiddel, 2 mM Na3VO4, 1 mM PMSF, 10 mM NaF og 20 μl / ml proteinasehæmmerblanding.
- Forbered en 1x Tris-bufferet saltopløsning med 1% Tween 20 (TBST) ved at kombinere 1800 ml deioniseret vand, 2 ml Tween 20 og 200 ml 10x trisbufferet saltvand (TBS).
- Resuspend væv fra trin 3.4.3 i et FACS-rør i 5 ml/g vævslysisbuffer og homogeniseres to gange med en mekanisk homogenisator ved 15.000 o / min i 15 s på is. Inkuber lysat i 30 minutter på is.
- Overfør lysat til et 1,5 ml mikrocentrifugerør. Centrifuger ved maksimal hastighed i 20 minutter ved 4 °C. Overfør supernatant til et nyt mikrocentrifugerør.
- Kør lysater på en 4% til 15% gradientgel, og overfør derefter til en nitrocellulosemembran, som beskrevet i14.
- Vask membranen en gang i 1x TBS i 5 min og bloker derefter membranen i 5% mælk i 1 time. Vask igen membranen en gang i 1x TBS i 10 min.
- Inkuber membran i primært antistof fortyndet 1:1000 i 5% BSA ved 4 °C natten over. Vask membran 3x i 1x TBST i 10 min hver. Inkuber blot med sekundært antistof fortyndet 1:2500 i 2,5% mælk i 1 time ved stuetemperatur.
- Vask membranen en gang i 1x TBS i 5 min. Tilføj nok HRP-substrat til at dække membranen, typisk 200-500 μL, og brug et digitalt kamera til at detektere og kvantificere kemiluminescens.
5. Immunohistokemi af GIST-væv
- Væv fra trin 3.3.2 eller 3.4.3 fikseres i 4 % paraformaldehyd ved 4 °C natten over. Opbevar væv i 70% EtOH, indtil det er klar til behandling. Indlejrings- og sektionsblokke i 5 μm tykkelse på glasglas, som beskrevet15,16.
- Komplet immunohistokemisk detektion ved hjælp af et grundlæggende immundetektionssæt, som tidligere beskrevet17.
6. Enkeltcellesuspension af mesenterisk lymfeknude
- RPMI-medier hældes med lymfeknudeprøve fra trin 3.3.2 over et 100 μm filter. Flyt filter til ny 50 ml konisk og mos lymfeknude med den bløde ende af en 3 ml plastsprøjte. Vask filter med 20 ml RPMI-medier.
- Filtratet centrifugeres ved 450 x g ved 4 °C i 5 min. Aspirere supernatanten.
- Resuspend pellet i 20 ml 1% FBS i PBS (perlebuffer) og hæld over et 40 μm filter. Saml cellefiltratet. Tæl celler ved hjælp af et hæmocytometer.
- Filtratet centrifugeres ved 450 x g ved 4 °C i 5 min. Aspirere supernatanten. Resuspend i perlebuffer ved 6 x 107 celler / ml til flowcytometri.
7. Enkeltcellesuspension af GIST
- Forbered collagenasebuffer ved at tilsætte 250 mg collagenase IV, en tablet EDTA-fri proteasehæmmer og 100 μL DNase I til 50 ml HBSS. Drej i 10 minutter ved stuetemperatur, indtil den er opløst.
- Anbring GIST i en steril skål og tilsæt 2,5 ml collagenasebuffer. Hak tumor ved hjælp af en steril skalpel og saks, indtil tumoren er i fine fragmenter. Brug en stor borepipette til at aspirere tumoren og collagenasen i et 50 ml rør.
- Inkuberes i en rystende inkubator ved 100 o / min ved 37 ° C i 30 minutter. Sluk reaktion med 2 ml FBS.
- Hæld collagenase med GIST-prøve over et 100 μm filter og mos tumor med den bløde ende af en 3 ml plastsprøjte og saml i et 50 ml rør. Vask filter med 20 ml HBSS. Filtratet centrifugeres ved 450 x g, 4 °C i 5 min. Aspirere supernatanten.
- Resuspender pelleten i 20 ml perlebuffer og hæld over et 40 μm filter. Saml filtratet og tæl celler ved hjælp af et hæmocytometer. Filtratet centrifugeres ved 450 x g, 4 °C i 5 min. Aspirere supernatanten. Resuspend i perlebuffer ved 6 x 107 celler / ml til flowcytometri.
8. Enkeltcellesuspension af cecum
- Collagenasebufferen forberedes som i trin 7.1. Brug saks til at opdele cecum i længderetningen for at udsætte den indre slimhinde. Skær i 0,5 cm sektioner og læg i et 50 ml rør med 5 ml HBSS med 2% FBS. Ryst kraftigt i 30 s, centrifuger ved 450 x g i 20 s, og opsuge derefter supernatanten.
- Tilsæt 5 ml HBSS med 2 mM EDTA. Inkuberes i en rystende inkubator ved 37 °C ved 100 o /min i 15 minutter. Centrifuge ved 450 x g i 20 s. Aspirere supernatanten.
- Tilsæt 5 ml HBSS. Ryst kraftigt i 30 s, centrifuger ved 450 x g i 20 s, og opsuge derefter supernatanten. Gentag endnu en gang.
- Tilsæt 5 ml collagenasebuffer. Inkuberes i en rystende inkubator ved 37 °C i 30 minutter ved 100 omdr./min. Ryst kraftigt hvert 10. minut. Sluk reaktion med 2 ml FBS.
- Hæld collagenase med cecumprøve over et 100 μm filter og mos med den bløde ende af en 3 ml plastsprøjte. Vask filter med 20 ml HBSS. Saml filtrat.
- Filtratet centrifugeres ved 450 x g i 5 minutter ved 4 °C. Aspirere supernatanten. Resuspend pellet i 20 ml perlebuffer og hæld over et 40 μm filter. Saml filtrat og tæl celler ved hjælp af et hæmocytometer.
- Filtratet centrifugeres ved 450 x g i 5 minutter ved 4 °C. Aspirere supernatanten. Resuspend i perlebuffer ved 6 x 107 celler / ml til flowcytometri.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
KitV558Δ/+ musemodellen giver mulighed for undersøgelse af terapi i en immunkompetent musemodel. KitV558Δ/+ mus har en gennemsnitlig levetid på 8 måneder på grund af progressiv tarmobstruktion (figur 4). Tumorer fra KitV558Δ/+ mus udtrykker kanoniske markører for GIST, herunder tyrosinkinase KIT og transmembrankanalen DOG1 (figur 5) samt transkriptionsfaktoren ETV1 (ikke vist). Tumorer kan undersøges for ændringer i KIT-signalvejen, såsom nedstrømsmarkørerne ERK og AKT (figur 6) eller immunmikromiljø, der nøje efterligner human GIST 8,11,12,13. MR8 eller CT (figur 7) kan også bruges til at spore tumorvolumen som en nøjagtig måling af tumorrespons. En ubehandlet KitV558Δ/+ mus fik 200 μL gastrograffin oralt 1 time før billeddannelse. CT-billeddannelse blev afsluttet på en vivaCT 80-platform. 3D-rekonstruktion blev udført med Fiji-software, som også kan måle tumorvolumen.
Figur 1: Sammenligning af tumorvægte hos kit V558Δ/+ mus hos han og hun. Tumorer fra 9 uger gamle ubehandlede KitV558Δ/+ han- og hunmus blev isoleret og vejet (n = 15 mus/gruppe). Data repræsenterer middelværdi ± standardfejl i middelværdi (SEM); p-værdier blev beregnet ved hjælp af en elevs t-test; * = P < 0,05. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: Effekt af imatinib på tumorer fra KitV558Δ/+ mus. KitV558Δ/+ mus blev behandlet med vehicle eller 600 mg/l imatinib i drikkevand i 1 eller 4 uger. Tumorer blev isoleret og vejet (n = 4-5 mus / gruppe). Data repræsenterer middel ± SEM; p-værdier blev beregnet ved hjælp af en envejs ANOVA-sammenligning med en Bonferroni-post-test til sammenligning af individuelle grupper; * = P < 0,05. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 3: KitV558Δ/+ tumor med hætte. Repræsentativt foto af en tumor fra en KitV558Δ/+ mus med en cecalhætte indeholdende serøs væske. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 4: Levetid for kitV558Δ/+ mus. Overlevelse af ubehandlede KitV558Δ/+ mus blev sporet i > 400 dage (n = 43 mus). Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 5: Immunohistokemisk analyse. Repræsentativ histologi af en KitV558Δ/+ tumor, hvor skalabjælken er 40 μm. Forkortelser: H&E = hæmatoxylin og eosinfarvning; Kit = et kanonisk mærke af GIST og receptor tyrosinkinase; Dog1 = en kanonisk markør for GIST med rolle i aniontransport. Klik her for at se en større version af denne figur.
Kit V558Δ/+ mus blev behandlet med vehicle eller 600 mg/L imatinib i drikkevand i 1 uge. Mus fik en enkelt i.p. injektion af køretøjet eller 45 mg/kg imatinib 6 timer før analyse. Proteinlysater fra KitV558Δ/+ tumorer blev undersøgt af western blot (n = 2 mus/gruppe). Forkortelser: P Kit = phosphoryleret Kit receptor tyrosin kinase; T kit = total Kit receptor tyrosin kinase; P ERK = phosphoryleret mitogenaktiveret proteinkinase; T ERK = total mitogenaktiveret proteinkinase; P AKT = phosphoryleret serin-threoninproteinkinase; T AKT = total serin-threonin proteinkinase. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 7: CT-billedanalyse. 3D CT-rekonstruktion af en ubehandlet KitV558Δ/+ mus, der viser en tumor (pil) i bækkenet. Klik her for at se en større version af denne figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
KitV558Δ/+ musemodellen er et kraftfuldt forskningsværktøj i den molekylære og immunologiske analyse af GIST. Selvom avlsstrategien kræver et enkelt kryds, kræver brug af KitV558Δ/+ musekohorter i eksperimenter, der analyserer tumorrespons, omfattende avl. Mus bør alders- og kønsmatches for at sikre lignende tumorvægte, og 10% af musene dør inden 8 ugers alderen, når tumorer er etableret. Mindre omfattende avlsstrategier er mulige, hvis man bruger avancerede billeddannelsesteknikker som CT eller MR til at spore tumorvolumen hos individuelle mus. Ikke desto mindre er KitV558Δ/+ mus med succes blevet krydset til andre knock-out eller inducerbare musemodeller, hvilket afslører vigtige immun- og molekylære mekanismer12.
Tumorceller fra KitV558Δ/+ mus isoleres let ved kolonnesortering for KIT (CD117) eller ved flowcytometri18. Isolerede tumorceller fra KitV558Δ/+ mus kan dyrkes in vitro12. Ved tidlige passager bevarer isolerede tumorceller fra KitV558Δ/+ mus KIT-ekspression og kan bruges til in vitro-undersøgelser . Efter flere passager mister disse cellelinjer imidlertid KIT-udtryk, hvilket begrænser deres anvendelighed. Som de fleste musemodeller metastaserer KitV558Δ/+ tumorer ikke, hvilket begrænser undersøgelsen af ekstraintestinal GIST. Tilsvarende forekommer tumorer fra KitV558Δ/+ mus kun i cecum, og celler isoleret fra KitV558Δ/+ tumorer vokser ikke, når de isoleres og injiceres i leveren eller milten, hvilket begrænser evalueringen af tumormikromiljøet fra forskellige sygdomssteder. KitV558Δ/+- mutationen har heller ingen kendt indflydelse på den hæmatologiske udvikling af celler i denne musemodel.
Immunmikromiljøet i tumorer fra KitV558Δ/+ mus indeholder for det meste makrofager efterfulgt af T-celler, som nøje efterligner human GIST11. Det er imidlertid bydende nødvendigt, at cecalhætten fjernes fuldstændigt fra tumoren inden vurdering af tumorvægt eller immuninfiltration, da der findes forskellige immunpopulationer i tumoren versus cecum. Efter vores erfaring er tumorvægte sammenlignelige selv blandt dem med hætter, og der er ingen signifikant sammenhæng mellem tyrosinkinasehæmmerbehandling og udviklingen af en cecalhætte. Desuden har vi ikke fundet nogen signifikant forskel i tumormikromiljøet, der sammenligner tumorer med og uden cecalhætter.
Mange gensplejsede musemodeller er blevet udviklet til brug i kræftforskning, især siden fremkomsten af CRISPR-genredigering. Mens talrige immunkompetente modeller er afhængige af cre-loxP-medieret aktivering af onkogener eller inaktivering af tumorundertrykkende gener, er KitV558Δ /+ tumorer drevet af deres endogene promotor. Derfor er resultaterne i KitV558Δ/+ musemodellen meget oversættelige til menneskelig sygdom, især i evalueringen af KIT-signalering19. Fremadrettet bør KitV558Δ/+ musen fortsætte med at tjene som en værdifuld model, da nye behandlingsstrategier, herunder checkpointblokade og CAR T-terapi, fortsat undersøges til behandling af bløddelstumorer, herunder GIST.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen interessekonflikter at afsløre.
Acknowledgments
KitV558Δ/+ mus blev genetisk manipuleret og delt af Dr. Peter Besmer10. Dette arbejde blev støttet af NIH-tilskud R01 CA102613 og T32 CA251063.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 100 micron filter | EMSCO | 1194-2360 | |
| 1x RBC lysis buffer | Life Technologies | 00-4333-57 | |
| 3mL syringe | Thermo Fisher Scientific/BD Biosciences | 14823435 | |
| 4–15% Mini-PROTEAN TGX Precast Protein Gels, 10-well, 30 µl | Bio-Rad | 4561083 | |
| 4% Paraformaldehyde Solution | Thermo Fisher Scientific | AAJ19943K2 | |
| 40 micron filter | EMSCO | 1194-2340 | |
| 5M NaCl | Sigma Aldrich | S6546 | |
| 70 micron filter | EMSCO | 1194-2350 | |
| AKT antibody (C67E7) | Cell Signaling | 4691 | |
| C57BL/6J mice | The Jackson Laboratory | ||
| Collagenase IV | Sigma Aldrich | C5138 | |
| Complete mini edta free protease inhibitor | Thomas Scientific | C852A34 | |
| Countess II Automated Cell Counter | Thermo Fisher Scientific | ||
| Disposable Scalpels | Thermo Fisher Scientific/Exel International | 14-840-00 | |
| Dnase I | Thomas Scientific | C756V81 | |
| Dog1 antibody | abcam | ab64085 | |
| EDTA | Sigma Aldrich | E9884 | |
| ERK antibody (p44/42) | Cell Signaling | 9102 | |
| FBS | Thomas Scientific | C788U23 | |
| FIJI software | FIJI | https://imagej.net/software/fiji | |
| Fisherbrand 850 Homogenizer | Thermo Fisher Scientific | 15-340-169 | |
| HBSS | University of Pennsylvania Cell Center | ||
| Imatinib mesylate | Selleck Chemicals | S1026 | |
| KIT antibody (D13A2) | Cell Signaling | 3074 | |
| KitV558Δ/+ Genotyping | Transnetyx | ||
| Microcentrifuge tubes (1.5mL) | Thermo Fisher Scientific | 05-408-129 | |
| Mouse on Mouse Immunodetection Kit, Basic | Vector Laboratories | BMK-2202 | |
| Nitrocellulose Membrane, Precut, 0.45 µm | Rio-Rad | 1620145 | |
| Nonfat Dry Milk | Thermo Fisher Scientific | NC9121673 | |
| Nonidet P 40 Substitute | Sigma Aldrich | 74385 | |
| p-AKT antibody (S473) | Cell Signaling | 4060 | |
| p-ERK antibody (p44/42) | Cell Signaling | 9101 | |
| p-KIT antibody (Y719) | Cell Signaling | 3391 | |
| PMSF Protease Inhibitor | Thermo Fisher Scientific | 36978 | |
| Proeinase K | Thermo Fisher Scientific | BP170050 | |
| Round-Bottom Polystyrene Test (FACS) Tubes | Falcon/Thermo Fisher Scientific | 14-959-2A | |
| RPMI | University of Pennsylvania Cell Center | ||
| Sodium fluoride (NaF) | Sigma Aldrich | 201154 | |
| Sodium orthovanadate (Na3VO4) | Sigma Aldrich | S6508 | |
| SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate | Thermo Fisher Scientific | 34076 | |
| TBS buffer (10x) | University of Pennsylvania Cell Center | ||
| Tissue culture dish (100mm2) | Thermo Fisher Scientific/Falcon | 08-772E | |
| TrisHCL | Thermo Fisher Scientific | BP1757500 | |
| Tween 20 | Rio-Rad | 1706531 | |
| vivaCT 80 platform | Scanco medical |
References
- Mastrangelo, G., et al. Incidence of soft tissue sarcoma and beyond: a population-based prospective study in 3 European regions. Cancer. 118 (21), 5339-5348 (2012).
- Joensuu, H., DeMatteo, R. P. The management of gastrointestinal stromal tumors: a model for targeted and multidisciplinary therapy of malignancy. Annual Review of Medicine. 63, 247-258 (2012).
- Blanke, C. D., et al. Long-term results from a randomized phase II trial of standard- versus higher-dose imatinib mesylate for patients with unresectable or metastatic gastrointestinal stromal tumors expressing KIT. Journal of Clinical Oncology. 26 (4), 620-625 (2008).
- Demetri, G. D., et al. Efficacy and safety of regorafenib for advanced gastrointestinal stromal tumours after failure of imatinib and sunitinib (GRID): an international, multicentre, randomised, placebo-controlled, phase 3 trial. Lancet. 381 (9863), 295-302 (2013).
- Gold, J. S. Outcome of metastatic GIST in the era before tyrosine kinase inhibitors. Annals of Surgical Oncology. 14 (1), 134-142 (2007).
- Huynh, H., et al. Sorafenib induces growth suppression in mouse models of gastrointestinal stromal tumor. Molecular Cancer Therapeutics. 8 (1), 152-159 (2009).
- Na, Y. S., et al. Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success. Scientific Reports. 10 (1), 7996 (2020).
- Balachandran, V. P., et al. Imatinib potentiates antitumor T cell responses in gastrointestinal stromal tumor through the inhibition of Ido. Nature Medicine. 17 (9), 1094-1100 (2011).
- Vitiello, G. A., et al. Differential immune profiles distinguish the mutational subtypes of gastrointestinal stromal tumor. Journal of Clinical Investigation. 129 (5), 1863-1877 (2019).
- Sommer, G., et al. Gastrointestinal stromal tumors in a mouse model by targeted mutation of the Kit receptor tyrosine kinase. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (11), 6706-6711 (2003).
- Cavnar, M. J., et al. KIT oncogene inhibition drives intratumoral macrophage M2 polarization. Journal of Experimental Medicine. 210 (13), 2873-2886 (2013).
- Medina, B. D., et al. Oncogenic kinase inhibition limits Batf3-dependent dendritic cell development and antitumor immunity. Journal of Experimental Medicine. 216 (6), 1359-1376 (2019).
- Zhang, J. Q., et al. Macrophages and CD8(+) T cells mediate the antitumor efficacy of combined CD40 ligation and imatinib therapy in gastrointestinal stromal tumors. Cancer Immunology Research. 6 (4), 434-447 (2018).
- General Protocol for Western Blotting. , Available from: https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Buttetin_6376.pdf (2022).
- Sadeghipour, A., Babaheidarian, P. Making formalin-fixed, paraffin embedded blocks. Biobanking: Methods and Protocols. , Springer. New York. 253-268 (2019).
- Sy, J., Ang, L. -C. Microtomy: Cutting formalin-fixed, paraffin-embedded sections. Biobanking: Methods and Protocols. , Springer. New York. 269-278 (2019).
- Seifert, A. M., et al. PD-1/PD-L1 blockade enhances T-cell activity and antitumor efficacy of imatinib in gastrointestinal stromal tumors. Clinical Cancer Research. 23 (2), 454-465 (2017).
- Liu, M., et al. Oncogenic KIT modulates Type I IFN-mediated antitumor immunity in GIST. Cancer Immunology Research. 9 (5), 542-553 (2021).
- Rossi, F., et al. Oncogenic Kit signaling and therapeutic intervention in a mouse model of gastrointestinal stromal tumor. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (34), 12843-12848 (2006).
