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Biology

माउस मूत्राशय को प्लाज्मिड डीएनए डिलिवरी के उपंयास विधि Electroporation द्वारा Urothelium

Published: May 3, 2018 doi: 10.3791/57649
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1
1Department of Molecular, Cell, and Developmental Biology, University of California, Santa Cruz
* These authors contributed equally

Summary

हम मूत्रमार्ग कैथीटेराइजेशन और electroporation के माध्यम से vivo में माउस मूत्राशय की urothelial कोशिकाओं में डीएनए प्लाज्मिड के वितरण के लिए एक उपंयास विधि का वर्णन । यह मूत्राशय रोगों के autochthonous माउस मॉडल पैदा करने के लिए एक तेजी से और सुविधाजनक तरीका प्रदान करता है ।

Abstract

आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल (GEMMs) दीक्षा और कैंसर जैसे मानव रोगों की प्रगति तंत्र में उपंयास जैविक अंतर्दृष्टि खुलासा में अत्यंत मूल्यवान हैं । ट्रांसजेनिक और सशर्त नॉकआउट चूहों अक्सर के लिए इस्तेमाल किया गया है जीन व्यक्त या विशिष्ट ऊतकों में पृथक या सेल प्रकार vivo में. हालांकि, सृजन germline माउस मॉडल समय लेने वाली और महंगा हो सकता है । जीन संपादन प्रौद्योगिकियों में हाल ही में प्रगति और वायरल संक्रमण द्वारा डीएनए plasmids पहुंचाने की व्यवहार्यता कई अंगों के लिए गैर germline autochthonous माउस कैंसर मॉडल के तेजी से उत्पादन सक्षम है । मूत्राशय एक अंग है कि वायरल वैक्टर के लिए मुश्किल का उपयोग किया गया है, एक glycosaminoglycan urothelium को कवर परत की उपस्थिति के कारण है । यहां, हम एक उपंयास में डीएनए plasmids के कुशल प्रसव के लिए लैब में विकसित विधि का वर्णन में माउस मूत्राशय urothelium vivo में। pCAG-GFP डीएनए प्लाज्मिड और शल्य चिकित्सा उजागर मूत्राशय के electroporation के intravesical जगाकर के माध्यम से, हम बताते है कि डीएनए प्लाज्मिड क्षणिक अभिव्यक्ति के लिए मूत्राशय urothelial कोशिकाओं में विशेष रूप से दिया जा सकता है । हमारी विधि और अधिक स्पष्ट और माउस मूत्राशय में जीन की पछाड़ना के लिए एक तेज और सुविधाजनक तरीका प्रदान करता है, और मूत्राशय के कैंसर और अंय यूरोलॉजिकल रोगों के निर्माण GEMMs के लिए लागू किया जा सकता है ।

Introduction

आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल (GEMMs) गया है पशु विकास, vivo मेंजीन कार्यों के बारे में हमारे ज्ञान के विस्तार में एक आवश्यक भूमिका निभा रहा है, और रोग प्रगति1,2के तंत्र । Germline GEMMs पारंपरिक रूप से दो तरह से विकसित होते हैं । पहले डीएनए प्लाज्मिड की परमाणु इंजेक्शन द्वारा ट्रांसजेनिक चूहों की रचना है pseudopregnant महिलाओं में zygotes के प्रत्यारोपण के बाद । अन्य भ्रूण स्टेम कोशिकाओं में मुताबिक़ पुनर्संयोजन और chimeras के विकास के द्वारा चूहों में दस्तक बाहर की पीढ़ी है/ विशिष्ट ऊतक या ब्याज की कोशिका प्रकार में जीन की सशर्त पीटकर कई पीढ़ियों के लिए Cre और flox साइटों के साथ आनुवंशिक रूप से इंजीनियर alleles के प्रजनन शामिल है । पूरी प्रक्रिया महंगी और समय लेने वाली हो सकता है, खासकर अगर लक्ष्य के लिए कई जीन ऊतक लक्ष्य है-विशेष रूप से । हाल ही में, इस तरह के रूप में नियमित रूप से अंतराल कम palindromic संकुल के रूप में जीन संपादन प्रौद्योगिकियों (CRISPR) चूहों के कई अंगों के लिए लागू किया गया है autochthonous कैंसर मॉडलिंग के लिए ऊतक विशिष्ट आनुवंशिक परिवर्तन प्रेरित3, 4,5,6,7 या सही रोग उत्परिवर्तनों में सीटू8,9. इन अध्ययनों में gRNA वैक्टर की डिलिवरी आमतौर पर adenoviral या lentiviral संक्रमण अंग या hydrodynamic टेल-नस इंजेक्शन के माध्यम से हासिल की जाती थी । फेफड़ों और जिगर के लिए CRISPR घटकों के वितरण के सापेक्ष आसानी बहुत पारंपरिक Cre-लोक्स आधारित माउस मॉडलों की तुलना में इन अंगों में कैंसर मॉडलिंग की सुविधा और दक्षता में सुधार हुआ है ।

मूत्राशय urothelium है जहां सबसे मूत्राशय ट्यूमर शुरू । डीएनए वैक्टर कैंसर मॉडलिंग या जीन थेरेपी के लिए urothelium मूत्राशय के लिए प्रसव शिखर urothelial सतह, जो संक्रामक वायरस के पालन के लिए एक बाधा के रूप में कार्य करता है पर एक glycosaminoglycan परत द्वारा बाधा है10,11। Syn3 और dodecyl-β-d-maltoside जैसे कई उपचार एजेंटों इस बाधा को बाधित और एडीनोवायरस संक्रमण दक्षता12,13,14को बढ़ाने के लिए इस्तेमाल किया गया है । क्या adeno-जुड़े वायरस (AAVs) प्रभावी रूप से मूत्राशय को संक्रमित कर सकते हैं रिपोर्ट नहीं किया गया है । कुल मिलाकर, एक गैर वायरल आधारित वितरण पद्धति वांछनीय होगा । यहां, हम एक उपंयास के लिए प्रयोगशाला में विकसित विधि का वर्णन कुशल डीएनए प्लाज्मिड प्रसव के लिए माउस urothelium मूत्रमार्ग कैथीटेराइजेशन और electroporation के माध्यम से । क्योंकि हमारे दृष्टिकोण glycosaminoglycan परत या वायरस के उत्पादन के रासायनिक उपचार शामिल नहीं करता है, यह काफी माउस मूत्राशय urothelium में डीएनए plasmids के वितरण को सरल, और vivo अध्ययन में विभिंन सुविधा चाहिए मूत्राशय रोगों की ।

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Protocol

सभी प्रक्रियाओं यहां वर्णित के अनुसार दिशा निर्देशों और विनियमों के साथ संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय के सांता Cruz में प्रदर्शन किया गया ।

1. प्लाज्मिड और उपकरण तैयारी

  1. प्रत् येक मूत्राशय के लिए transfect, DNA प्लाज्मिड (1 µ g/µ l) के कम से 20 µ l तैयार करें ।
  2. एक १.५ एमएल microcentrifuge ट्यूब में प्लाज्मिड सॉल्यूशन के 20 µ l को Trypan ब्लू के 1 µ l को जोड़ें । पिपेट को अच्छी तरह मिला लें ।
  3. सभी सर्जिकल उपकरणों आटोक्लेव और ७०% इथेनॉल के साथ कार्यक्षेत्र निष्फल । ७०% इथेनॉल अक्सर के साथ सर्जिकल उपकरणों और दस्ताने स्प्रे या बाँझ स्थितियों को बनाए रखने के लिए निम्न चरणों का पालन करते समय एक गिलास मनका नसबंदी का उपयोग करें ।

2. Anaesthetizing पशु

  1. isoflurane के साथ पशु anesthetize करने के लिए एक तालिका शीर्ष संज्ञाहरण प्रणाली का प्रयोग करें । O2 टैंक चालू करें और ऑक्सीजन flowmeter को 1 L/
  2. प्रेरण कक्ष में एक वयस्क महिला C57BL/6J माउस प्लेस । चालू करें और प्रेरण के लिए 3% isoflurane vaporizer को समायोजित करें । माउस संज्ञाहरण में 2 मिनट के भीतर होना चाहिए । प्रशासन buprenorphine एनाल्जेसिक (०.१ मिलीग्राम/रिक्तिपूर्व analgesia के लिए प्रेरण कक्ष से माउस को हटाने पर चमड़े के नीचे) ।
    नोट: इस प्रोटोकॉल में, मादा चूहों उपयोग किया जाता है, के रूप में वे मूत्रमार्ग कैथीटेराइजेशन के दौरान के साथ काम करने के लिए आसान कर रहे हैं. प्रोटोकॉल भी पुरुष चूहों के लिए काम करता है, लेकिन अतिरिक्त सावधानी की जरूरत है जब चरण 3 प्रदर्शन.
  3. सूखापन को रोकने के लिए पशु की आंखों के लिए नेत्र मरहम लागू करें । नाक शंकु में अपनी नाक के साथ एक हीटिंग पैड पर का सामना करना पड़ anaesthetized माउस प्लेस । isoflurane नाक शंकु के माध्यम से जाने जाने के लिए एयर सर्किट स्विच बारी ।
  4. सिर और चिपकने वाला टेप के साथ नाक शंकु नियंत्रित । रखरखाव के लिए 2% isoflurane vaporizer समायोजित करें ।
  5. चिपकने वाला टेप के साथ अंगों को नियंत्रित । पशु गहरी संज्ञाहरण में है और फिर पेट क्षेत्र दाढ़ी सुनिश्चित करने के लिए पैर की अंगुली चुटकी परीक्षण करते हैं ।

3. मूत्र की कमी और मूत्राशय धोने

  1. कैथेटर (24G, २.११ cm, ०.०४५ cm के बाहरी व्यास) की लंबाई और सुनिश्चित करें कि इसकी बाहरी सतह पूरी तरह से कवर किया जाता है के लिए स्नेहक लागू होते हैं ।
  2. मूत्रमार्ग खोलने में कैथेटर डालें और इसे जब तक यह मूत्राशय, जो समय पर मूत्र कैथेटर के माध्यम से बाहर प्रवाह करना चाहिए तक पहुंचता है इसे धक्का । धीरे पेट प्रेस करने के लिए मूत्र कमी मदद करते हैं ।
    1. कैथेटर सही ढंग से स्वचालित मूत्र बाहर प्रवाह देख कर मूत्राशय में डाला जाता है की जाँच करें । मूत्रमार्ग और मूत्राशय की दीवार भेदी से बचें, और अगर जरूरत स्नेहक कई बार लागू होते हैं ।
  3. मूत्र को बेकार चोंच में पिपेट के साथ त्यागें ।
  4. पिपेट ८० µ के एल फॉस्फेट बफर खारा (पंजाब) कैथेटर के बाहरी छोर में, अन्य अंत के साथ अभी भी मूत्राशय में. ध्यान से कैथेटर के लिए एक 1 मिलीलीटर सिरिंज संलग्न । धीरे से मूत्राशय में पंजाबियों इंजेक्षन करने के लिए सिरिंज धक्का । कैथेटर में कुछ पंजाबियों छोड़ मूत्राशय में हवा के बुलबुले बनाने से बचने के लिए ।
  5. सिरिंज निकालें । पंजाबियों को मूत्राशय से बाहर पलायन करने के लिए रुको । धीरे से पेट प्रेस पंजाब खाली करने के लिए ।
  6. एक पिपेट के साथ कैथेटर में बेकार चोंच में पंजाबियों को छोड़ दें ।
  7. दोहराएं पंजाब धुलाई (कदम ३.४-३.६) दो और बार के लिए ।
    नोट: यह इन धुलाई चरणों के दौरान धीरे से काम करने के लिए आवश्यक है । कैथेटर या स्वचालित बाहर तरल के प्रवाह की विफलता में रक्त आमतौर पर इंगित करता है मूत्रमार्ग के माध्यम से छेदा है । यह भी हवा के बुलबुले शुरू से बचने के लिए महत्वपूर्ण है, के रूप में वे electroporation दक्षता में कमी होगी ।

4. प्लाज्मिड डिलिवरी

  1. माउस पेट में ७०% इथेनॉल लागू करें और मूत्राशय के ऊपर पेट की त्वचा को खोलने के लिए 1 सेमी की एक ऊर्ध्वाधर चीरा बनाने के लिए एक स्केलपेल का उपयोग ।
  2. पिपेट प्लाज्मिड प्लस Trypan के कम से 20 µ एल के बाहर कैथेटर के बाहरी छोर में नीले समाधान, और सिरिंज संलग्न ।
  3. मूत्राशय में प्लाज्मिड समाधान इंजेक्षन । यदि मूत्राशय नीला हो जाता है तो इंजेक्शन सफल होता है । मूत्राशय में हवा के बुलबुले बनाने से बचने के लिए कैथेटर में कुछ तरल छोड़ दें ।
  4. चिमटी का उपयोग कर बाहरी मूत्रमार्ग छिद्र पकड़ो, और फिर कैथेटर और सिरिंज को हटा दें । बाहरी मूत्रमार्ग छिद्र को कसने के लिए एक स्ट्रिंग का उपयोग करें । स्ट्रिंग के साथ दो छोरों बनाओ और फिर दो समुद्री मील के साथ टाई ।
    नोट: मूत्रमार्ग के कस प्लाज्मिड तरल के backflow को रोकने के लिए महत्वपूर्ण है ।
  5. electroporation जनरेटर पर निम्न पैरामीटर के साथ चालू करें: 33V, ५० ms कार्य समय, और ९५० ms अंतराल समय ।
  6. चिमटी के साथ मूत्राशय पकड़ो और दो इलेक्ट्रोड के साथ मूत्राशय चुटकी । electroporation प्रदर्शन करने के लिए पैर पेडल पुश ।
    नोट: बिजली दालों प्रत्येक पेडल पुश के बाद कम अंतराल के साथ 5 बार घटित करने के लिए सेट कर रहे हैं. माउस इस प्रक्रिया में चिकोटी हो सकती है । पैर पेडल धक्का अधिक से अधिक एक बार प्रसव दक्षता बढ़ा सकते हैं, लेकिन बहुत सारे बिजली दलहन urothelium की ऊतक अखंडता को नुकसान पहुंचा सकता है ।
    1. चिमटी और इलेक्ट्रोड के बीच किसी भी संपर्क से बचें, के रूप में यह एक चिंगारी उत्पन्न होगा ।

5. रिकवरी

  1. उदर और बाँझ शल्य टांका और क्लिप के साथ त्वचा खोलने सीवन । घाव पर आयोडीन लागू होते हैं ।
  2. isoflurane प्रणाली से पशु निकालें । प्रशासन buprenorphine एनाल्जेसिक (०.१ मिलीग्राम/चमड़े के बाद शल्य चिकित्सा दर्द को कम करने के लिए ।
  3. हीटिंग पैड पर जानवर रखें और पूरी वसूली के बाद इसे घर पिंजरे में वापस । सामांय गतिशीलता, पीने और भोजन व्यवहार और संक्रमण का कोई लक्षण जब तक चीरा चंगा है और फिर क्लिप को दूर करने के लिए कम से कम एक बार दैनिक पशु की जांच करें । buprenorphine एनाल्जेसिक के बाद इंजेक्शन प्रशासन अगर जानवर दर्द लक्षण प्रदर्शित करता है जैसे कम सौंदर्य, वृद्धि की आक्रामकता, और वोकलिज़ेशन ।

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Representative Results

मूत्राशय urothelium में जीन वितरण की सफलता का प्रदर्शन करने के लिए, हम electroporation के लिए pCAG-GFP15 प्लाज्मिड का इस्तेमाल किया । प्लाज्मिड और Trypan ब्लू सॉल्यूशन के 20 µ l को मूत्रमार्ग के माध्यम से इंजेक्ट किया गया और 5 बिजली दालों का प्रबंध किया गया । ४८ ज के बाद, हम एक विच्छेदन प्रतिदीप्ति खुर्दबीन के नीचे माउस मूत्राशय और GFP प्रतिदीप्ति के धब्बे मनाया, जबकि एक नकारात्मक नियंत्रण मूत्राशय है कि गुजर नहीं किया electroporation कोई GFP संकेत (चित्र 1a) दिखाया । जब हम cytokeratin (CK) 5, CK18, और GFP एंटीबॉडी के साथ खोदी मूत्राशय के ऊतकों के दाग इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रदर्शन किया, हमने पाया कि GFP संकेत छाता, मध्यवर्ती, और बेसल कोशिकाओं में मौजूद था, लेकिन नहीं मांसपेशी परत में (चित्र 1b), urothelium में प्लाज्मिड वितरण की अच्छी विशिष्टता का संकेत है । लगभग 15% urothelial कोशिकाओं के GFP+रहे हैं, और इस तरह के क्लोनल प्रकृति कैंसर मॉडलिंग के लिए आदर्श होना चाहिए क्योंकि ट्यूमर आमतौर पर व्यक्तिगत कोशिकाओं से शुरू करते हैं ।

Figure 1
चित्रा 1: pCAG के सफल प्रसव-GFP प्लाज्मिड के लिए माउस मूत्राशय urothelium । (क) एक मूत्राशय है कि एक नकारात्मक नियंत्रण मूत्राशय के लिए electroporation (दाएं) से गुजरा (बाएं) दिखा रहा है कि electroporation सफलतापूर्वक मूत्राशय हरे रंग का हो गया । (ख) इम्यूनोफ्लोरेसेंस में खोदी गई मूत्राशय के ऊतकों का धुंधला होना (CK18+), GFP+ कोशिकाओं के मोज़ेक अभिव्यक्ति पैटर्न को प्रदर्शित करना, मध्यवर्ती (CK5+CK18+), और बेसल (CK5+) urothelial परतों । 1 मिमी करने के लिए एक संगत में स्केल पट्टी, और में B करने के लिए ५० µm. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

Electroporation कोशिका झिल्ली पारगम्यता को बढ़ाता है और जीन electrotransfer के लिए एक शक्तिशाली प्रौद्योगिकी है16. electroporation द्वारा रहने वाले कुतर में जीन डिलिवरी को अक्सर तंत्रिका जीव विज्ञानफिल्ड17, 18, 19, 20, 21 में इस्तेमाल किया गया है । कई अन्य अंगों में इसके संभावित आवेदनों की बड़े पैमाने पर पड़ताल नहीं की गई है. हमारे ज्ञान के लिए, हमारे विधि यहां वर्णित मूत्राशय urothelium को electroporation द्वारा सफल जीन वितरण की पहली रिपोर्ट है । यह एडीनोवायरस/lentivirus-आधारित संक्रमण के तरीकों के लिए कई लाभ प्रदान करता है । सबसे पहले, electroporation विधि आसान, सुरक्षित है, और सस्ता अपनाने के लिए क्योंकि गैर वायरल आनुवंशिक वैक्टर उपयोग किया जाता है और vivo में विशिष्ट अंग साइटों को डीएनए plasmids की डिलीवरी अपेक्षाकृत सरल है । दूसरा, यह अवांछनीय मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं कि अक्सर वायरस वैक्टर22द्वारा वितरण के साथ जुड़े रहे है टाल । तीसरा, मूत्राशय के मामले में, यह glycosaminoglycan परत है, जो आम तौर पर urothelial कोशिकाओं के लिए बाध्यकारी वायरस को रोकता है के रासायनिक उपचार की जरूरत को नकारती है ।

इस प्रोटोकॉल में सबसे महत्वपूर्ण कदम कैथीटेराइजेशन, धोने, और प्लाज्मिड इंजेक्शन हैं । अतिरिक्त देखभाल और कोमल हैंडलिंग सुनिश्चित करना है कि कैथेटर मूत्रमार्ग या मूत्राशय की दीवार के माध्यम से पियर्सिंग नहीं है जब सम्मिलन प्रदर्शन और संलग्न/ लागू पर्याप्त चिकनाई के लिए पूरी तरह से कैथेटर की बाहरी सतह को कवर भी आवश्यक है । विफलता का एक अंय संभावित कारण धोने और प्लाज्मिड इंजेक्शन के दौरान मूत्राशय में हवा के बुलबुले की शुरूआत है, क्योंकि यह विद्युत चालकता में कमी होगी । इस को रोकने के लिए, हम अनुशंसा करते हैं हमेशा कुछ तरल छोड़ने में कैथेटर जब उन चरणों का प्रदर्शन.

हमारे प्रोटोकॉल किसी भी उंर के वयस्क चूहों के लिए काम करना चाहिए, क्योंकि हम छोटे (2 महीने) और पुराने (1 वर्ष) चूहों के बीच प्रसव दक्षता में एक अंतर का पालन नहीं किया । कई कारकों प्लाज्मिड वितरण क्षमता को प्रभावित कर सकते हैं । हम कम राशि के रूप में इंजेक्शन के लिए ंयूनतम मात्रा के रूप में प्लाज्मिड के 20 µ एल की सिफारिश पर्याप्त मूत्राशय की भीतरी सतह को कवर नहीं कर सकते हैं । बढ़ती प्लाज्मिड मात्रा और एकाग्रता आम तौर पर उच्च प्रवेश पैदावार, लेकिन कोई अतिरिक्त लाभ ६० µ एल से परे मात्रा के लिए मनाया गया और अधिक बिजली दालों देने और इलेक्ट्रोड के साथ मूत्राशय के विभिन्न सतह क्षेत्रों को छूने के लिए होगा प्रसव दक्षता बढ़ाने पर सबसे बड़ा असर । इस प्रोटोकॉल में वर्णित electroporation पैरामीटर urothelial कोशिकाओं के permeabilization की अनुमति देने के लिए सेट है, जबकि ऊतक अखंडता के संरक्षण, उच्च वोल्टेज के बाद से कोशिका मृत्यु को प्रेरित करने के लिए जाता है. यह आगे अनुकूलन के लिए इन मापदंडों tweak करने के लिए संभव है । माउस से माउस बदलाव और शोधकर्ता की हैंडलिंग दक्षता बहुत प्रभावित कर सकते हैं । परियोजना के लक्ष्य के आधार पर, हम प्रत्येक विशिष्ट प्रयोग के लिए सबसे अच्छा मापदंडों का निर्धारण करने के लिए परीक्षण करने की सलाह देते हैं । उदाहरण के लिए, मॉडलिंग में कैंसर दीक्षा और क्लोनिंग विकास, एक कम पैठ वांछित हो सकता है ।

हमारे वितरण पद्धति के लिए एक सबूत के सिद्धांत के रूप में, GFP अभिव्यक्ति मूत्राशय में electroporation के बाद के रूप में जल्दी ३६ ज के रूप में visualized किया जा सकता है, और के लिए बनाए रख सकते है कम दो सप्ताह । इस नई विधि के साथ, अब यह संभव है कि माउस मूत्राशय के लिए डीएनए plasmids तेजी से और महंगा जीन के लिए एक्सप्रेस या नीचे विनियमन और जीनोम संपादन उद्धार । यह मूत्राशय के विकास और रोगों के अध्ययन के लिए नए रास्ते खोलता है, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से निर्माण उपंयास autochthonous मूत्राशय कैंसर मॉडल ।

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Disclosures

लेखक कोई प्रतिस्पर्धी रुचि नहीं घोषित करते हैं ।

Acknowledgments

हम प्रोफेसर बिन चेन, डॉ यू झांग, और Kendy होआंग को electroporation प्रणाली की स्थापना के साथ मदद के लिए धंयवाद । यह काम सांता Cruz कैंसर लाभ समूह और NIH से Z.A.W. को अनुदान द्वारा समर्थित था

Materials

Name Company Catalog Number Comments
BD 1mL TB Syringe Fisher 148232E
Buprenorphine Sigma B9275-50MG
Dumont Tweezers Roboz Surgical Instr RS-5005 Treat with 70% ethanol before surgical use
ECM830 SQ Wave Electroporator Harvard Apparatus 450052
Exel International Disposable Safelet I.V. Catheters Fisher Scientific 14-841-21 24G, 2.11 cm length, 0.045 cm outer diameter
Extra Fine Micro Dissecting Scissors Roboz Surgical Instr RS-5135 Treat with 70% ethanol before surgical use
Isoflurane Vet one 501017
K&H Heated Resting Mat for Small Animals, 9 By 12 Inches Amazon n/a Cover the heat mat with paper towels
Ophthalmic ointment Fisher NC0849514
PBS, pH7.4 Life Technologies 10010049
Pipet tips 200 µL USA Scientific 1111-0206
Pipet Tips, Universal Fit; 0.1 to 10 µL Fisher 02707438(CS)
PIPETMAN NEO P2 Gilson F144561
PIPETMAN NEO P200N Gilson F144565
plasmid CAG-GFP Addgene 16664
Platinum tweezertrode 5 mm Harvard Apparatus 450489 5 mm diameter
Scissors Roboz Surgical Instr RS-5880 Treat with 70% ethanol before surgical use
String cord Amazon n/a Mandala Crafts 150D 210D 0.8mm 1mm leather sewing stitching flat waxed thread string cord
Tape, Scotch Fisher 19047257
Therio-gel Veterinary Lubricant PBS animal health 353-736
Trypan Blue Stain Life Technologies 15250061
V-1 Table top system anesthesia VetEquip 901806
Vicryl violet suture 18" FS-2 cutting 5-0 Fisher NC0578475
Walgreens Povidone Iodine 10% Walgreens 953982
Wound clip Fisher 018045
Wound clip applier Fisher 01804

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References

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Yu, C., Stefanson, O., Liu, Y., Wang, Z. A. Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation. J. Vis. Exp. (135), e57649, doi:10.3791/57649 (2018).

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