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Uso del ensayo de escisión bajo objetivos y etiquetado (CUT&Tag) en la investigación de miobl...
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Developmental Biology
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JoVE Journal Developmental Biology
Using Cleavage Under Targets and Tagmentation (CUT&Tag) Assay in Mouse Myoblast Research

Uso del ensayo de escisión bajo objetivos y etiquetado (CUT&Tag) en la investigación de mioblastos de ratón

Full Text
1,353 Views
07:09 min
March 1, 2024

DOI: 10.3791/66066-v

Yuefeng Li1,2, Xiaofen Wu1,2, Ping Hu1,2

1Guangzhou Laboratory, 2The Key Laboratory of Biological Targeting Diagnosis, Therapy and Rehabilitation of Guangdong Higher Education Institutes,The Fifth Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Los investigadores nuevos en el campo de la epigenética encontrarán en CUT&Tag una alternativa significativamente más fácil que los ensayos ChIP. CUT&Tag ha beneficiado enormemente a los estudios epigenéticos en poblaciones de células raras y primarias, generando datos de alta calidad a partir de muy pocas células. Este protocolo describe la realización de ensayos H3K4me1 CUT&Tag en mioblastos de ratón aislados de músculos de las extremidades posteriores de ratón.

La investigación de nuestro grupo se centra en cómo se regula y mantiene la estructura del genoma y la transcripción en las células madre adultas del músculo esquelético, particularmente durante los cambios de sulfato, como el compromiso, la diferenciación y la tinasis de las células madre. Las células madre del músculo esquelético adulto, que comprenden solo el 1% de las células mononucleadas en el tejido muscular, presentan un desafío para los estudios de características de la cromatina que utilizan High-C, ChIPs y ATAC seq, debido a su escasez en suspensiones unicelulares obtenidas de la digestión muscular. La inmunoprecipitación de cromatina, ChIP, ha sido una herramienta clave para perfilar las características del genoma.

Una técnica de corte y etiquetado más simple y eficiente, desarrollada por el Dr. Steven Henikoff, a menudo supera a ChIP, especialmente en el estudio de la epigenética en poblaciones de células raras. Su facilidad de uso amplía la accesibilidad para los investigadores, incluidos los no expertos en epigenética.

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Palabras clave: CUT&Tag Escisión bajo objetivos y etiquetado Mioblastos de ratón Células madre musculares Factores de unión a la cromatina Marcas de histonas Variantes de histonas ChIP Inmunoprecipitación de cromatina ChIP reticulante ChIP nativo Nucleasa microcócica Secuenciación Localizaciones genómicas

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