Encyclopedia of Experiments: Biology
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- सी एलिगेंस का उपयोग आंतों के रोगजनकों द्वारा संक्रमण के एक प्रयोगात्मक मॉडल के रूप में किया जाता है जो आंतों की बाधा को बाधित करके, इसकी पारगम्यता को बाधित करके, रोग पैदा करता है। बैक्टीरिया या ब्याज के रासायनिक यौगिक के संपर्क में आने के बाद बाधा अखंडता की मात्रा निर्धारित करना, उन्हें अपनी प्लेटों से धोकर कीड़े इकट्ठा करना।
इसके बाद, इन कीड़े को आगर प्लेटों पर रखें, जो हीट-मारे गए ई कोलाई से बना लेबल वाले भोजन के साथ फिटसी-डेक्सट्रान के साथ मिश्रित होता है, जो फ्लोरोसेंट टैग के साथ एक उच्च आणविक वजन पॉलीसैकराइड है।
कीड़े को लेबल वाले बैक्टीरिया खाने की अनुमति दें। बरकरार आंतों की बाधाओं वाले लोग भोजन को तेजी से साफ करेंगे, जबकि अधिक पारगम्य आंतों वाले कीड़े में, फ्लोरोसेंट मार्कर अंग के ल्यूमेन से परे प्रवेश करेगा।
जानवरों को ठीक करने के लिए फॉर्मलडिहाइड समाधान में कीड़े स्थानांतरित करें। 1 से 2 मिनट के बाद, फॉर्मेल्डिहाइड को बढ़ते मीडिया से बदलें।
अंत में, फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी द्वारा कीड़े की छवि। ध्यान दें कि सी एलिगेंस आंतों के कणिकाएं ऑटोफ्लोरेटेंट हैं, इसलिए पृष्ठभूमि संकेत होंगे। लेकिन कुल मिलाकर, अधिक आंतों में फ्लोरेसेंस उच्च पारगम्यता को इंगित करता है।
उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम रोगजनक स्यूडोमोनास एरुगिनोसा बैक्टीरिया से संक्रमित कीड़े की आंतों की पारगम्यता पर बायोमॉल्यूल डिम के साथ उपचार के प्रभाव को परखेंगे।
- गर्मी-निष्क्रिय ई के 2 मिलीलीटर मिश्रण से फिटसी-डेक्सट्रान-पूरक प्लेटें तैयार करें। 4 मिलीग्राम फिटसी-डेक्सट्रान के साथ कोलाई। 20 ताजा एनजीएम आगर प्लेटों में से प्रत्येक में मिश्रण के 100 माइक्रोलीटर जोड़ें और प्लेटों को एक साफ लैब बेंच पर एक घंटे के लिए सूखने दें। 48 घंटे के उपचार के बाद, एस बफर के साथ कीड़े को धोएं। उन्हें फिटसी-डेक्सट्रान पूरक प्लेटों में स्थानांतरित करें और फिटसी-डेक्सट्रान के बिना एनजीएम प्लेटों में स्थानांतरित करें और रात भर प्लेटों को इनक्यूबेट करें।
अगले दिन, एस बफर के साथ कीड़े को धोएं और उन्हें एक घंटे के लिए ताजा एनजीएम आगर प्लेट में क्रॉल करने की अनुमति दें। 96-अच्छी तरह से फ्लैट-तली प्लेट के प्रत्येक कुएं में 4% फॉर्मलडिहाइड के 50 माइक्रोलीटर जोड़ें और प्रत्येक कुएं में लगभग 50 कीड़े स्थानांतरित करें। 1 से 2 मिनट के बाद, सभी फॉर्मलडिहाइड को हटा दें और प्रत्येक कुएं में 100 माइक्रोलीटर जोड़ें।
- फॉर्मलडिहाइड एक जहरीला रसायन है और इसे देखभाल के साथ संभाला जाना चाहिए।
