Microscopía de reflexión de interferencias para la visualización sin etiquetas de la dinámica de los microtúbulos
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 6:36 min. • July 8th, 2025
La microscopía de reflexión de interferencia permite obtener imágenes de microtúbulos que crecen y se encogen dinámicamente.
Fije tiras de parafina en un cubreobjetos y coloque un cubreobjetos un poco más pequeño encima. Calentar para derretir la parafina, formando un canal sellado. Pipetee una solución que contenga anticuerpos a través del canal. Los anticuerpos se adhieren a la superficie del cubreobjetos. Agregue una solución de bloqueo, bloqueando las regiones no unidas a anticuerpos y evitando la unión no específica a proteínas.
Coloque el cubreobjetos en la platina del microscopio. Ajuste el calentador de muestras a una temperatura que facilite el crecimiento de microtúbulos.
Pipeta semillas de microtúbulos estabilizadas con un análogo de trifosfato de guanosina no hidrolizable, GTP. Las semillas se unen al cubreobjetos recubierto de anticuerpos. Agregue un tampón que contenga tubulina, GTP y agentes reductores sin marcar.
A una temperatura y condiciones de amortiguación óptimas, las semillas actúan como sitios de nucleación, lo que permite la unión de tubulina no marcada y el crecimiento de microtúbulos.
Comience a obtener imágenes. La luz incidente se enfoca a través de un
Vea la transcripción completa y acceda a miles de videos científicos