Un modelo de remodelamiento cardiaco A través de la constricción de la aorta abdominal en ratas

El objetivo general del procedimiento quirúrgico es proporcionar una plataforma simple para estudiar la hipertrofia, la remodelación y la disfunción miocárdica. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo cardiovascular, como la señalización que involucra la hipertrofia y la remodelación cardiovascular. Así como el descubrimiento de nuevas dianas terapéuticas en la cardiopatía hipertensiva.

La principal ventaja de esta técnica es que se trata de un método mínimamente invasivo que requiere técnicas quirúrgicas muy sencillas y, sin embargo, los resultados son altamente reproducibles. Las implicaciones de estas técnicas se extienden a nuestra terapia de la cardiopatía hipertensiva. Dado que la constricción de la aorta abdominal induce una sobrecarga de presión y, finalmente, conduce a la hipertrofia cardiovascular, la remodelación y la insuficiencia cardíaca.

Para comenzar, prepare una aguja de jeringa de calibre 22 usando una piedra de afilar para desafilar la punta. Luego, con unos alicates, pliega la aguja en ángulo recto. Preparar los materiales quirúrgicos necesarios, incluida la jaula de recuperación, y esterilizar en autoclave los instrumentos quirúrgicos.

Mantenga a las ratas alrededor de 200 gramos y manténgalas bajo ciclos de luz y oscuridad de 12 horas a una temperatura controlada con libre acceso a alimentos y agua. Coloque a la rata en posición supina sobre una plataforma quirúrgica con una almohadilla térmica para mantener la temperatura corporal. Afeitar completamente el área quirúrgica para evitar la contaminación de la herida a través del contacto con el pelaje.

Luego, con betadine u otro reactivo limpiador, frote el abdomen bien afeitado. A continuación, con un bisturí, haz una incisión de dos centímetros a lo largo de la línea media del abdomen. Luego, con solución salina normal, humedezca los órganos abdominales y mantenga los órganos húmedos durante la cirugía.

Con el uso de bolas de algodón, desplace cuidadosamente los órganos digestivos hacia un lado para exponer la vena cava inferior y la región peritoneal posterior. A continuación, identifique la aorta abdominal que se encuentra yuxtapuesta a la izquierda de la vena cava inferior. Ahora, con fórceps, perfore el peritoneo para descubrir los vasos que se encuentran debajo.

Aísle suavemente la aorta abdominal adyacente a las arterias renales y pase una sutura de seda 4/0 de ocho centímetros de largo por debajo del vaso entre los orígenes de las arterias renales derecha e izquierda. Haz un nudo doble suelto con la sutura y deja un bucle de tres milímetros de diámetro. A continuación, coloque la aguja de calibre 22 desafilada y doblada dentro del bucle.

Apriete el nudo alrededor de la aorta y la aguja y luego retire inmediatamente la aguja para lograr una constricción de 0,7 milímetros de diámetro. Con suturas 6/0 se cierra la cavidad abdominal. A continuación, utilice suturas interrumpidas simples para cerrar las incisiones musculares y cutáneas.

Use tintura de yodo para frotar el sitio quirúrgico y prevenir infecciones. Para prevenir el dolor posquirúrgico, trate al animal con paracetamol y observe de cerca al animal hasta que recupere la conciencia suficiente, según lo indicado por la libertad de movimiento y la ingesta de alimentos, y mantenga la decúbito esternal. A las 10 semanas después de la cirugía, pesa la rata.

Después de anestesiar al animal y confirmar la profundidad de la anestesia, coloque la rata en una bandeja de metal. Ahora haga una incisión de cinco centímetros en la región torácica alrededor de la línea media de la apófisis xifoides. Con pinzas afiladas, perfore el diafragma.

Luego, con unas tijeras, corte y retire la caja torácica a lo largo de las líneas midclavicular en ambos lados para exponer el corazón. Extirpe cuidadosamente el corazón a lo largo de los bordes cardíaco y vascular. A continuación, retire suavemente el corazón sin agarrar el tejido.

Monte el corazón en un aparato de perfusión de Langendorff modificado atando el tronco aórtico a la aguja de perfusión. A continuación, utiliza el tampón Krebs para perfundir el corazón y lavar la sangre. Pesa el corazón y calcula la relación entre el peso del corazón y el peso corporal.

Luego, mientras usa una máscara, coloque el órgano en paraformaldehído al 4% y fíjelo en hielo durante la noche. Después de fijar el tejido cardíaco, colóquelo en un dispositivo de sección de tejido, córtelo en rodajas de dos milímetros de grosor y coloque las secciones en un casete de inclusión. Después de la inclusión de parafina y el corte adicional de acuerdo con el protocolo de texto, desparafine los portaobjetos colocándolos en un tanque con xileno durante 30 minutos.

A continuación, rehidratar el tejido en una serie de alcohol diluido secuencialmente seguido de agua destilada. A continuación, utilice una solución adecuada de rojo picrosirius para cubrir completamente las secciones de tejido e incubar durante una hora. A continuación, utilice una solución de ácido acético al 0,5% para enjuagar los portaobjetos dos veces.

Y enjuague las muestras dos veces en alcohol absoluto. Seque las muestras al aire y móntelas en resina sintética con un cubreobjetos. A continuación, utilice la luz visible bajo un microscopio con un aumento de 200X para obtener imágenes de las diapositivas.

Finalmente, calcule el porcentaje de zona roja positiva de picrosirius sobre el área total que indica la extensión de la fibrosis. Como se muestra aquí, el volumen cardíaco aumentó después de la cirugía de constricción de la aorta abdominal. Como lo demuestra una mayor relación entre el peso cardíaco y el peso corporal, que es un indicador de hipertrofia cardíaca.

Mediante el uso de la tinción con rojo picrosirius, el miocardio fibrótico con mayor contenido de colágeno se puede distinguir de las áreas normales. Como se demostró en estas muestras teñidas, la fibrosis cardíaca aumentó después de la cirugía de constricción de la aorta abdominal en comparación con los controles. Una vez dominada, la cirugía se puede realizar en 30 minutos si se realiza correctamente.

Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como la ecocardiografía, para responder preguntas adicionales sobre la función cardíaca. Después de su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la enfermedad cardíaca hipertensiva exploraran los mecanismos relacionados con la cardiohipertrofia, la remodelación y el fracaso. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo realizar la constricción aórtica abdominal para inducir la cardiohipertrofia y la remodelación miocárdica en ratas.