Creación de un modelo de roedor del Aneurysm aórtico Abdominal bloqueando Adventitial de la Vasa Vasorum de la perfusión

El objetivo general de este procedimiento es inducir hipoxia de tejido aórtico para el inicio de un aneurisma de aorta abdominal o AAA con dilatación aórtica progresiva en la rata. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el período de investigación de los aneurismas aórticos sobre los mecanismos responsables del desarrollo y la ruptura de los aneurismas aórticos abdominales. La principal ventaja de esta técnica es que las características morfológicas y patológicas del modelo de rata son similares a las observadas en los aneurismas de aorta abdominal humanos.

La primera vez que tuvimos la idea de este método fue cuando estábamos investigando otra posibilidad de un AAA humano. La demostración visual de este método es fundamental, ya que la cirugía de inducción de hipoxia es difícil de aprender solo a través de la instrucción en texto. La demostración del procedimiento estará a cargo de Tatsuro Yata, nuestro cirujano vascular, y Hirona Kugo, ambos ex médicos de nuestro laboratorio.

Después de confirmar el nivel adecuado de sedación mediante un pellizco en los dedos de los pies, use una afeitadora eléctrica para afeitar el vello abdominal de una rata de 300 a 400 miligramos, seguido de una desinfección secuencial de la piel expuesta con alcohol y povidona yodada. Coloque la rata en la mesa de operaciones en posición supina y aplique ungüento en los ojos del animal. A continuación, use una tijera para hacer una incisión abdominal en la línea media ventral y use una gasa estéril y un retractor de heridas para empaquetar el contenido abdominal dentro de la cavidad abdominal.

Para separar la aorta del tejido perivascular, use pinzas para levantar y desgarrar suavemente el retroperitoneo, exponiendo la pared aórtica. Luego, exfoliar la aorta infrarrenal dentro del espacio retroperitoneal desde la vena renal izquierda hasta la bifurcación del tejido perivascular. Use una sutura de seda 5-0 para ligar los vasos que se ramifican desde la aorta abdominal para bloquear el suministro de sangre en un punto alejado de la aorta que no estreche la luz aórtica.

Para bloquear el flujo sanguíneo aórtico, coloque clips vasculares justo debajo de la arteria renal y justo encima de la bifurcación de la aorta. De manera similar a la creación de una hemorragia de puntos en la superficie de la pared aórtica, inserte la microtijera a 5 mm distalmente del clip aórtico adyacente a las ramas de la arteria renal para cortar la pared aórtica anterior y use una aguja permanente de calibre 24 para insertar superficialmente un catéter de poliuretano a través de la incisión. Conecte una jeringa de 1 ml llena de agua al poliuretano y elimine la sangre restante de la aorta.

A continuación, corte un nuevo catéter de poliuretano de 10 mm de largo e inserte completamente este catéter en la incisión de la luz aórtica. Vuelva a colocar el punto medio del catéter para que coincida con la ubicación de la incisión y use un 8-0 Sutura monofilamento para cerrar la incisión con una sutura interrumpida. Ligue la aorta abdominal con un nudo de cirujano utilizando una sutura de seda 5-0 y el catéter de poliuretano.

Cuando el catéter esté asegurado, retire los clips vasculares en la bifurcación aórtica y por debajo de la arteria renal para restaurar el flujo sanguíneo anterógrado y confirmar la presencia de pulsación aórtica macroscópica. Después de retirar la gasa, use una sutura de polipropileno 4-0 para cerrar firmemente la incisión abdominal en dos capas para evitar que el órgano sobresalga. Luego, aplique lidocaína tópica a la incisión abdominal y coloque a la rata en una almohadilla térmica con monitoreo hasta que esté completamente reconocida.

En el postoperatorio, observe el evolución temporal de la aorta agrandada en un ecograma ecográfico, midiendo el diámetro máximo desde el borde interior hasta el borde exterior de la aorta abdominal según los protocolos estándar. 28 días después de la cirugía, use un bisturí para abrir el abdomen con una nueva incisión ventral y use tijeras para extraer el aneurisma. Coloque las aortas recolectadas en formalina tamponada al 10%neutralmente durante 24 a 48 horas.

Después de incrustar las aortas en parafina y obtener secciones del tejido aórtico, de acuerdo con los protocolos estándar, hidratar las secciones fijas de parafina en agua destilada durante 10 minutos, seguido de la incubación en hematoxilina de Verhoeff. La oxidación y la corrosión se pueden identificar con la hematoxilina de Verhoeff y la actividad del laboratorio de soluciones de van Gieson. Por lo tanto, la frescura y los tiempos de incubación de estos tintes tisulares son importantes para el archivo y la tinción opcional.

Después de 25 minutos, enjuague las secciones con tres lavados de 1 minuto en agua, seguidos de 10 a 30 inmersiones en solución diferenciadora. Enjuague las secciones tres veces en agua nuevamente y coloque las muestras en tiosulfato de sodio al 5% durante un minuto. Después de otro lavado con agua, sumerja las muestras en la solución de van Gieson durante cinco minutos.

A continuación, deshidratar los tejidos en inmersiones ascendentes de etanol de 30 segundos, seguidas de una limpieza con dos incubaciones de xileno de 5 minutos. A continuación, utilice un medio de montaje de resonancia para cubrir las secciones con cubreobjetos del tamaño adecuado. En estas imágenes se muestra un aneurisma de aorta abdominal representativo, 28 días después de la inserción del catéter.

La medición de los extremos superior e inferior de la aorta mediante ecografía transabdominal revela un diámetro normal sin dilatación inmediatamente después de la colocación del catéter, que aumenta a un tamaño máximo aproximadamente 14 días después de la colocación y permanece sin cambios o aumenta ligeramente hasta el final del período experimental. El análisis histopatológico del aneurisma en el día 28 revela una degradación prominente de las fibras elásticas en comparación con la observada en el día cero. Una vez dominada, esta técnica se puede completar en aproximadamente una hora si se realiza correctamente.

Siguiendo este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como el análisis in vitro, para responder a preguntas adicionales sobre las funciones individuales de la serie. Después de su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo del aneurisma de aorta abdominal exploraran la enfermedad en grupos demográficos específicos de pacientes. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo inducir hipoxia del tejido aórtico para el inicio de aneurismas de aorta abdominal con dilatación aórtica progresiva en la rata.

No olvide que trabajar con instrumentos quirúrgicos puede ser extremadamente peligroso y que siempre se deben tomar precauciones contra lesiones e infecciones al realizar este procedimiento.