Summary
De interrenal klier in de zebravis is de teleostean tegenhanger van de zoogdieren bijnier. Dit protocol wordt beschreven hoe de 3-β-hydroxysteroïdedehydrogenase (Δ 5-4 isomerase, 3β-Hsd) verricht enzymatische activiteit test, die gedifferentieerde steroïdogene cellen in zebravisembryo detecteert.
Introduction
De bijnier, een cruciaal onderdeel van de hypothalamus-hypofyse-bijnier as, scheidt steroïden en coördineert steroïde homeostase en de lichamelijke reactie op stress. De bijnier omvat de buitenste cortex, die steroïden scheidt in een zone-specifieke wijze en binnenste medulla, die catecholamines synthetiseert. De interrenal klier in teleosten is de tegenhanger van de bijnier bij zoogdieren en is samengesteld uit steroidogenic interrenal en chromaffiene cellen, die functionele equivalenten van de bijnierschors en merg, respectievelijk 1-3 zijn. Studies uitgevoerd met het zebravismodel hebben gemeld dat zowel steroidogenic en chromaffine cellijnen gevormd door moleculaire en cellulaire mechanismen die sterk lijken op die bij zoogdieren 1,2. Daarom is de zebravis is een potentieel krachtig model voor het bestuderen van genetische aandoeningen, neuro-endocriene controle en systeembiologie van de hypothalamus-hypofyse-bijnier (interrenal) as.
4,5. 3β-Hsd is essentieel voor de biosynthese van alle klassen van hormonale steroïden, namelijk progesteron, glucocorticoïden, mineralocorticoïden, androgenen en oestrogenen. De twee menselijke 3β-Hsd isozymen HSD3B1 en HSD3B2 zijn differentieel tot expressie 6. HSD3B1 wordt uitgedrukt in de placenta en perifere weefsels, terwijl HSD3B2 uitgedrukt in de bijnierschors en de geslachtsklieren. Human HSD3B1 en HSD3B2 zijn co-orthologen van zebravis hsd3b1, die wordt uitgedrukt in het interrenal weefsel en volwassen geslachtsklieren; zebravis hsd3b2 is een voor het moederdier uitgedrukt gen waarvan de transcripten verdwijnen voordat organogenese 7. Het protocol van de hele-mount 3β-Hsd enzymatische activiteit test voor zebravis ontwikkeld door aanpassing Levy methode, eens beschreven door Milano et al. Op vriescoupes acht teleost species 8. Door het weefsel permeabiliteit en optische transparantie van het zebravisembryo, whole-mount 3β-Hsd histochemie succes kan worden gebruikt voor de vaste zebravis embryo's en larven en specifiek toespitsen op het gedifferentieerde interrenal weefsels.
Deze gevoelige en snelle test is toegepast op verschillende mutanten en morphants tonen verschillende interrenal dysmorfogenese. De interrenal 3β-Hsd activiteit afwezig is in het embryo, waar specificatie van de interrenal weefsel wordt verstoord door een specifieke knockdown van de Ff1b transcriptiefactor en daalt als de interrenal differentiatie wordt beïnvloed door een knockdown van de Ff1b coregulator Prox-1 9,10. Met name kan de 3β-Hsd-activiteit worden gedetecteerd in mutanten met ernstige vroeg gebreken zoals eenogige pinhead en turen, waarbij de 3β-Hsd histochemie schetst hoe de interrenal celmigratie wordt aangetast 11. De differentiatie van de interrenal weefsel wordt niet aangetast, zelfs in de volledige afwezigheid van bloed en vaatstelsel. Daarom, hoe-endotheel afgeleide signalen geven vorm aan de ontwikkeling van interrenal orgaan kan worden bepaald 12,13. Kortom, deze histochemische assay is met succes gebruikt voor het bestuderen van de specificatie, differentiatie en migratie van steroidogenic cellen in de zebravis model. Daarom moet een efficiënt en betrouwbaar middel voor genetische of chemische screens gericht bijnieren interrenal orgaan stoornissen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Ethiek Verklaring: Alle experimentele procedures op zebravis werden door de Institutional Animal Care en gebruik Comite van Tunghai University goedgekeurd (IRB Goedkeuring NO 101-12.) En in overeenstemming met de goedgekeurde richtlijnen uitgevoerd.
1. Voorraadoplossingen voor 3β-Hsd Enzymatische Activiteit Kleuring
- Bereid trans-dehydroandrosterone [10 mg / ml in dimethylsulfoxide (DMSO)].
- Bereid β-nicotinamide adenine dinucleotide hydraat (1,2 mg / ml in 0,1 M fosfaatbuffer, pH 7,2).
- Bereid nicotinamide (vitamine B3, 50 mg / ml in H 2 O).
- Bereid 4-nitro blue tetrazolium (50 mg / ml in 70% dimethylformamide).
- Aliquot al deze componenten in microcentrifugebuizen en bewaar bij -20 ° C.
LET OP: In onze ervaring, herhaalde invriezen en ontdooien van de monsters van alle bovengenoemde oplossingen niet van invloed op de intensiteit van de 3β-Hsd activiteit kleuring.
2. whole-mount 3β-Hsd Activity kleuring
OPMERKING: De 3β-Hsd enzymatische activiteit detecteerbaar in zebravisembryo al 28 uur na de bevruchting (HPF) wanneer gekweekt bij 28,5 ° C, wat overeenkomt met het begin van mRNA expressie van hsd3b1 2,7. Het gehele mount 3β-Hsd activiteit kleuringsprotocol in deze studie is gebaseerd op een eerder beschreven werkwijze en 8 werd bepaald tot 7 dagen na de bevruchting 9 succesvol in de zebravisembryo zijn. Voor het analyseren van de vasculaire micromilieu van de interrenal steroidogene weefsel geheel gemonteerde 3β-Hsd activiteit kleuring moet worden toegepast om transgene lijnen tot expressie endotheel-specifieke fluorescentie, zoals Tg (kdrl: EGFP) s843 14 en Tg (kdrl: mCherry) CI5 15 . Om de interrenal steroidogenic weefsel overweegt ontwikkeling van de zebravis nier te analyseren, kan 3β-Hsd activiteit kleuring toepas zijned aan de Tg (wt1b: GFP) LI1 vis 16, waarbij de vorming van de glomerulus en pronephric buisjes wordt afgebakend.
- Behandel het zebravisembryo door ze te incuberen in 0,03% fenylthioureum in ei water (0,06 mg / l rif zout in gedeïoniseerd water), uitgaande van een fase tussen 12 en 24 HPF, pigment te remmen.
- Fix dechorionated embryo's of larven in (A) 4% paraformaldehyde (PFA) in fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) aangevuld met 0,1% Tween 20 (PFAT) gedurende 1 uur bij kamertemperatuur (KT) of (B) 2% PFAT overnacht bij 4 ° C of gedurende 2 uur bij 4 ° C, gevolgd door 4 uur bij KT.
Let op: PFA is giftig bij inademing en bij contact met de huid. Het is vernietigend voor de huid, slijmvliezen, de ogen, en de bovenste luchtwegen. - Was de embryo 4x gedurende 10 min met PBS aangevuld met 0,1% Tween 20 (PBST) bij kamertemperatuur.
LET OP: Het is cruciaal om niet de monsters te drogen tijdens het verwisselen van de wasoplossingen. - Vers de voorbereiding van de staining oplossing voor de reacties (tabel 1). Bereid, draaikolk, en centrifuge onderdelen A en B in aparte buizen.
LET OP: Het toevoegen van alle onderdelen rechtstreeks in één enkele buis zou ernstige neerslag veroorzaken. - Voeg de volledige oplossing van deel A om de volledige oplossing van deel B, goed mengen met de kleuring te bereiden, en meteen distribueren 1 ml in elk microfugebuis met vaste en gewassen embryo's.
- Wikkel microfuge buizen met aluminiumfolie om ze te beschermen tegen licht en leg ze op ofwel een rotator of een schommelende platform voor zacht schudden bij kamertemperatuur.
- Empirisch de reactietijd door het monitoren van chromogene signalen via microscopie bepalen. Lichte neerslag zal ontwikkelen in de tijd; echter zullen ze niet interfereren met de reactiewerkwijze.
OPMERKING: Bij embryo's bij 28 HPF, kleuring voor 4 uur gefixeerd bij 25 ° C levert een duidelijk signaal aan de interrenal weefsel. - Stop de reactie door het wassen 4x gedurende 10 min in PBST. ikf aanvulling immunohistochemische analyse (IHC) vereist post-fix de gekleurde embryo's met 4% PFAT gedurende 60 minuten bij kamertemperatuur. Anders, bewaar het embryo gewassen bij 4 ° C tot verder gebruik.
- Voor de hele-mount microscopie, schakelt de gekleurde, post-gefixeerd en gewassen embryo's met 50% glycerol in PBS, oriënteren ze met de dorsale zijde naar boven op een dia, en observeer het gebruik van een rechtopstaande microscoop onder helderveld verlichting.
LET OP: Om een hoge-resolutie afbeelding van de interrenal weefsel morfologie, een flatscreen-mount analyse van de 3β-Hsd activiteit gekleurd en deyolked embryo wordt aanbevolen. Zoals de interrenal steroidogenic weefsel wordt geplaatst precies boven de dooierzak, een ventrale flat-mount analyse van de interrenal weefsel zorgt voor een directe en duidelijke observatie van de interrenal morfologie 17.
3. IHC Analyse van 3β-Hsd-activiteit gekleurd Embryo's
NB: Voor het analyseren van de vasculaire micro-omgeving van de steroidogenic weefsel, de 3β-Hsd-activiteit gekleurd embryo's met een transgeen endotheel-specifieke tl-reporter worden onderworpen aan vibratome snijden en de daaropvolgende IHC analyse 12,18 dwars.
- Post-fixatie
- Post-fix de 3β-Hsd activiteit gekleurd en gewassen embryo's met 2% PFA aangevuld met 1% Triton X-100 gedurende 1 uur bij 4 ° C en wassen 4x gedurende 10 min in PBS bevattende 1% Triton X-100 (PBSTx) bij kamertemperatuur.
- Inbedding
- Bereid 4% laagsmeltende agarose door oplossen van de agarose in PBS bij 95 ° C, aliquot in microfuge buizen en bewaar bij 4-8 ° C.
- Smelt een hoeveelheid van 4% laagsmeltende agarose bij 70 ° C gedurende 10 min, dan zelf het monster bij 47 ° C. Insluiten elk embryo in gesmolten 4% laagsmeltende agarose in een vrijstaande dop van een 1,5 ml microfuge buis die dient als een matrijs, en laat afkoelen tot vaste stof.
- vibratome-Sectie
- Plak een stuk papier tape om de droge platform van de vibratome.
- Verwijder de uitgeharde agarose blok uit de vorm van een scheermesje. Solliciteer superlijm aan het papier tape op het platform, en bevestig de agarose blok op het papier tape, met de voorste zijde van het monster naar boven. Trim de agarose blok een trapeziumvormige prisma vorm met circa 4 mm en 8 mm aan elke kant van de bovenste en onderste vlakken, respectievelijk.
- Spoel het monster bevattende agarose blok met koude PBS aangevuld met 0,5% Triton X-100 (0,5% PBSTx) met behulp van een druppelaar.
- Snijd de agarose blok in 100 micrometer secties volgens de handleiding van de vibratome. Voortdurend spoel de agarose blok om uitdroging te voorkomen. Zoals elke plak wordt gesneden, haal hem uit de vibratome met behulp van een 26 G injectienaald, en over te brengen naar een plek plaat met koude 0,5% PBSTx (500 ul / putje).
- Verzamel de 3β-Hsd activiteit positieve weefselcoupes door het controleren van onder een dissectie microscoop, en de onderdelen over te dragen door een piPette tip met een afsluiting aan het einde (ongeveer 1 mm binnendiameter aan de opening) in een 96-well plaat met koude 0,5% PBSTx (150 gl / putje). De weefselmonsters meestal distantiëren van de agarose blok na deze stap.
- Permeabilisatie en Wassen
- Was de plakjes 6x gedurende 15 min in 0,5% PBSTx bij kamertemperatuur, 10 min in PBS en 4x gedurende 10 min in PBS aangevuld met 1% runderserumalbumine / 1% DMSO / 0,1% Triton X-100 (PBDTx).
- Het blokkeren
- Incubeer de plakken voor 1 uur in 2% foetaal kalfsserum (FCS) in PBDTx bij kamertemperatuur.
- Primary Antibody Reaction
- Incubeer de plakjes van 1,5 dagen PBDTx met een primair antilichaam (bijvoorbeeld konijn polyklonaal anti-humaan fibronectine en muis anti-humaan focal adhesion kinase) bij 4 ° C.
- het wassen
- Was de plakjes 6x gedurende 10 min in PBDTx bij kamertemperatuur.
- Het blokkeren
- Incubeer de plakken voor 1 uur in 2% FCS in PBDTx bij kamertemperatuur.
- Secundair antilichaam Reaction
- Incubeer de plakjes van 1,5 dagen PBDTx met een secundair antilichaam (fluorofoor geconjugeerd geit anti-konijn of anti-muis IgG) bij 4 ° C.
- het wassen
- Was de plakjes 6x gedurende 10 min in PBDTx bij kamertemperatuur en 4x gedurende 10 min in PBST bij kamertemperatuur.
NB: Voor confocale microscopische analyse, de monsters te wissen met 50% glycerol in PBS.
- Was de plakjes 6x gedurende 10 min in PBDTx bij kamertemperatuur en 4x gedurende 10 min in PBST bij kamertemperatuur.
4. Confocale Analyse
- Let op de hele berg embryo en de sectie door een confocale microscoop uitgerust met een 10x / 0,5 en 20X / 0.75 objectief.
- Voor gelijktijdige detectie van de fluorescentie en 3β-Hsd kleuring, stel de multitrack functie als volgt: 488 nm argon laser en 505-530 nm banddoorlaatfilter voor de detectie van GFP; 543 nm Helium-Neon laser en 560-615 nm banddoorlaatfilter voor de opsporing van mCherry; en doorvallend licht kanaal voor de detectie van 3β-Hsd kleuring.De pinhole grootte is 1 Airey-eenheid, en de resolutie is 1024 x 1024 pixel.
- Monteer de z-stacks (met 6 micrometer interval) als een 3D-projectie, en het samenvoegen van de projectie en de heldere veld, met behulp van de ingebouwde confocale software.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Om te bepalen hoe de steroidogenic interrenal weefsel codevelops met de pronephric nier glomerulus en de ontluikende vaatstelsel, de 3β-Hsd enzymatische activiteit test werd uitgevoerd op de dubbele transgene Tg (wt1b: GFP) LI1; Tg (kdrl: mCherry) CI5 embryo op 34 HPF (Figuur 1). In dit stadium is het 3β-Hsd activiteit-positieve steroidogenic weefsel ligt direct aan de middellijn en meteen caudaal van de pronephric nier glomerulus, terwijl sommige steroidogenic cellen het migreren te starten over de middellijn en vormen een uitstekende rand van de dorsale uitzicht. De steroidogenic weefsel is nauw verbonden met de dorsale aorta (DA) en ader achterste kardinaal (PCV).
De 3β-Hsd enzymatische activiteit test op Tg (kdrl: GFP) s843 embryo's mag een duidelijke afbakening van de peri-interrenal schepen, met inbegrip van de DA, PCVEn interrenal vat (IRV Figuur 2). Vibratoomcoupes van de 3β-Hsd-activiteit gekleurde embryo's werden onderworpen aan IHC analyse voor het detecteren van het extracellulaire matrix eiwit fibronectine en stroomafwaartse effector gefosforyleerd Focal Adhesion Kinase. De peri-DA afzetting van fibronectine is essentieel voor de ondersteuning IRV groei 18.
Figuur 1: Whole-mount 3β-Hsd activiteit kleuring uitgevoerd op zebravis uiten van TL-verslaggevers. Dorsale (links panelen) en dorsolaterale (rechter panelen) uitzicht op een 3β-Hsd-activiteit gekleurd Tg (wt1b: GFP) LI1; Tg (kdrl: mCherry) CI5 embryo bij 34 HPF, die het mogelijk maakt het visualiseren van de relatieve ruimtelijke verdeling van de interrenal weefsel (IR), pronephric glomerulus (PG), pronephric tubuli (PT), dorsale aorta (DA), laterale dorsaleader aorta (LDA), en achterste kardinaal (PCV). Door de ligging van de interrenal weefsel in dit stadium, de dorsolaterale uitzicht op de rechterkant van het embryo. D, dorsale; V, ventrale; A, anterior; P, posterior; R, rechts; L, links. Schaal bar = 50 micrometer. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: Vibratome snijden en IHC analyse van 3β-Hsd activiteit gebeitst Tg (kdrl: GFP) s843 embryo's. De 34-HPF embryo werd onderworpen aan een 3β-Hsd enzymatische activiteit test en vibratome snijden. De 3β-Hsd activiteit-positieve sectie werd gekleurd door dubbele IHC met konijn anti-humaan fibronectine (Fn; 1/200) en muis anti-humaan gefosforyleerd focale adhesie kinase (pFak; pY397, 1/100). De dwarsdoorsnede toont de relatieve verdeling van de interrenal weefsel (IR) en de omliggende schepen, met inbegrip van de dorsale aorta (DA), ader achterste kardinaal (IRV), en ader achterste kardinaal (PCV). NT, neurale buis; NC, notochorda; S, somite. Schaal bar = 50 micrometer. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
| voorraadconcentratie | In 1000 pl | eindconcentratie | |
| Part A. | |||
| DMSO | 40 gl | ||
| DHEA | 10 mg / ml | 10 gl | 0,1 mg / ml |
| NAD | 1,2 mg / ml | 10 gl | 12 ug / ml |
| Deel B. | |||
| PBST | 936 pl | ||
| vitamine B3 | 50 mg / ml | 2 gl | 0,1 mg / ml |
| NBT | 50 mg / ml | 2 gl | 0,1 mg / ml |
Tabel 1: Bestanddelen van de 3β-Hsd kleurreactie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De signaalsterkte van de 3β-Hsd activiteit verhoogd in de loop van de reactie. Duidelijke signalen van de 3β-Hsd activiteit werden gedetecteerd na 4 uur reactie voor de fasen van 28 HPF verder. De reactieduur vereist empirisch bepalen, afhankelijk van het doel van de test. Indien de kleuring vereist nachts verwerking, een licht blauwachtige achtergrond ontwikkelt zich meestal op de monsters. Dit probleem kan worden ondervangen door de tijdsduur fixatie (bijvoorbeeld 4 uur in 4% PFAT bij KT) vóór de verhoging 3β-Hsd activiteit kleuring. Daarentegen overfixation, zoals het corrigeren overnacht bij 4% PFAT bij kamertemperatuur leidt tot een uiterst heldere achtergrond. Zou echter langere tijd nodig om een gewenste intensiteit van het signaal te verkrijgen. We hebben gemerkt dat de vaststelling van de monsters gedurende de nacht met 2% in plaats van 4% PFAT voordat 3β-Hsd activiteit kleuring meestal meer gewenste resultaten oplevert in een volgende fluorescerende reporter observatie of IHC analyse. Echter, de vaststelling van de embryo's met 4% PFAT maakt een snelle test van de 3β-Hsd activiteit (voltooid binnen 1 dag) en zou dus profiteren genetische of chemische screens richten op de interrenal steroidogenic weefsels.
Post-vaststelling van de embryo's na 3β-Hsd activiteit kleuring is essentieel omdat sporen van chemische componenten de neiging om te volharden in de gekleurde monsters, zelfs na uitgebreid wassen en zou resulteren in hoge achtergrond na een duur langdurige opslag. Indien de 3β-Hsd-activiteit gekleurd embryo's worden onderworpen aan verdere IHC analyse, het opslaan van de 3β-Hsd activiteit gekleurd en gewassen embryo bij 4 ° C overnacht heeft niet tot een merkbare verhoging van de achtergrond.
In situ analyse hybridisatie (ISH) van 3β-Hsd-activiteit gekleurd embryo's mogelijk is. Bijvoorbeeld, is de expressie van transcripten Prox1 colocalized de 3β-Hsd activiteit op steroidogenic weefsel 10. Om 3β-Hsd activiteit kleuring voeren naast ISH, moet de embryo 4% PFAT worden vastgesteld 4 uur vóór en na de 3β-Hsd activiteitstest zodat cellulair RNA transcripten kunnen worden geconserveerd met gewenste kwaliteit voor ISH analyse.
ISH analyse door gebruik te maken van riboprobes ff1b, CYP11A1, hsdb1 en ster zijn toegepast in de ontwikkelings-studies van de interrenal steroidogenic weefsel 1,2,11. De riboprobe van ff1b detecteert primordiale interrenal cellen door 22 HPF, terwijl die van CYP11A1 en ster te detecteren differentiërende interrenal cellen door 24 HPF. Vergeleken met 3β-Hsd histochemische kleuring die op detecteert interrenal gedifferentieerde weefsels 28 HPF verder kan ISH analyse worden gebruikt om een spectrum van interrenal-specifieke genen analyseren zowel primordiale en gedifferentieerde interrenal cellen. Niettemin 3β-Hsd histochemische kleuring hais het voordeel dat ze eenvoudig, snel en betrouwbaar voor het analyseren van het fenotype van de gedifferentieerde steroidogene interrenal weefsel, en daarom is een krachtig hulpmiddel voor gedetailleerde ontwikkelingsstudies en grootschalige genetische of chemische screens. Per onze review van de relevante literatuur, bestaat er geen specifiek antilichaam dat op betrouwbare wijze het eiwit expressie in het steroidogenic interrenal weefsel kan detecteren door middel van immunohistochemie. Daarom is de 3β-Hsd histochemische kleuring werkwijze is bijzonder nuttig bij het afbakenen van het weefsel en cellulaire morfologie van de steroidogenic interrenal weefsel.
Hoewel 3β-Hsd histochemische kleuring is nuttig voor de visualisatie van de gedifferentieerde steroidogene interrenal weefsel, is het niet direct bericht steroïde synthese capaciteit of functionaliteit van interrenal cellen. Mutaties of chemische stoffen die van invloed enzymen stroomopwaarts of stroomafwaarts van 3β-Hsd in de steroidogenic synthese cascade mag nietnoodzakelijkerwijs waargenomen met de beschreven werkwijze, aangezien deze al dan niet ofwel de grootte of de morfologie van het weefsel interrenal verstoren. Daarom moet de gebruikers van dit protocol in gedachten houden dat bepaalde enzymatische impairments invloed zijn functie, maar niet de morfologie van de interrenal weefsel niet onmiddellijk kunnen worden gedetecteerd door deze methode.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Wij danken Prof. Christoph Englert en Prof. Didier Stainier voor gifting de Tg (wt1b: GFP) LI1 en Tg (kdrl: EGFP) s843 stammen, respectievelijk, en de Taiwan zebravis Core Faciliteit voor het verstrekken van Tg (kdrl: mCherry) CI5. Deze studie werd ondersteund door subsidies van het ministerie van Wetenschap en Technologie (96-2628-B-029-002-my3, 101-2313-B-029-001, 102-2628-B-029-002-my3 Taiwan, 102- 2321-B-400-018).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Confocal microscope | Carl Zeiss | LSM510 | |
| DMSO | Sigma | D8418 | |
| Glycerol | USB | US16374 | |
| Hyclone Fetal Calf Serum | GE Healthcare Life Sciences | SH30073 | |
| Nicotinamide | Sigma | N0636 | |
| β-Nicotinamide adenine dinucleotide hydrate | Sigma | N1636 | |
| 4-Nitro blue tetrazolium | Promega | S380C | |
| Nusieve GTG | Lonza | 50081 | |
| Paraformaldehyde | Sigma | P6148 | |
| Phenylthiourea | Sigma | P7629 | |
| Phosphate buffered saline | Sigma | P4417-100Tab | |
| PYREX Spot Plate | Corning | 7220-85 | |
| Reef Salt | AZOO | AZ28001 | |
| trans-Dehydroandrosterone | Sigma | D4000 | |
| Triton X-100 | Sigma | T8787 | |
| Tween 20 | Sigma | P9416 | |
| Vibratome | Leica | VT1000M |
References
- Hsu, H. J., Lin, G., Chung, B. C. Parallel early development of zebrafish interrenal glands and pronephros: differential control by wt1 and ff1b. Development. 130, 2107-2116 (2003).
- To, T. T., et al. Pituitary-interrenal interaction in zebrafish interrenal organ development. Mol Endocrinol. 21, 472-485 (2007).
- Liu, Y. W.
- Cravioto, M. D., et al. A new inherited variant of the 3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase-isomerase deficiency syndrome: evidence for the existence of two isoenzymes. J Clin Endocrinol Metab. 63, 360-367 (1986).
- Lachance, Y., et al. Characterization of human 3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase/delta 5-delta 4-isomerase gene and its expression in mammalian cells. J Biol Chem. 267, 3551 (1992).
- Simard, J., et al. Molecular biology of the 3beta-hydroxysteroid dehydrogenase/delta5-delta4 isomerase gene family. Endocr Rev. 26, 525-582 (2005).
- Lin, J. C., et al. Two zebrafish hsd3b genes are distinct in function, expression, and evolution. Endocrinology. 156, 2854-2862 (2015).
- Grassi Milano, E., Basari, F., Chimenti, C. Adrenocortical and adrenomedullary homologs in eight species of adult and developing teleosts: morphology, histology, and immunohistochemistry. Gen Comp Endocrinol. 108, 483-496 (1997).
- Chai, C., Liu, Y. W., Chan, W. K. Ff1b is required for the development of steroidogenic component of the zebrafish interrenal organ. Dev Biol. 260, 226-244 (2003).
- Liu, Y. W., Gao, W., Teh, H. L., Tan, J. H., Chan, W. K. Prox1 is a novel coregulator of Ff1b and is involved in the embryonic development of the zebra fish interrenal primordium. Mol Cell Biol. 23, 7243-7255 (2003).
- Chai, C., Liu, Y. W., Chan, W. K. Ff1b is required for the development of steroidogenic component of the zebrafish interrenal organ. Dev. Biol. 260, 226-244 (2003).
- Chou, C. W., Zhuo, Y. L., Jiang, Z. Y., Liu, Y. W. The hemodynamically-regulated vascular microenvironment promotes migration of the steroidogenic tissue during its interaction with chromaffin cells in the zebrafish embryo. PLoS One. 9, e107997 (2014).
- Liu, Y. W., Guo, L. Endothelium is required for the promotion of interrenal morphogenetic movement during early zebrafish development. Dev Biol. 297, 44-58 (2006).
- Jin, S. W., Beis, D., Mitchell, T., Chen, J. N., Stainier, D. Y. Cellular and molecular analyses of vascular tube and lumen formation in zebrafish. Development. 132, 5199-5209 (2005).
- Proulx, K., Lu, A., Sumanas, S. Cranial vasculature in zebrafish forms by angioblast cluster-derived angiogenesis. Dev Biol. 348, 34-46 (2010).
- Perner, B., Englert, C., Bollig, F. The Wilms tumor genes wt1a and wt1b control different steps during formation of the zebrafish pronephros. Dev Biol. 309, 87-96 (2007).
- Chou, C. W., Chiu, C. H., Liu, Y. W. Fibronectin mediates correct positioning of the interrenal organ in zebrafish. Dev Dyn. 242, 432-443 (2013).
- Chiu, C. H., Chou, C. W., Takada, S., Liu, Y. W. Development and fibronectin signaling requirements of the zebrafish interrenal vessel. PLoS One. 7, e43040 (2012).
