두 광자 레이저 유발 신경 부상: 드로소필라 애벌레에서 축 슨 변성 및 재생을 관찰 하는 방법

- 머리를 위로 유리 커버 슬립 아래에 깨끗하고 마취 된 애벌레를 장착하여 시작합니다. 다음으로, 커버 슬립을 부드럽게 밀어 유충을 굴리고 위치를 조정하여 관심 영역을 노출합니다.

그런 다음 대상 축축을 이미징에 사용되는 것보다 더 높은 전력으로 2광자 레이저에 노출. A 2광자 레이저는 주변 조직에 최소한의 손상으로 살아있는 조직 내손상을 관통하고 정확하게 지역화하는 능력으로 인해 사용된다.

표적 뉴런에 손상이 있을 때 즉시 레이저 노출을 중지하여 축절을 초래하거나 축축을 절착합니다.

실시예 프로토콜에서, 우리는 현미경 검사법을 위한 애벌레를 설치하고, 애벌레 감각 신경에 손상을 유도하고, 신경 재생을 추적할 것입니다.

- 애벌레를 마취하는 것으로 시작합니다. 연기 후드에 60mm 유리 접시를 15센티미터 플라스틱 페트리 접시에 넣은 다음 티슈 페이퍼 를 접어 유리 접시에 넣습니다.

다음으로, 유리 슬라이드 위에 할로카본 27 오일 한 방울을 중앙에 놓고 4개의 모서리에 진공 그리스를 놓습니다.

다음으로, 커버 슬립을 밀어 두 광자 레이저가 가장 쉽게 타격할 수 있는 곳에 압연되는 세포를 밀어 넣습니다.

소프트웨어에서 스캐닝 모드로 전환하고 저장된 프로토콜을 로드합니다.

다음으로, 작물 버튼이 제공될 수 있도록 라이브 스캔을 중지합니다. 작물 기능을 사용하여 스캔 창을 조정하여 부상의 장래 부위에 대상 영역을 집중시킨 다음 새로운 이미징 창을 엽니다.

그런 다음 원래 이미징 창으로 돌아가 라이브 모드를 선택하고 포커스를 조정하여 대상영역을 찾습니다.

- 성공적인 부상의 좋은 표시는 작은 분화구의 출현이다, 반지 같은 구조, 또는 부상 사이트에 바로 지역화 파편. 레이저 힘이 너무 높은 경우, 큰 손상된 영역이 표시 될 것, 이는 치명적 일 수있다.

- 이제 조심스럽게 커버 슬립을 제거하고, 효모 페이스트와 함께 새로운 접시에 부상당한 애벌레를 전송합니다.

유충의 후속 이미징의 경우 저장된 공초점 설정을 사용하고 25배 의 목표로 z 스택 이미지를 수집합니다.