Abstract
פגמי קטר הנובעים מהפרעות ניווניות יכולים להיות סימפטום מאוחר של מחלה, לאחר שנים של ניוון תת-קליני, ואסטרטגיות טיפול טיפוליות וכך הנוכחיות אינן מרפאים. באמצעות השימוש ברצף exome כל, מספר גדל והולך של גנים זוהה לשחק תפקיד בתנועה אנושית. למרות זיהוי גנים אלה, זה לא ידוע כמה גנים אלה הם חיוניים לתפקוד נורמלי קטר. לכן, assay אמין, אשר מנצל אורגניזמים מודל על מנת להבהיר את תפקידם של גנים אלה כדי לזהות מטרות רומן של עניין טיפולי, יש צורך יותר מתמיד. יש לנו תוכנן גרסה רגיש של assay geotaxis השלילית המאפשר לגילוי פגמים קלים יותר מוקדם ויש לו היכולת להעריך ליקויים אלה לאורך זמן. Assay מבוצע בכוס סיים גליל, אשר חתום עם סרט מכשול שעווה. על ידי הגדלת מרחק הסף להיות טיפס ל -17.5 גמ 'ולהגדיל את משך הניסוי 2 דקות שראינו רגישות רבה יותר באיתור בעיות בתפקוד ניידות קלה. Assay הוא עלות אפקטיבי ואינו דורש הכשרה מקיפה כדי להשיג תוצאות מאוד לשחזור. זה עושה את זה טכניקה מעולה לסינון תרופות מועמד במוטציות תסיסנית עם מומי תנועה.
Introduction
הפרעות ניווניות הרסניות כגון מחלת פרקינסון, טרשת לרוחב amyotrophic, וparaplegia ספסטי התורשתי מוכרות יותר ויותר. למרבה הצער, רוב ההפרעות ניווניות אלה עדיין ללא טיפולים. השימוש הקליני הנרחב ב, בדיקות גנטיות משוחדת הגנום כגון רצף exome כל הוביל למספר גדל והולך של גנים שמעורבים בהפרעות קטר אנושיות. למרות התקדמות זו, ההתקדמות פתולוגיים ממוקדם לשלבים מאוחרים, נותרת חמקמקה בהפרעות אלה. תסיסנית מספקת אחד עם הכלים הגנטיים ללימוד דרישת גן באופן מרחב ובזמן בשליטה. בנוסף, תסיסנית הוכיחה שימושית בסינון תרופות לתנאי נוירולוגיות כמו פרקינסון 1, אלצהיימר 2, נכות אינטלקטואליות 3,4 ואפילפסיה 5,6 בין יתר. המטרה שלנו הייתה לפתח חסכוניוassay אמין שיאפשר ניתוח תפוקה גבוה שעדיין יהיה רגיש מספיק כדי לזהות שינויים קטנים בביצועי מנוע.
ישנם מספר מבחני המשמשים לכמת את ההשפעות של מוטציה גנטית ו / או תנאי סביבה על תסיסנית טיפוס התנהגות. רוב מבחני לנצל את הנטייה הטבעית של זבובים לטפס, הידוע בשם geotaxis השלילית, או assay הטיפוס. 7 Benzer הציע בשנת 1967 כי המנגנון נגד זרם המשמש למחקר של Phototaxis יכול לשמש גם כדי ללמוד gravitaxis. מאז, Ganetsky 8 ועוד רבים אחרים 9 -12 שנבנו על assay הראשוני. העיקרון הוא למקם מספר ידוע של זבובים בבקבוקון ולהקיש על הבקבוקון בחריפות נגד משטח קשה, גורם לזבובים ליפול לתחתית של הבקבוקון. כפי שהוא התנהגות מולדת, הזבובים ינסו לטפס לחלק העליון של הבקבוקון, בניגוד לכוח המשיכה. assay זה הוא כמותי וmeasuמיל כמה זבובים טיפס עבר סמן על הבקבוקון במהלך תקופת זמן מוקצב. מדידה של מהירות במקום מספר הכולל של טיפוס זבובים הפכה פרמטר אמין ולראות פגמים במקרים בהם מספר קריטריוני זבובים לא היה משמעותי 13.
Assay הטיפוס הוכיח שימושי בחקר הפרעות ניווניות רבות, כולל מחלת פרקינסון 14. עם זאת, ציינו כי ליקויי קטר לא יכולים להיות לזיהוי בזמן שבו ניוון של מערכת עצבים נראים כבר במחקרים פתולוגיים 14. לפיכך, שימוש של assay המסורתי עלול להגביל את היכולת ללמוד המוקדמים של היווצרות מחלה בשלבים. המראה של פגמי קטר בשלבים מאוחר יותר של פתולוגיה עשוי לשקף מחלה ההתקדמות שלו הוא מתקדם מדי להצלה שלמה.
זה מעלה בעיה פוטנציאלית עם הרגישות של assay הטיפוס המסורתי. חוסר היכולת הפוטנציאלית של tradiניתן לייחס tional טיפוס assay כדי לזהות פגמי קטר קלים עד הגובה שאליו הזבובים נדרשים לטפס. Assay 15,16 האמצעים המסורתיים מספר הזבובים לטפס בהצלחה מעל לגובה של 2 עד 5 סנטימטר ב 10 עד 20 שניות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
מחקר על תסיסנית melanogaster היה בעמידה באוניברסיטת הנחיות המחקר של אלברטה.
1. טוס אוסף
- לאסוף 20 זבובים באמצעות CO 2 הרדמה (ז) ומקום בבקבוקון אוסף 25 מ"מ x 95 מ"מ המכיל מזון.
- בקבוקונים המכילים חנות זבובים אופקית כדי למנוע השמנה זבובים בכל נוזלים שעלולות להצטבר בתחתית הבקבוקון.
- דגירה זבובים לפחות 21 שעות על 22 מעלות צלזיוס בלחות של 45% בחממה לכ 15 שעות. הגדר את החממה עם אור שעות 12: מחזור כהה.
Assay 2. טיפוס
- למחרת בבוקר, להעביר 20 זבובים מבקבוקון אחד לכוס 250 מיליליטר סיים גליל. לסמן את המיקום של הגליל כדי לשמור אותו קבוע כל יום. השתמש גליל זכוכית אחד לכל גנוטיפ על מנת למנוע זיהום צולב בין גנוטיפים. לשטוף בסוף כל ניסוי וroטייט בין גנוטיפים.
- לנהל הניסויים באור הסביבה (או אור אדום אם יש פגם פוטנציאלי בחזון) בטמפרטורה ובלחות של 22 מעלות צלזיוס ו -40% בהתאמה. כדי להימנע מלבלבל קצב היממה, תמיד לבצע ניסויים באותו הזמן של יום.
- לאטום את החלק העליון של גליל עם סרט מכשול (סרט שעווה) כדי למנוע את בריחתו של זבובים (איור 2).
- הגדר את מצלמת וידאו על חצובה. מצלמה מתמקד בקו 190 מיליליטר של 250 מיליליטר סיימה גליל (17.5 סנטימטרים).
- לספור את מספר הזבובים מתים בתחתית של הגליל ובבקבוקוני המזון. רשום את המספר הזה כתמותה.
- מאוד קל להקיש על הגליל נגד משטח קצף תא סגור שוב ושוב עם מספיק כוח כדי לעקור את הזבובים למשטח התחתון הפנימי. הקש 5 - 10 פעמים, תוך שימוש ביד השנייה כדי ללחוץ שיא במצלמה.
- לחץ על הכפתור "קלט" את המצלמה.
- התחל vidאיו הקלטה ומצלמה ברז הגליל שש פעמים בתבנית שאינה קצבית מובהקת.
- לנהל כל ניסוי למשך 2 דקות מרגע שזבובי טפח אחרון ולרשום את המספר של זבובים שחצו את הגובה של 17.5 סנטימטר (190 מיליליטר) בכל נקודת זמן שנבחרה (לכמת כל 10 שניות). הערה: מיליליטר סימון על הגליל ישתנה ממודל צילינדר אחד למשנהו בהתאם לקוטר. כדי להימנע משגיאה, למדוד את הגובה על כל גליל בשימוש.
- ברגע שהמשפט הסתיים, להיפטר מהזבובים באתנול 95%.
- חזור על שלבים 2.1-2.9 עד שכל משכפל נבדקו עם זבובים טריים בכל פעם.
הערה: למרות 5 משכפל עשוי להיות מספיק עם מוטציה שיש השפעה חזקה על תנועה, 10 חזרות ביולוגיות של 20 זבובים (200 זבובים) מומלץ לזהות הבדלים קטנים יותר. - עם השלמת הניסוי, לשטוף את הגלילים במדיח הכלים במעבדה וO היבש / N לשימוש חוזר.
3. ניתוח
- Analyקטעי וידאו של כל ze לטוס משפט. כל 10 שניות, לרשום את המספר הכולל של זבובים שעוברים את קו היעד.
- אם זבוב מטפס בחזרה למטה או נופל שיא שעפים כ-1 ו, לספור את הזבוב הבא לחצות את קו היעד אותו המספר כמו הזבוב שטיפס בחזרה למטה או נפל. לדוגמא, אם זבוב ה -15 נופל מתחת לקו המטרה, הזבוב הבא לחצות את הקו (ה -16 לטוס) נחשב זבוב ה -15 ולא ה -16.
- להפחית את התמותה מהמספר הכולל של זבובים (20) כדי להשיג את מספר הזבובים שנותרו במשפט. בכל נקודת זמן, לקבל את החלק היחסי של זבובים מעל קו היעד.
- עלילה כל אחוז בכל נקודת זמן (ראה איור 3).
- לנתח את הביצועים בנקודת נתונים 120 שניות ולבצע מבחן t תלמיד כאשר 2 קבוצות נמצאות או ANOVA ופוסט-מבחן להשוואות מרובות (עם שינוי Bonferroni למתוכנן וTukey לשיתוף בלתי מתוכנןmparisons). קולמוגורוב-סמירנוב בדיקות 17 גם מתבצע על מנת לוודא תקינות ושונות שווה אלא גם להשוות את ההפצות של קבוצת המוטציה לשליטה.
- על מנת להציג את הנתונים על הזדקנות, עלילה אחוז של זבובים לטפס ב 120 שניות עם זבובים בגילים שונים (2 ימים, שבוע 1, 2 שבועות) כדי לראות אם יש גירעון מתקדם (איור 4).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
טיפוס הוא התנהגות חזקה ושחזור. ואכן, זבובים בר-סוג ישנים יום אחד להגיע לביצועי מרחק יעד הטיפוס במהירות (25 - 30 שניות). זבובים מוטנטים להציג מגוון של ביצועים בין מתון (או מאוחר) כדי להשלים חוסר יכולת לטפס ליעד. אנו להמחיש זאת כאן עם שני אללים מוטציה שונים. הראשון הוא אלל חמור של spastin הגן שנגרם על ידי מחיקה של גן spastin (ספא 5.75) 18 מלאה. בקו הזה (ספא 5.75 עם TM6b) יום אחד זבובים ישנים לא להגיע לביצועי טיפוס WT גם לאחר 2 דקות. קו מוטציה זה מציג עם מומים חמורים גם בעת שימוש בשיטת הבקבוקון (איור 1 א ', ב'). יתרונה של השיטה שהוצגה כאן הופך ברור יותר כאשר לומדים מוטציה באותו הגן, אבל עם מחיקה חלקית שפורסמה על ידי אותה הקבוצה (ספא 17-7 עם TM3) 18. במקרה שביצועים של עד 8 ימים הוא נורמלי (איור 1 ג-ו ' טרונג>). בשעת 8 ימים, זבובים אלה להציג פגם בטיפוס ציין להיות קל אך משמעותי בשיטת הגליל אבל לא בשיטת הבקבוקון לאותו מספר החזרות. זה עשוי להציע שבאמצעות מרחק יעד גדול יותר מאפשר לגילוי פגמים במוטציות פחות חמורות. בחירה של בקרות גנטיים מתאימות מבטיחה כי ההשפעה היא תוצאה של ביטוי המהונדס (איור 3) או אינטראקציה גנטית. להוכחה נוספת, כולל הצלה של פנוטיפ התנהגותי עם הביטוי של חלבון פרא-סוג של הגן למד. ללימודי אינטראקציה, להשוות זבובים שהטרוזיגוטיים לשני המוטציות של עניין עם זבובים שיש מוטציה אחת של עניין בלבד. Assay גם מאפשר לעקוב אחר ההתקדמות של פגם הטיפוס לאורך זמן, היבט חשוב בדוגמנות בהפרעות של תנועה מתקדמות (איור 4). בנוסף, 2 דקות לאפשר לראות את ההתקדמות של טיפוס במוטציות חמורות יותר.
התחת = "jove_content" FO: לשמור-together.within עמודים = "תמיד"> 
איור 1. השוואה של מבחני טיפוס שונים. למוטציות חמורות דרגות שונות של פגם טיפוס שניתן לראות בשיטות שונות אך מוטציות מתונות יותר עשוי שלא להיות מזוהה עם כמה מבחני. כדי להמחיש זאת היינו שני קווים שפורסמו מוטציה לspastin הגן:. 5-75 spastin המכיל מחיקה מלאה של גן spastin וspastin 17-7 המכיל מחיקה חלקית של גן spastin () ראשית, טיפוס הנישום על ידי בעל זבובים לטפס לחלק העליון של בקבוקון מזון ריק. מספר הזבובים בראש לאחר 18 שניות נרשם. שימוש בפרוטוקול זה פגם משמעותי נראה בSpast 5-75 / TM6b בהשוואה לקבוצת ביקורת wild-type (N = 10, p <0.001). (ב) בשלב הבא, טיפוס ביצועים נבחנים באמצעות השיטה שתוארה כאן. טיפוס הוא גם היית efective בגנוטיפ זהה Spast 5-75 / TM6b. ההבדל בביצועים הוא משמעותי ביותר (N = 5, p <0.001), אך הפער בביצועים הוא גדול יותר. למוטציות הראו את מחשבה השפעה פחותה (למשל, Spast 17-7 מכיל מחיקה חלקית של גן spastin), שיטת הצילינדר מוצגת כאן עשויה להיות רגישה יותר. (ג) אין פגם משמעותי הוא ציין עם 3 ימים ישנים spast 17-7 / TM3 עם שיטת הבקבוקון (N = 5). (ד) אין פגם משמעותי הוא ציין עם spast 17-7 / TM3 בן 3 ימים עם שיטת הצילינדר (N = 5). (ה) מגמה שאינה סטטיסטית יצוין עם spast 17-7 / TM3 בן 8 ימי זבובים (N = 5). (ו) אבל משמעות היא שנצפתה ל17-7 / נבדק עם שיטת הגליל הציגה לאותו המספר של משכפל (N TM3 spast בן 8 ימים = 5, p <0.001).r קבל = "_ blank"> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 2. ייצוג סכמטי של הניסוי להגדיר. 20 זבובים מוכנסים בגליל זכוכית ולאחר מכן כתרים עם סרט מכשול שעווה. אז הזבובים טפחו לתחתית ואת מספר זבובי חציית קו האמצע נרשם באמצעות מצלמה במשך 120 שניות. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 3. נציגי תוצאות של ניסוי הטיפוס. אחוז של זבובים שעברו את קו הסף מיוצג כל 10 שניות על duratiעל של assay. בניסוי זה, 3 פקדים גנטיים מתאימים (Wild-סוג, ספא כטב"מ -RNAi / +, Elav-GAL4 / +) בהשוואה לזבובים מהונדסים המכילים את שני מרכיבי Gal4 (ספא Elav-GAL4 / כטב"מ -RNAi) כטב"מ ו. כטב"מ הספא-RNAi הוא מVDRC # 108,739. ייצוג זה מאפשר ההערכה של שיעור טיפוס לכל גנוטיפ. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 4. גרף נציג לפרופיל ההזדקנות. מאחר שרבי הפרעות קטר הן פרוגרסיבי, חשוב להציג את ההתפתחות לאורך זמן. בגרף זה, זבובי WT הם בהשוואה למוטציות הטרוזיגוטיים (ספא / WT) ומוטציות טרנס הטרוזיגוטיים (spast5-75 / spast17-7) בשעה 2 ימים (א ') ו- 8 ימים (ב')(N = 10, p <0.001). תוצאות מתוארות גם לאורך זמן לשניות 120. נקודת זמן (C). אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
תסיסנית כבר הוכיחה להיות מודל מצוין ב1,2 המחלה 14 ותנאים ניווניות אחרים של פרקינסון. בנוסף לכלים הגנטיים הזמינים בדרוזופילה, הגנום שלו הוא שמור ביותר לגנים מעורבים בהפרעות נוירולוגיות 19. כניסתו של שיטות הגנום רחבות סינון גנטי (כוללים רצף exome שלם) עשויה להמשיך ולספק רשימה גדולה יותר של גנים הקשורים להפרעות מועמד תנועה אנושיות. פיתוח טיפולים לתנאים אלה יחייב מודלים של בעלי חיים כדי להגדיל את ההבנה של פתולוגיה מעורבת בשלבים המוקדמים של ניוון מוחיים השלבים שלנו. השימוש בדרוזופילה וassay geotaxis השלילי מספקת שיטה זולה ואמינה לזיהוי גנים המעורבים בפגמי קטר ולאחר מכן מסך תרופות מועמד להצלת פנוטיפ. זה מוסיף למולקולרי, אלקטרו, ולא הוכחות הדמיהניתן להשיג את הכובע באותו מודל החיה. באמצעות assay הטיפוס, אחרים לשכפל הצלחת פגמים מוטוריים במוטצית זבובים לגנים שיבוש תנועה אנושית. עם זאת, מחקרים קודמים הראו כי שינויים פתולוגיים יכולים להקדים את גילוי פגמים קטר בכמה ימים 14. תופעה זו נצפתה גם בתנאים אנושיים ניווניות שבו אנחנו מדברים על שינויים תת-קליניים. אנו מאמינים כי על ידי הבנה ולאחר מכן טיפול בשינויים תת-הקליניים אלה, שינוי המחלה יהיה השתפר מאוד.
אנו מציגים כאן מודל המאפשר זיהוי של פגמי תנועה קלים שעשויים לסייע בהבנת את המעבר מ" presymptomatic לסימפטומטי "של פתולוגיה ניווניות באמצעות מודל דרוזופילה. קבוצות רבות השתמשו במרחק טיפוס קצר (5-10 סנטימטר) אבל, הגדלנו את מרחק 17.5 סנטימטר כמו בet al Palladino. 20. למרות הבדל זהבין הגבהים טיפוס אולי נראים קלים, העלייה בגובה נועדה להגביר את קושי assay, ובכך מסייע בזיהוי פגמי טיפוס יחסית קלים. כמו כן, כמה שיטות בחרו להאיר את החלק העליון של הגליל עם מנורת סיבים אופטיים, כדי לנצל את תגובת phototaxic של מבוגר תסיסנית. עם זאת, מקור האור יכול לגרום להשתקפות אור בגליל; כך, מקור אור מפוזר מעל הניאון משמש במקום. בנוסף, מוטציה בגנים המעורבים בתהליכי ניוון מוחיים עשויה להשפיע על תפקוד העין ולכן להטות את התוצאות. הגידול בגודל המדגם 10-20 זבובים מגדיל את הכח הסטטיסטי של כל ניסוי. בתחילה, הגדלנו את המספר הזה גבוה ככל 30 זבובים, אבל זה הופחת לאחר מכן על מנת למזער את השפעות צפיפות ואינטראקציה בין זבובים. הדגימות מבוטלים לאחר שימוש אחד, ולא מתנהל במשך ארבעה חוזרים ניסויים לדגימה, כדי לחסל את possibility של למידה או עייפות. בשל זבובים עם ביצועי טיפוס ירודים ביותר, זה היה מועיל כדי להקליט את הזמן הנדרש עבור 50% מהזבובים לחצות את קו היעד לזה יכול לקחת כמות ניכרת של זמן לזה קריטריונים להתממש. במקום זאת, זבובים ניתנו משך 2 דקות לחצות את קו היעד. מספר הזבובים לחצות את הקו נרשם וזרק לפח במרווחים של 10s, וכתוצאה מכך הערך מבוטא באחוזים.
תנאים אלה יוצרים הם הערכה רגישה יותר של יכולות הטיפוס של זבוב בוגר. בעוד עיצובים אחרים של assay עדיין שימושיים, פרדיגמה זו עשויה להיחשב במקרים בהם פגמים מוקדם עדינים נחקרים. בנוסף, assay זה עשוי לעזור לזהות שינויים קטנים יותר בהקשר של ניסויים בסמים.
נושא חשוב הוא שהתנהגות geotaxis השלילית מבוססת על הזבובים שטפחו לתחתית של הגליל. זה Therefבצר חשוב להעריך צורות אחרות של תנועה, כגון על משטח שטוח או טיסה. היבטים אחרים כגון מוטיבציה ואינטראקציה חברתית צריכים להיחשב כלבלבל פוטנציאלי. אזהרה נוספת היא כי assay הציג מאפשר רק אחד להעריך תנועה בזבובים בוגרים. זה מגביל את היכולת להשיג קושרת נוירו להתנהגות שנצפתה שהוא מאוד חשוב בהבנת הפתוגנזה של מחלה. ואכן, רוב עבודת הדמייה שנעשה בצומת העצבית-שרירית הזחל עד כה בדרוזופילה. קבלת תנועת התנהגות בזחל עשויה להיות צעד חשוב כדי למשוך קשר ישיר בין התנהגות ושינויים פתולוגיים.
זה מאוד חשוב לשלוט על הטמפרטורה ולחות שבזבובים גדלים ונבדקו. בנוסף להשפעה על התפתחות זבוב, גורמים אלה היו השפעה חשובה על יכולת הטיפוס של זבובים גדלו ומאוחסנים בתנאים שאינם תנאים אידיאליים. בעמ 'resence של חשמל סטטי מוגבר או לחות, זבובים לא לבצע בצורה אופטימלית. השפעה זו לא הייתה שווה לכל גנוטיפים, המוטציה הזבובים בדרך כלל להיות יותר מושפעת מגורמים כגון מאשר קבוצת ביקורת. בנוסף, צילינדרים צריכים לשטוף ולייבש היטב בין כל ניסוי.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Drosophila stocks | The stocks are selected depending on the experiments. The temperature and humidity in the room and in the incubator must be controled and consistent to avoid flies being too staticky or too wet. | ||
| Video camera | Any digital camcorder will do. Make sure they can focus on close object. | ||
| Graduated cylinder | Kimble | 20028W | Different models of graduated cylinder may have different diameter. It is therefore imporant to measure the height. |
| Computer | Any model will do. We used the computer to monitor the climbing of the flies and record the number of flies at each time point. |
References
- Auluck, P. K., Bonini, N. M. Pharmacological prevention of Parkinson disease in Drosophila. Nature medicine. 8, 1185-1186 (2002).
- Bonini, N. M., Fortini, M. E. Human neurodegenerative disease modeling using Drosophila. Annual review of neuroscience. 26, 627-656 (2003).
- Bolduc, F. V., Bell, K., Cox, H., Broadie, K. S., Tully, T. Excess protein synthesis in Drosophila fragile X mutants impairs long-term memory. Nature neuroscience. 11, 1143-1145 (2008).
- McBride, S. M., et al. Pharmacological rescue of synaptic plasticity, courtship behavior, and mushroom body defects in a Drosophila model of fragile X syndrome. Neuron. 45, 753-764 (2005).
- Parker, L., Padilla, M., Du, Y., Dong, K., Tanouye, M. A. Drosophila as a model for epilepsy: bss is a gain-of-function mutation in the para sodium channel gene that leads to seizures. Genetics. 187, 523-534 (2011).
- Marley, R., Baines, R. A. Increased persistent Na+ current contributes to seizure in the slamdance bang-sensitive Drosophila mutant. Journal of neurophysiology. 106, 18-29 (2011).
- Benzer, S. Behavioral Mutants Of Drosophila Isolated By Countercurrent Distribution. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 58, 1112-1119 (1967).
- Ganetzky, B., Flanagan, J. R. On the relationship between senescence and age-related changes in two wild-type strains of Drosophila melanogaster. Experimental gerontology. 13, 189-196 (1978).
- Nichols, C. D., Becnel, J., Pandey, U. B. Methods to assay Drosophila behavior. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2012).
- Toma, D. P., White, K. P., Hirsch, J., Greenspan, R. J. Identification of genes involved in Drosophila melanogaster geotaxis, a complex behavioral trait. Nature genetics. 31, 349-353 (2002).
- Inagaki, H. K., Kamikouchi, A., Ito, K. Methods for quantifying simple gravity sensing in Drosophila melanogaster. Nature protocols. 5, 20-25 (2010).
- Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila. Experimental gerontology. 40, 386-395 (2005).
- Botella, J. A., et al. The Drosophila carbonyl reductase sniffer prevents oxidative stress-induced neurodegeneration. Current biology : CB. 14, 782-786 (2004).
- Feany, M. B., Bender, W. W. A Drosophila model of Parkinson's disease. Nature. 404, 394-398 (2000).
- Chakraborty, R., et al. Characterization of a Drosophila Alzheimer's disease model: pharmacological rescue of cognitive defects. PLoS One. 6, e20799 (2011).
- Orso, G., et al. Disease-related phenotypes in a Drosophila model of hereditary spastic paraplegia are ameliorated by treatment with vinblastine. J Clin Invest. 115, 3026-3034 (2005).
- Lehmann, E. L., D'Abrera, H. J. M. Nonparametrics : statistical methods based on ranks. , 1st edn, Springer. (2006).
- Sherwood, N. T., Sun, Q., Xue, M., Zhang, B., Zinn, K. Drosophila spastin regulates synaptic microtubule networks and is required for normal motor function. PLoS biology. 2, e429 (2004).
- Inlow, J. K., Restifo, L. L. Molecular and comparative genetics of mental retardation. Genetics. 166, 835-881 (2004).
- Palladino, M. J., Hadley, T. J., Ganetzky, B. Temperature-sensitive paralytic mutants are enriched for those causing neurodegeneration in Drosophila. Genetics. 161, 1197-1208 (2002).
