Un protocolo para construir un modelo de herida de rata de diabetes tipo 1

Muchos detalles del proceso de modelado de heridas de diabetes tipo 1 son propensos a errores. Es un desafío difícil para los investigadores experimentados. Como resultado, es necesario utilizar este protocolo.

De la manera más simple posible, esta técnica puede replicar eficazmente algunas características de las heridas diabéticas crónicas, como la falta de cicatrización de heridas, el retraso en la reepitelización y la reducción de la angiogénesis. La solución de estreptozotocina debe usarse inmediatamente después de la preparación. Al crear la herida, observe que el tamaño y la ubicación de la herida deben regularse.

Comience disolviendo el polvo de estreptozotocina en una cantidad adecuada de 0.1 moles por litro de tampón de citrato de sodio para lograr una concentración del 1% y agítelo durante 30 segundos usando un oscilador de drogas antes de colocarlo en una bonita caja. Para la inyección intraperitoneal de solución de estreptozotocina al 1%, agarre a la rata y exponga la piel abdominal en el lugar de la inyección. Desinfecte el lugar de la inyección dos veces con una bola de algodón empapada en alcohol al 75% y coloque la cabeza de la rata debajo del abdomen.

Inserte la aguja paralela a la línea media abdominal a 45 grados. Luego reduzca el ángulo de la aguja a 30 grados e inserte de dos a tres milímetros. Tire suavemente del tapón de la aguja, inyecte la solución de estreptozotocina y saque la aguja antes de aplicar un hisopo de algodón.

Para medir los niveles causales de glucosa en sangre a las 9:00 AM el día 3 y el día 7, busque la ubicación de la vena caudal. Desinfecte la cola de rata dos veces con alcohol al 75% antes de perforar la vena caudal para inducir el sangrado y medir la glucosa en sangre con un glucómetro. Una vez hecho esto, detenga el sangrado con un hisopo de algodón.

Afeite el área de 5 por 5 centímetros en el lado dorso de la rata con una máquina de afeitar eléctrica un día antes del modelado de la herida. Limpie el área afeitada con una bola de algodón salino normal tibia y deje que se seque para aplicar crema depilatoria durante cinco minutos. Limpie el área con una gasa y lave cualquier crema depilatoria residual con solución salina normal tibia.

Luego desinfecte la piel dorsal dos veces usando bolas de algodón empapadas en yodo y 75% de alcohol en las rondas alternativas. Después del secado, corte la piel con un punzón de biopsia circular de 20 milímetros de diámetro. Cuide la piel con fórceps y luego use tijeras quirúrgicas para eliminar todo el grosor de la piel a lo largo de las marcas de corte de punzón.

Una vez hecho esto, detenga el sangrado con una bola de algodón salino normal. Cubra la herida con una gasa de vaselina. La diabetes se indujo en todas las ratas después de tres días de inyección de estreptozotocina, con un nivel de glucosa en sangre superior a 16,7 milimoles por litro.

El nivel de glucosa se estabilizó cinco semanas después de la inducción. El peso del grupo diabético aumentó gradualmente después de la inyección de estreptozotocina. El peso disminuyó en la semana 3 y aumentó lentamente de nuevo a partir de la semana 4.

En contraste, el peso de la rata del grupo normal aumentó constantemente. Su peso medio después de los tres días de inducción de la diabetes fue mayor que el grupo diabético. El análisis macroscópico realizado en los días 7 y 14 después de la herida reveló que la reepitelización fue más pronunciada en ratas del grupo normal que en el grupo diabético.

Los resultados cuantitativos del día 7 y el día 14 revelaron que la tasa de cicatrización de heridas fue significativamente menor en el grupo diabético que en el grupo normal. Sin embargo, el día 14, la tasa de cicatrización de heridas fue superior al 90% en el grupo diabético. Las heridas diabéticas mostraron pérdida parcial de los folículos pilosos y glándulas sebáceas con menos capilares visibles.

En la angiogénesis de la herida analizada por inmunotinción CD31, la densidad óptica promedio de la expresión de CD31 mostró que la angiogénesis en el sitio de la herida fue significativamente mayor en el grupo normal que en el diabético. Al modelar la herida, asegúrese de que se elimine el grosor anterior de la piel, incluida la epidermis, la dermis y el tejido subcutáneo.