Name: Humanos mamaria interna arteria (IMA) de Trasplantes y colocación de un stent: un modelo humano para estudiar el desarrollo de la reestenosis intra-stent (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-09T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: Aprende a desarrollar un modelo humanizado para estudiar la hiperplasia intimal tras el implante de stents en arterias mamarias humanas. Este método permite evaluar la proliferación de células musculares lisas mediante inmunofluorescencia.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Los autores agradecen a Christiane Pahrmann por su contribución. Un agradecimiento especial a Ethicon, Norderstedt, Hamburgo (Alemania) para proporcionar el material de sutura. Financiamiento Sonja Schrepfer ha recibido una beca de investigación de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992 / 3 1 y SCHR992/4-1).] El trabajo fue apoyado por la ISHLT Shumway Carrera Donaciones para el Desarrollo de 2010 y la financiación de investigación Falk (Universidad de Stanford).

1. La arteria mamaria interna (AMI) Preparación <ol><li> El endotelio arterial se desnuda por el paso de un catéter de 2-francés Fogarty embolectomía arterial (Baxter Healthcare, Deerfield, IL, EE.UU.). El catéter se saca a través de la longitud del recipiente entero dos veces para asegurar el daño endotelial. </li><li> Utilice cualquier stent humana de duración de 8 mm y 2,5 mm-3 mm de diámetro (por ejemplo, Translumina, Yukon stent). PRECAUCION: El diámetro del stent no debe exceder el diámetro del vaso en más del 10% para evitar la estenosis pre y post-stent. PRECAUCIÓN: No cambie la longitud del stent dentro del mismo estudio. </li><li> Despliegue el stent utilizando la presión de globo adecuado (que se observa en el paquete del stent) para conseguir el diámetro deseado. </li><li> Tienda IMA stent en 4 ° C RPMI + heparina (500 ml IE/10) sobre el hielo hasta el trasplante. </li></ol> 2. Preparación de Animales RNU Nude (Crl: NIH Foxn1rnu) ratas (300-350 g) se housed bajo condiciones convencionales en scantainer ventilados, alimentados con pienso estándar para ratas y agua ad libidum autoclave. <ol><li> Se anestesia la rata con isoflurano (2,5-3%), utilizando una cámara de inducción. </li><li> Afeitar el vello abdominal y colocar la rata en su espalda y coloque una mascarilla sobre la nariz y la boca para mantener la anestesia. </li><li> Desinfecte la zona abdominal ampliamente mediante Provo-yodo, el próximo uso etanol al 80% - repita este paso dos veces. Compruebe reflejos pellizcando las patas traseras para asegurarse de que la rata es suficiente anestesia. </li><li> Bajo visión microscópica, realizar una laparotomía media superior para exponer la aorta abdominal infrarrenal. </li><li> Coloque los intestinos en un guante hidratada solución salina. Doble el guante alrededor de los intestinos para evitar la pérdida de humedad. </li><li> Disección de la aorta infrarrenal de la región a la bifurcación, con cuidado para no causar daños en las ramas de los vasos. </li><li> Utilice abrazaderas micro para detener el flujo sanguíneo aórtico. Coloque elabrazadera proximal primero, seguido por la pinza distal. </li><li> Eliminar una aplicación. 0.5-0.7 segmento aórtico mm y vaciar la aorta restante con heparina (200 unidades). </li><li> Tome el IMA con stent y acortar a la longitud adecuada y colocarlo en el hueco. </li><li> Conecte el IMA a la aorta receptor, mediante la ejecución de las suturas de prolene 8-0 con puntos de sutura (Ethicon, Norderstedt, Alemania). </li><li> Abra cuidadosamente la primera abrazadera craneal y luego la pinza caudal. </li><li> No debe haber un pulso visible en el trasplantado IMA y en el extremo distal de la aorta. </li><li> Coloque los intestinos en el abdomen. </li><li> Lave el abdomen con pre-calentado solución salina estéril. </li><li> Cerca de la capa muscular de la pared abdominal usando suturas de prolene 6-0 funcionamiento (Ethicon, Norderstedt, Alemania). </li><li> Mientras que la rata se encuentra todavía en la anestesia, inyectar 4-5 mg / kg de carprofeno por vía subcutánea. </li><li> Administrar la analgesia post-quirúrgica, según proceda (por ejemplo, carprofeno o meloxicam) durante 3 días después de la SurgEry. </li></ol> 3. Los resultados representativos Para histología, las muestras fueron fijadas en formol al 4%, se deshidrataron en una serie gradual de alcohol, y se infiltró en una mezcla (MMA I) de 80% de metacrilato de metilo y el 20% de ftalato de dibutilo por 1 día, yo con MMA seca de peróxido de benzoilo para el 1% Hace 1 semana, y yo MMA con peróxido de benzoilo seca 3% (MMA III) durante 1-2 días a 4 ° C. Posteriormente, las muestras se polimeriza en fresco III MMA en viales de vidrio en un baño de agua sobre una base de pre-polimerizado. Polimerización lenta se logra manteniendo los viales a 26 ° C durante la noche, aumentando la temperatura a 28 ° C a la mañana siguiente, y luego aumentar gradualmente la temperatura de 0,5 ° C durante 12 h hasta que la polimerización se produjo. Los bloques polimerizados se seccionaron en espesor micras 5 utilizando un microtomo MICROM HM 360 equipado con una cuchilla de carburo de tungsteno. Para identificar el origen de la proliferación de las células (figura 1), las diapositivas se Stained con la identificación de anticuerpos o bien la rata proteína verde fluorescente (GFP) o MHC-I y las células musculares lisas. Para estos estudios, humano IMA se incubó con el gen reportero GFP durante la noche utilizando partículas lentiviral para la transducción estable de células IMA. La división de las células hijas de origen humano podrían ser identificados mediante la expresión de GFP. Después de deparaffinization, inducida por el calor de recuperación del epítopo se realiza mediante el calentamiento de las diapositivas en la solución de antígeno de recuperación con un barco de vapor. La imagen-iT FX señal potenciador se puede utilizar para la etapa de bloqueo. Las células de origen humano se identifican usando los anticuerpos monoclonales de ratón contra GFP (1:100 diluida en diluyente anticuerpo primario (Dako)), y aún más marcado con cabra anti-IgG de ratón, Alexa Fluor 488 (1:1000 diluido en diluyente anticuerpo secundario ). Las células del músculo liso se marcaron con el conejo polycolonal anti-músculo liso α-actina (1:100 diluida en diluyente anticuerpo primario), seguido de cabra anti-IgG de conejo, Alexa Fluor 555 (1:1000 dilbuidas en diluyentes anticuerpo secundario). Cada etapa de incubación del anticuerpo se realizó a 37 ° C durante 1 hora con PBS tres veces el lavado en el medio. Los núcleos se tiñeron con DAPI durante 10 minutos. Después del montaje de las diapositivas utilizando Prolongue reactivo Antifade Oro, las muestras se analizaron mediante microscopía confocal. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3663/3663fig1.jpg" /> Figura 1. las células neointimal como las células del músculo liso R:. Verde = contra las buenas prácticas agrarias, el etiquetado de las células de origen humano, rojo = humanos anti actina de células musculares lisas, de color azul = DAPI, la identificación de núcleos de células B: Verde = rata anti MHC-I, el etiquetado las células de origen rata; rojo = humanos anti actina de células musculares lisas, de color azul = DAPI, la identificación de los núcleos celulares. Las células en crecimiento se identifican como células musculares lisas y positivos para las buenas prácticas agrarias, pero negativo para la rata MHC-I molécula. Por lo tanto, las células proliferantes son origen humano.

<ol><li>Deuse, T., Ikeno, F., Robbins, R. C., Schrepfer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+In-Stent+Restenosis%3A+An+Inexpensive%2C+Reliable%2C+and+Rapid+Preclinical+Model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Imaging In-Stent Restenosis: An Inexpensive, Reliable, and Rapid Preclinical Model.</a> J. Vis. Exp. (31), e1346(2009).</li>
<li>Oyamada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-iliac+rat+aorta+stenting%3A+a+novel+high+throughput+preclinical+stent+model+for+restenosis+and+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Trans-iliac rat aorta stenting: a novel high throughput preclinical stent model for restenosis and thrombosis.</a> J. Surg. Res. 166, e91-e95 (2011).</li>
<li>Chamberlain, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+in+situ+stenting%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+research%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of in situ stenting.</a> Cardiovascular research. 85, 38-44 (2010).</li>
<li>Deuse, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introducing+the+first+polymer-free+leflunomide+eluting+stent%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Introducing the first polymer-free leflunomide eluting stent.</a> Atherosclerosis. 200, 126-134 (2008).</li>
<li>Finn, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+healing+after+sirolimus%2C+paclitaxel%2C+and+bare+metal+stent+placement+in+combination+with+peroxisome+proliferator-activator+receptor+gamma+agonists%3A+requirement+for+mTOR%2FAkt2+in+PPARgamma+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+research%22%5BJournal%5D)">Differential healing after sirolimus, paclitaxel, and bare metal stent placement in combination with peroxisome proliferator-activator receptor gamma agonists: requirement for mTOR/Akt2 in PPARgamma activation.</a> Circulation research. 105, 1003-1012 (2009).</li>
<li>Tellez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+bare+metal+stent+implantation+in+homozygous+LDL+receptor+deficient+swine+induces+a+neointimal+formation+pattern+similar+to+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Coronary bare metal stent implantation in homozygous LDL receptor deficient swine induces a neointimal formation pattern similar to humans.</a> Atherosclerosis. 213, 518-524 (2010).</li>
<li>Suzuki, Y., Yeung, A. C., Ikeno, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pre-clinical+animal+model+in+the+translational+research+of+interventional+cardiology%5BTitle%5D)+AND+%22JACC+Cardiovasc.+Interv%22%5BJournal%5D)">The pre-clinical animal model in the translational research of interventional cardiology.</a> JACC Cardiovasc. Interv. 2, 373-383 (2009).</li>
<li>Holt, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intimal+proliferation+in+an+organ+culture+of+human+internal+mammary+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+research%22%5BJournal%5D)">Intimal proliferation in an organ culture of human internal mammary artery.</a> Cardiovascular research. 26, 1189-1194 (1992).</li>
<li>Swanson, N., Javed, Q., Hogrefe, K., Gershlick, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+internal+mammary+artery+organ+culture+model+of+coronary+stenting%3A+a+novel+investigation+of+smooth+muscle+cell+response+to+drug-eluting+stents%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Sci.+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Human internal mammary artery organ culture model of coronary stenting: a novel investigation of smooth muscle cell response to drug-eluting stents.</a> Clin. Sci. (Lond). 103, 347-353 (2002).</li>
</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

Aunque diferentes en los modelos de investigación in vivo son existentes para investigar el desarrollo de hiperplasia de la íntima después de la colocación de un stent, estos modelos siguen enfrentando obstáculos para superar translacional. Además, los modelos animales grandes son las condiciones de vivienda caros y especiales, así como equipo quirúrgico no está disponible para todos los laboratorios. El uso de un IMA humanos para estudiar el desarrollo humano de la prolife...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> 2 catéter de Fogarty francesa </td><td> Baxter Healthcare, Deerfield, IL, EE.UU. </td><td> 120602F </td><td></td></tr><tr><td> Yukon stent </td><td> Translumina GmbH, Hechingen, Alemania </td><td></td><td> El uso del stent de su elección de acuerdo a su protocolo de estudio </td></tr><tr><td> Medio RPMI </td><td> Biochrom </td><td> Nr.F1275 </td><td></td></tr><tr><td> heparina </td><td> Baxter </td><td> 2B0953 </td><td></td></tr><tr><td> isoflurano </td><td> Abad </td><td> B506 </td><td></td></tr><tr><td> Provo-yodo </td><td> Betadine Puredue Pharma </td><td> EAN: 5995327165830 </td><td></td></tr><tr><td> 80% etanol </td><td> Geyer </td><td> ETV 80/0500 </td><td></td></tr><tr><td> Micro pinza </td><td> Aparato de Harvard </td><td> PY2-61 hasta 0186 </td><td></td></tr><tr><td> Las suturas 8-0 </td><td> Johnson &amp; Johnson, </td><td> 2808G </td><td></td></tr><tr><td> Las suturas 6-0 </td><td> Johnson &amp; Johnson, </td><td> 1698 H </td><td></td></tr><tr><td> Carprofeno </td><td> Feizer Vet </td><td> PZN: 0110208 </td><td></td></tr><tr><td> Metamizol </td><td> Ratiopharm </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Target Retrieval Solution, pH 9 </td><td> Dako </td><td> S2368 </td><td></td></tr><tr><td> Imagen de la señal FX-iT potenciador </td><td> Invitrogen </td><td> I36933 </td><td></td></tr><tr><td> monoclonal de ratón anticuerpos anti-GFP </td><td> BD colores vivos </td><td> 632381 </td><td></td></tr><tr><td> diluyente anticuerpo primario </td><td> Dako </td><td> S3022 </td><td></td></tr><tr><td> de cabra anti-IgG de ratón, Alexa Fluor 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11017 </td><td></td></tr><tr><td> diluyente anticuerpo secundario </td><td> Dako </td><td> S0809 </td><td></td></tr><tr><td> conejo polycolonal anti-músculo liso α-actina </td><td> Abcam, </td><td> ab5694 </td><td></td></tr><tr><td> cabra anti-IgG de conejo, Alexa Fluor 555 </td><td> Invitrogen </td><td> A21430 </td><td></td></tr><tr><td> Prolongar el reactivo Antifade Oro </td><td> Invitrogen </td><td> P36930 </td><td></td></tr></tbody></table>

humanos mamaria interna arteria (ima) de trasplantes y colocación de un stent: un modelo humano para estudiar el desarrollo de la reestenosis intra-stent

Human Internal Mammary Artery (IMA) Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

Preclínica en modelos in vivo de investigación para investigar los procesos patobiológicas y fisiopatológicos en el desarrollo de hiperplasia de la íntima después de la colocación de stents buques son cruciales para el 1,2 enfoques de la traducción. Los modelos animales comúnmente utilizados son ratones, ratas, conejos, cerdos y 3-5. Sin embargo, la traducción de estos modelos en entornos clínicos sigue siendo difícil, ya que los procesos biológicos ya se estudió en los vasos de los animales, pero nunca realizado antes en modelos de investigación humanos 6,7. En este video se demuestra un nuevo modelo humanizado de superar esta brecha de la traducción. El procedimiento que se muestra es reproducible, fácil y rápido de realizar y es adecuado para estudiar el desarrollo de hiperplasia de la íntima y la aplicación de stents diversas. Este vídeo muestra cómo realizar la técnica de stent en los vasos humanos seguida por el trasplante en ratas inmunodeficientes, yidentifica el origen de las células proliferantes como humano.

Este video muestra un modelo para estudiar el desarrollo de hiperplasia de la íntima después de la implantación del stent utilizando un recipiente humano (IMA) en un modelo de rata inmunodeficiente.

Humanos mamaria interna arteria (IMA) de Trasplantes y colocación de un stent: un modelo humano para estudiar el desarrollo de la reestenosis intra-stent

Modelos de investigación preclínica in vivo para investigar los procesos patobiológicos y patofisiológicos en el desarrollo de la hiperplasia intimal tras la ... del vaso

El objetivo general de este procedimiento es estudiar el desarrollo de la hiperplasia íntima en un modelo humanizado. Esto se logra primero mediante la desnudación de un segmento de arteria mamaria humana o IMA, utilizando un catéter Fogarty de dos French. A continuación, se inserta un stent en la IMA.Luego, un segmento de la aorta abdominal de rata se reemplaza con una arteria mamaria interna con stent. Finalmente, la herida se sutura y se permite que el animal se recupere; el daño endotelial causado por el procedimiento invasivo de dilatación con balón y colocación de stent provoca inflamación y la producción de citocinas inflamatorias. Esto conduce a la proliferación de células musculares lisas, que progresivamente ocluyen la luz del vaso, resultando en estenosis.Finalmente, se pueden obtener resultados que muestran la proliferación de células musculares lisas humanas mediante microscopía confocal de inmunofluorescencia. Hoy les mostraremos un modelo para la evaluación de la estenosis de muñeca en arterias humanas en un huésped rojo. La ventaja de este modelo frente a técnicas existentes como la aorta abdominal aislada en condiciones húmedas, es que podemos evaluar stents humano

human-internal-mammary-artery-ima-transplantation-stenting-human

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este video muestra cómo utilizar un modelo preclínico de bajo costo y confiable para estudiar los procesos fisiopatológicos patobiológicas y de desarrollo de reestenosis intra-stent. Longitudinal monitorización in vivo utilizando octubre (tomografía de coherencia óptica) y el análisis de las imágenes de OCT también se demuestre.

Imágenes de reestenosis intra-stent: un modelo barato, preclínicos fiable, rápida y

Se describe un modelo de implantación de un stent en la arteria carótida del ratón. En comparación con otros métodos similares, este procedimiento es muy rápido, simple y accesible, que ofrece la posibilidad de estudiar de una manera conveniente la reacción de la pared vascular a diferentes stents liberadores de fármacos y los mecanismos moleculares de la restenosis.

Un modelo murino de la implantación de un stent en la arteria carótida para el Estudio de la reestenosis

Describimos una técnica quirúrgica que produce una lesión con alambre en la arteria femoral de ratones para inducir hiperplasia neointimal para servir como sistema de prueba modelo para la administración perivascular de compuestos terapéuticos para la inhibición de la reestenosis.

Modelo murino de la arteria femoral Lesiones Alambre con implantación de un perivascular Drug Delivery Patch

La reestenosis después de los procedimientos cardiovasculares (cirugía de bypass, angioplastia o stent) es un problema significativo que reduce la durabilidad de estos procedimientos. Una terapia ideal inhibiría la proliferación de células de músculo liso (VSMC) mientras promovía la regeneración del endotelio. Describimos un modelo para la evaluación simultánea de la proliferación VSMC y la función endotelial in vivo.

Lesión por aplastamiento aórtico murino: una eficacia<em&gt; In Vivo</em&gt; Modelo de proliferación de células musculares lisas y función endotelial

Este trabajo demuestra un nuevo enfoque para evaluar la proliferación, la diferenciación y el potencial de formación de vasos de células madre endoteliales vasculares (VESCs) a través de trasplante de almohadillas de grasa mamaria seguido de preparación de tejido de montaje completo para la observación microscópica. También se presenta una estrategia de seguimiento de linaje para investigar el comportamiento de VESCs in vivo .

Una nueva técnica de trasplante de grasa mamaria para visualizar la generación de vasos de células madre endoteliales vasculares

Este artículo demuestra un modelo murino para el desarrollo de la hiperplasia myointimal (MH) después de lesión de globo.

Lesión basada en globo para inducir la hiperplasia Myointimal de la Aorta Abdominal de ratón

El presente protocolo tiene como objetivo crear experimentalmente hiperplasia intimal venosa sometiendo las venas a la presión arterial para desarrollar estrategias para atenuar la hiperplasia intimal venosa después de la cirugía de revascularización mediante injertos de venas.

Un modelo de interposición venosa de conejo imitando la cirugía de revascularización usando injertos de vena para evaluar la hiperplasia intimal bajo presión arterial arterial

Este protocolo describe la implantación de stents coronarios humanos en la aorta abdominal de ratas con un apoE-/- fondo usando un acceso transporte-femoral. En comparación con otros modelos animales, los modelos murinos tienen las ventajas de un alto rendimiento, reproducibilidad, facilidad de manejo y alojamiento, y una amplia disponibilidad de marcadores moleculares.

Implantación De Stents Coronarios De Tamaño Humano En La Aorta Abdominal De Rata Usando Un Acceso Trans-Femoral

Aquí presentamos un modelo murino para la anastomosis de la arteria femoral, ofreciendo a los investigadores un valioso modelo animal para estudiar y simular la estenosis anastomótica vascular. Este desarrollo es crucial para avanzar en nuestra comprensión de la fisiopatología subyacente a esta afección y facilitar una investigación más precisa y eficaz de las enfermedades vasculares.

Desarrollo de un modelo murino para la estenosis anastomótica de la arteria femoral

Este video muestra el modelo de trasplante ortotópico de la aorta como un modelo simple para estudiar el desarrollo de vasculopatía del trasplante (TVP) en ratas.

Trasplante ortotópico aórtica: un modelo de rata para estudiar el desarrollo de la enfermedad vascular crónica

Aprende a desarrollar un modelo humanizado para estudiar la hiperplasia intimal tras el implante de stents en arterias mamarias humanas. Este método permite evaluar la proliferación de células musculares lisas mediante inmunofluorescencia.

Humanos mamaria interna arteria (IMA) de Trasplantes y colocación de un stent: un modelo humano para estudiar el desarrollo de la reestenosis intra-stent (Video) | JoVE Journal

Humanos mamaria interna arteria (IMA) de Trasplantes y colocación de un stent: un modelo humano para estudiar el desarrollo de la reestenosis intra-stent

Explorar más videos