Name: Medir la funcionalidad de la placa neuromuscular (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 40 s
Description: Aprende a evaluar la funcionalidad de la placa neuromuscular mediante preparaciones ex vivo de músculo-nervio en ratón. Este protocolo utiliza estimulación directa y nerviosa para medir respuestas contractiles diferenciales.

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Trabajo en laboratorio de los autores fue apoyada por Fondazione Roma y Teletón (no de la concesión. GGP14066).

<ol><li>Dadon-Nachum, M., Melamed, E., Offen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%26%2334%3Bdying-back%26%2334%3B+phenomenon+of+motor+neurons+in+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The &#34;dying-back&#34; phenomenon of motor neurons in ALS.</a> J Mol Neurosci. 43 (3), 470-477 (2011).</li>
<li>Dobrowolny, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+Muscle+Is+a+Primary+Target+of+SOD1G93A-Mediated+Toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Skeletal Muscle Is a Primary Target of SOD1G93A-Mediated Toxicity.</a> Cell Metab. 8 (5), 425-436 (2008).</li>
<li>Mantilla, C. B., Zhan, W. Z., Sieck, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophins+improve+neuromuscular+transmission+in+the+adult+rat+diaphragm%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Neurotrophins improve neuromuscular transmission in the adult rat diaphragm.</a> Muscle Nerve. 29 (3), 381-386 (2004).</li>
<li>Prakash, Y. S., Miyata, H., Zhan, W. Z., Sieck, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivity-induced+remodeling+of+neuromuscular+junctions+in+rat+diaphragmatic+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Inactivity-induced remodeling of neuromuscular junctions in rat diaphragmatic muscle.</a> Muscle Nerve. 22 (3), 307-319 (1999).</li>
<li>Sieck, D. C., Zhan, W. Z., Fang, Y. H., Ermilov, L. G., Sieck, G. C., Mantilla, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure-activity+relationships+in+rodent+diaphragm+muscle+fibers+vs.+neuromuscular+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Physiol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Structure-activity relationships in rodent diaphragm muscle fibers vs. neuromuscular junctions.</a> Respir Physiol Neurobiol. 180 (1), 88-96 (2012).</li>
<li>Van Lunteren, E., Moyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+DAP+on+diaphragm+force+and+fatigue%2C+including+fatigue+due+to+neurotransmission+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of DAP on diaphragm force and fatigue, including fatigue due to neurotransmission failure.</a> J Appl Physiol. 81 (5), 2214-2220 (1996).</li>
<li>Van Lunteren, E., Moyer, M., Kaminski, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adverse+effects+of+myasthenia+gravis+on+rat+phrenic+diaphragm+contractile+performance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Adverse effects of myasthenia gravis on rat phrenic diaphragm contractile performance.</a> J Appl Physiol. 97 (3), 895-901 (2004).</li>
<li>Lee, Y., Mikesh, M., Smith, I., Rimer, M., Thompson, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscles+in+a+mouse+model+of+spinal+muscular+atrophy+show+profound+defects+in+neuromuscular+development+even+in+the+absence+of+failure+in+neuromuscular+transmission+or+loss+of+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscles in a mouse model of spinal muscular atrophy show profound defects in neuromuscular development even in the absence of failure in neuromuscular transmission or loss of motor neurons.</a> Dev Biol. 356 (2), 432-444 (2011).</li>
<li>Personius, K. E., Sawyer, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variability+and+failure+of+neurotransmission+in+the+diaphragm+of+mdx+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscular+Disord%22%5BJournal%5D)">Variability and failure of neurotransmission in the diaphragm of mdx mice.</a> Neuromuscular Disord. 16 (3), 168-177 (2006).</li>
<li>Röder, I. V., Petersen, Y., Choi, K. R., Witzemann, V., Hammer, J. A., Rudolf, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+myosin+Va+in+the+plasticity+of+the+vertebrate+neuromuscular+junction+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Role of myosin Va in the plasticity of the vertebrate neuromuscular junction in vivo.</a> PLoS ONE. 3 (12), e3871(2008).</li>
<li>Chevessier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+congenital+myasthenic+syndrome+due+to+MuSK+mutations+reveals+defects+in+structure+and+function+of+neuromuscular+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">A mouse model for congenital myasthenic syndrome due to MuSK mutations reveals defects in structure and function of neuromuscular junctions.</a> Hum Mol Genet. 17 (22), 3577-3595 (2008).</li>
<li>Farchi, N., Soreq, H., Hochner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+acetylcholinesterase+overexpression+induces+multilevelled+aberrations+in+mouse+neuromuscular+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Chronic acetylcholinesterase overexpression induces multilevelled aberrations in mouse neuromuscular physiology.</a> J Physiol. 546 (1), 165-173 (2002).</li>
<li>Kuei, J. H., Shadmehr, R., Sieck, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+contribution+of+neurotransmission+failure+to+diaphragm+fatigue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+%28Bethesda%2C+Md%3A+1985%29%22%5BJournal%5D)">Relative contribution of neurotransmission failure to diaphragm fatigue.</a> J Appl Physiol (Bethesda, Md: 1985). 68 (1), 174-180 (1990).</li>
<li>Del Prete, Z., Musarò, A., Rizzuto, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+mechanical+properties%2C+including+isotonic+fatigue%2C+of+fast+and+slow+MLC%2FmIgf-1+transgenic+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Measuring mechanical properties, including isotonic fatigue, of fast and slow MLC/mIgf-1 transgenic skeletal muscle.</a> Ann Biomed Eng. 36 (7), 1281-1290 (2008).</li>
<li>Lynch, G. S., Hinkle, R. T., Chamberlain, J. S., Brooks, S. V., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+and+power+output+of+fast+and+slow+skeletal+muscles+from+mdx+mice+6-28+months+old%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Force and power output of fast and slow skeletal muscles from mdx mice 6-28 months old.</a> J Physiol. 535 (2), 591-600 (2001).</li>
<li>Brooks, S. V., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+skeletal+muscles+from+young%2C+adult+and+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of skeletal muscles from young, adult and aged mice.</a> J Physiol. 404, 71-82 (1988).</li>
<li>Lynch, G. S., Hinkle, R. T., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+and+power+output+of+diaphragm+muscle+strips+from+mdx+and+control+mice+after+clenbuterol+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul+Disord%22%5BJournal%5D)">Force and power output of diaphragm muscle strips from mdx and control mice after clenbuterol treatment.</a> Neuromuscul Disord. 11 (2), 192-196 (2001).</li>
<li>Rizzuto, E., Pisu, S., Musar, A., Del Prete, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+Neuromuscular+Junction+Functionality+in+the+SOD1+G93A+Animal+Model+of+Amyotrophic+Lateral+Sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng+%22%5BJournal%5D)">Measuring Neuromuscular Junction Functionality in the SOD1 G93A Animal Model of Amyotrophic Lateral Sclerosis.</a> Ann Biomed Eng . 43, (2015).</li>
<li>Soliani, L. <a target="_blank" href="http://www.dsa.unipr.it/soliani/soliani.html">Manuale di statistica per la ricerca e la professione statistica univariata e bivariata parametrica e non-parametrica per le discipline ambientali e biologiche</a>. , (2004).</li>
<li>Gurney, M. E., Pu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%28New+York%2C+N.Y%29%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science (New York, N.Y). 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

El protocolo experimental descrito proporciona una manera ideal de medir y discriminar alteraciones funcionales que se han producido directamente en el músculo o indirectamente en el nivel de placa neuromuscular. Puesto que esta técnica se basa en una medición indirecta de la funcionalidad de la NMJ, no puede utilizarse para establecer si un defecto está relacionado con cambios morfológicos o a cambios bioquímicos. Por el contrario, proporciona una manera eficaz de determinar si las alteraciones morfológicas o bioquímica...

La Unión neuromuscular (NMJ) es una sinapsis química formada por la conexión entre la placa motora de la fibra muscular y el axón de la neurona motora terminal. El NMJ ha demostrado jugar un papel crucial cuando la comunicación entre el músculo y el nervio se deteriora, como ocurre en el envejecimiento o la esclerosis lateral amiotrófica (ELA). Como músculo y del nervio se comunican en forma bidireccional1,2, pudiendo medir NMJ defectos por separado de defectos músculo puede proporcionar nuevas perspectivas sobre su interrelación fisiopatológica. De hecho, esta evaluación funcional puede ayudar a evaluar si alteraciones morfológicas o bioquímicas reducen la funcionalidad de señalización de la neurotransmisión.
La comparación de la respuesta contráctil muscular provocada por estimulación del nervio y la respuesta del músculo mismo evocado por estimulación directa de su membrana se ha propuesto como una medida indirecta de la funcionalidad de la NMJ. De hecho, desde membrana estímulo por pases neurotransmisión señalización, cualquier diferencia en las dos respuestas contráctiles puede atribuirse a los cambios en el NMJ. Este enfoque ha sido ampliamente propuesto para las ratas3,4,5,6,7y también se utiliza para recopilar información sobre los modelos de ratón8,9,10,11,12.
Aquí, describimos en detalle un procedimiento para suprimir dos preparaciones de músculo-nerviosa, e. i. los preparativos sóleo-ciático y frénico-diafragma. Mediante una medida software, diseñamos un protocolo de pruebas continuado que combina la medición de varios parámetros que caracterizan la funcionalidad de NMJ y músculo, lo que rinde una evaluación comprensiva del daño NMJ por separado del músculo. En particular, el protocolo mide la fuerza de contracción, la cinética muscular, la curva de frecuencia de la fuerza directa y estímulos del nervio, la neurotransmisión falta13 para un disparo y las frecuencias tetánicas y la fatiga intratetanic7.

<table><tbody><tr><td>Sistema de palanca de modo dual&nbsp;</td><td>Aurora Científica Inc.</td><td>300B</td><td>actuador/transductor</td></tr><tr><td>Estimulador bifásico de alta potencia&nbsp;</td><td>Aurora Científica Inc.</td>Estimulador de pulso <td>701B</td><td>(nervio)</td></tr><tr><td>Estimulador bifásico de alta potencia&nbsp;</td><td>Aurora Científica Inc.</td><td>701C</td><td>estimulador de pulso (músculo)</td></tr><tr><td>Aparato muscular in vitro&nbsp;</td><td>Aurora Científica Inc.</td><td>800A</td><td></td></tr><tr><td>Baño de tejido preparatorio</td><td>Radnoti</td><td>158400</td><td></td></tr><tr><td>Electrodo de succión monopolar</td><td>A-M Systems</td><td>573000</td><td>con una referencia casera&nbsp;</td></tr><tr><td>Osciloscopio&nbsp;</td><td>Tektronix</td><td>TDS2014</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio estereoscópico</td><td>Nikon</td><td>SMZ 800</td><td></td></tr><tr><td>Iluminador de luz fría&nbsp;</td><td>Photonic Optics</td><td>PL 3000</td><td></td></tr><tr><td>Placa de adquisición</td><td>National Instruments</td><td>NI PCIe-6353</td><td></td></tr><tr><td>Bloque de conectores</td><td>National Instruments</td><td>NI 2110</td><td></td></tr><tr><td>Ordenador personal</td><td>AMD Phenom II x4 970</td><td></td><td>Procesador 3.50 Ghz con Windows 7</td></tr><tr><td>Software LabView 2012</td><td>National Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Krebs-Ringer Bicarbonato Búfer&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>K4002&nbsp;</td><td>tampón fisiológico</td></tr><tr><td>Bicarbonato de sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de calcio CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td>anhidro, polvo, &ge; 97%</td></tr><tr><td>Tampón HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td>&ge; 99.5% (titulación)</td></tr><tr><td>Platos 60mm x 15mm</td><td>Falcon</td><td>353004</td><td>Poliestireno</td></tr><tr><td>Silicona</td><td>Sylgard&nbsp;</td><td>184 Silicona&nbsp;</td><td>Kit de elastómeros&nbsp; 0.5Kg.</td></tr><tr><td>Termostato</td><td>Dennerle</td><td>DigitalDuomat 1200</td><td></td></tr><tr><td>Bomba</td><td>Newa Mini</td><td>MN 606</td><td>para acuario</td></tr><tr><td>Resistencia al calor Thermocable</td><td>Lucky Reptile</td><td>61403-1</td><td>50/60Hz 50W</td></tr><tr><td>Cubo</td><td>cualquiera 10 litros</td><td></td><td>Polipropileno</td></tr><tr><td>O2 + 5%CO2</td><td>siad</td><td></td><td>Mezcla de gas</td></tr><tr><td>#5 Pinzas&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-20</td><td>2 unidades</td></tr><tr><td>Tijeras de resorte - 8 mm Cuchillas</td><td>Fine Science Tools</td><td>15024-10</td><td>escisión de nervios</td></tr><tr><td>Tijeras afiladas&nbsp;</td><td>Herramientas de Bellas Ciencias&nbsp;</td><td>14059-11</td><td>extirpación de músculo</td></tr><tr><td>Tijeras delicadas</td><td>Wagner</td><td>02.06.32</td><td>externo del animal</td></tr><tr><td>Mango de bisturí de estudiante #3</td><td>Herramientas de ciencia fina&nbsp;</td><td>91003-12&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Hojas de bisturí # 10</td><td>Herramientas de ciencia fina&nbsp;</td><td>10010-00</td><td></td></tr><tr><td>Hojas de bisturí #11</td><td>Herramientas de ciencia fina&nbsp;</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>alambre de nylon y Oslash; 0,16 mm</td><td>cualquiera</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

medir la funcionalidad de la placa neuromuscular

Measuring Neuromuscular Junction Functionality

Funcionalidad de la placa neuromuscular (NMJ) desempeña un papel fundamental al estudiar enfermedades en que la comunicación entre neurona motora y músculo se deteriora, como el envejecimiento y esclerosis lateral amiotrófica (ELA). Aquí describimos un protocolo experimental que puede utilizarse para medir funcionalidad NMJ combinando dos tipos de estimulación eléctrica: dirigir la estimulación de la membrana muscular y la estimulación a través del nervio. La comparación de la respuesta del músculo a estos dos estímulos diferentes puede ayudar a definir, a nivel funcional, posibles alteraciones en el NMJ que conducen a deterioro funcional en el músculo.
Preparaciones dex vivo E son adecuadas para estudios bien controlados. Aquí describimos un protocolo intensivo para medir varios parámetros de funcionalidad NMJ para la preparación del nervio ciático en sóleo y para la preparación del nervio frénico-diafragma y músculo. El protocolo dura aproximadamente 60 minutos y se lleva a cabo ininterrumpidamente por medio de una medida software que mide las propiedades de la cinética de contracción, la relación de la frecuencia de la fuerza para estimulación de músculo y nervio y dos parámetros específicos a la funcionalidad de la NMJ, es decir falta de neurotransmisión y fatiga intratetanic. Esta metodología fue utilizada para detectar daños en preparaciones de nervio Músculo sóleo y el diafragma mediante el uso de ratón transgénico de SOD1G93A , un modelo experimental de esclerosis lateral amiotrófica que ubicuo overexpresses del mutante antioxidante enzima superóxido dismutasa 1 (SOD1).

El protocolo que se describe proporciona información sobre la denervación funcional en varias enfermedades neuromusculares o envejecimiento-sarcopenia. Este protocolo puede utilizarse para determinar si (y, en caso afirmativo, en qué nivel) alteraciones de la musculatura se deben a cambios selectivos que ocurren en el músculo sí mismo o en la transmisión neuromuscular. Los datos que se muestran a continuación son los resultados de un trabajo previo por nuestro grupo18</s...

Una evaluación funcional de la placa neuromuscular (NMJ) puede proporcionar información esencial sobre la comunicación entre el músculo y del nervio. Aquí se describe un protocolo para evaluar exhaustivamente el NMJ y músculo funcionalidad utilizando dos preparaciones diferentes músculo-nerviosa, es decir, sóleo-ciático y frénico-diafragma.

Medir la funcionalidad de la placa neuromuscular

Neuromuscular junction (NMJ) functionality plays a pivotal role when studying diseases in which the communication between motor neuron and muscle is ...

El objetivo general de este procedimiento es estudiar la funcionalidad de la unión neuromuscular mediante un enfoque experimental ex vivo. Esto se logra estimulando la preparación del nervio muscular de dos maneras: directamente sobre la membrana muscular y a través del nervio. Dado que la estimulación de la membrana evita la señalización de la transmisión nerviosa, cualquier diferencia entre las dos respuestas contráctiles puede considerarse una medición indirecta de la funcionalidad de la unión neuromuscular.Aquí presentamos este procedimiento en la preparación del nervio ciático del sóleo. El músculo se disecciona junto con su nervio y se coloca en un baño de tejidos perfundido. Se fija a un controlador de fuerza y longitud, y se colocan un par de electrodos de platino paralelos al músculo.Un electrodo de succión de vidrio se acerca entonces al extremo seccionado del nervio. A continuación, se aplica un protocolo exhaustivo de pruebas para evaluar minuciosamente tanto la unión neuromuscular como la funcionalidad muscular. La conexión funcional entre el músculo y el nervio es concluyente tanto para la parte como para la fracción sobreviviente dos.En la primera región del nivel de

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La unión neuromuscular de Drosophila (NMJ) se utiliza como modelo para estudiar la morfología y función de las sinapsis. Este video describe características importantes que los investigadores cuantifican para caracterizar el NMJ. El protocolo de ejemplo muestra un software capaz de realizar la cuantificación automáticamente.

Drosophila Cuantificación de la unión neuromuscular (NMJ): un método para evaluar la morfología y la función sináptica

Este video muestra una técnica in vivo para medir el potencial de acción muscular compuesto (CMAP) en ratones. Describe los pasos para colocar electrodos, estimular las neuronas de las extremidades anteriores que inervan las fibras musculares y registrar las respuestas musculares. La técnica evalúa la desmielinización neuronal y la pérdida de neuronas funcionales.

Medición de los potenciales de acción de los músculos compuestos en los músculos de las extremidades anteriores de los ratones in vivo

Este video muestra un método para evaluar las uniones neuromusculares funcionales. Utilizando un biorreactor que contiene tejido muscular y neuronas motoras, junto con microscopía fluorescente, se estimulan los canales sensibles a la luz de las neuronas para generar señales eléctricas, lo que provoca contracciones de las fibras musculares.

Evaluación de una unión neuromuscular funcional mediante estimulación óptica simultánea y grabación de vídeo

La unión neuromuscular (NMJ) está alterada en una variedad de condiciones que a veces pueden culminar en una falla sináptica. Este informe describe los métodos basados en microscopios de fluorescencia para cuantificar dichos cambios estructurales.

La unión neuromuscular: Medición Synapse Tamaño, fragmentación y los cambios en la densidad de proteína sináptica Uso confocal microscopía de fluorescencia

El protocolo descrito en este artículo utiliza el músculo levator auris longus (LAL) de ratón para grabar espontánea y nervio postsynaptic potenciales evocados (abrazadera de la corriente) y corrientes (abrazadera de tensión) en la Unión neuromuscular. Uso de esta técnica puede proporcionar ideas claves en los mecanismos de transmisión sináptica en condiciones normales y la enfermedad.

Del levator Auris Longus Preparación para examen de la transmisión Neuromuscular mamífero bajo condiciones de fijación de voltaje

La capacidad de detectar con precisión los componentes de la unión neuromuscular es crucial en la evaluación de modificaciones en su arquitectura debido a procesos patológicos o de desarrollo. Aquí presentamos una descripción completa de un método sencillo para obtener imágenes de alta calidad de uniones neuromusculares de montaje completo que se pueden utilizar para realizar mediciones cuantitativas.

Disección De Fibras Musculares Esqueléticas Individuales Para Análisis Inmunofluorescentes Y Morfométricos De Las Uniones Neuromusculares De Montaje Completo

Describimos un método para generar unidades motoras humanas en dispositivos microfluídicos disponibles comercialmente mediante el cocultivo de neuronas motoras derivadas de células madre pluripotentes inducidas por humanos con miotubos derivados de mesoangioblastos primarios humanos, lo que resulta en la formación de uniones neuromusculares funcionalmente activas.

Generación de Unidades Motoras Humanas con Uniones Neuromusculares Funcionales en Dispositivos Microfluídicos

Este protocolo describe un método para el análisis morfométrico de uniones neuromusculares mediante microscopía combinada confocal y STED que se utiliza para cuantificar cambios patológicos en modelos de ratón de SMA y CMS relacionados con ColQ.

Caracterización de uniones neuromusculares en ratones mediante microscopía combinada confocal y de superresolución

Describimos un sistema de imágenes reproducible, automatizado e imparcial para caracterizar la función de la unión neuromuscular utilizando tejido muscular esquelético diseñado por humanos y motoneuronas optogenéticas. Este sistema permite la cuantificación funcional de la conectividad neuromuscular a lo largo del tiempo y detecta la disminución de la función neuromuscular causada por las neurotoxinas y la miastenia gravis en el suero del paciente.

Ingeniería y caracterización de un modelo optogenético de la unión neuromuscular humana

El protocolo muestra un método para examinar la correlación espacial entre los terminales presinápticos, los receptores postsinápticos y las células de Schwann perisinápticas en el músculo gastrocnemio medial de la rata utilizando inmunohistoquímica fluorescente con diferentes biomarcadores, a saber, neurofilamento 200, transportador vesicular de acetilcolina, alfa-bungarotoxina y S100.

Visualización de las características morfológicas de la unión neuromuscular en el músculo gastrocnemio medial de rata

En este estudio, demostramos un protocolo refinado de electromiografía de fibra única (SFEMG) para permitir la medición in vivo de la transmisión de la unión neuromuscular (NMJ) en modelos de roedores. Se describe un enfoque paso a paso de la técnica SFEMG para permitir la cuantificación de la variabilidad y el fracaso de la transmisión de NMJ en el músculo gastrocnemio de rata.

Electromiografía de fibra única estimulada (SFEMG) para evaluar la transmisión de la unión neuromuscular en modelos de roedores

Aprende a evaluar la funcionalidad de la placa neuromuscular mediante preparaciones ex vivo de músculo-nervio en ratón. Este protocolo utiliza estimulación directa y nerviosa para medir respuestas contractiles diferenciales.

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