Summary
التهاب البنكرياس المزمن (CP) هو مرض يتميز بالتهاب وتليف البنكرياس ، وغالبا ما يرتبط بألم البطن المستعصي. تركز هذه المقالة على صقل هذه التقنية لتوليد نموذج الماوس من CP عن طريق ضخ القناة الصفراوية مع 2,4,6 -حمض الكبريتونيك trinitrobenzene (TNBS).
Abstract
التهاب البنكرياس المزمن (CP) هو مرض معقد ينطوي على التهاب البنكرياس والتليف، وضمور غدي، وآلام في البطن وأعراض أخرى. وقد تم تطوير العديد من نماذج القوارض لدراسة CP، منها القناة الصفراوية 2،4،6 -ترينيتروبنزين حمض الكبريتيك (TNBS) نموذج التسريب يكرر ملامح الألم العصبي ينظر في CP. ومع ذلك ، فإن ضخ المخدرات القناة الصفراوية في الفئران يشكل تحديا من الناحية الفنية. يوضح هذا البروتوكول إجراء ضخ TNBS القناة الصفراوية لتوليد نموذج الماوس CP. تم غرس TNBS في البنكرياس من خلال أمبولة فاتر في الاثني عشر. هذا البروتوكول الأمثل حجم الدواء والتقنيات الجراحية، والتعامل مع المخدرات أثناء الإجراء. أظهرت الفئران المعالجة TNBS ملامح CP كما ينعكس من خلال انخفاض وزن الجسم والبنكرياس، والتغيرات في السلوكيات المرتبطة بالألم، ومورفولوجيا البنكرياس غير طبيعية. مع هذه التحسينات، كانت الوفيات المرتبطة بحقن TNBS ضئيلة. هذا الإجراء ليس فقط حاسمة في توليد نماذج أمراض البنكرياس ولكن أيضا مفيدة في تسليم المخدرات البنكرياس المحلية.
Introduction
التهاب البنكرياس المزمن (CP) هو مرض التهابي مزمن يتميز بضمور البنكرياس والتليف وآلام البطن وفقدان وظائف الغدد الصماء والغدد الصماء في نهاية المطاف1. العلاجات الطبية والجراحية الحالية ليست علاجية ولكن يتم إجراؤها لتخفيف الأعراض التي هي نتيجة للمرض: آلام البطن الانكسارية، الغدد الصماء والخلل في الغدد الصماء. لذلك ، هناك حاجة ماسة إلى علاجات أكثر فعالية2. نماذج الحيوان توفر أداة أساسية لتطوير فهم أفضل للمرض والتحقيق في العلاجات المحتملة3. وقد وضعت نماذج الماوس متعددة لCP، والتي تستخدم عادة cerulein و / أو نماذج الكحول. Cerulein, أوليغوبتيد تحفيز إفراز البنكرياس, وقد ثبت أن استنساخ حث نموذج CP يضم ضمور البنكرياس, تليف, من بين أمور أخرى4. نموذج شائع آخر يستخدم الحقن التسلسلية من ارجينين, التي تنتج قصور الغدد الصماء مماثلة لتلك التي لوحظت في المرضى الإنسان5. CP يمكن أيضا أن يكون الناجم عن ربط قناة البنكرياس كاملة أو جزئية, وكذلك ارتفاع ضغط الدم قناة البنكرياس6,7. على الرغم من تنوع النماذج الحيوانية المتاحة ل CP، لا أحد من هذه النماذج يستنسخ بشكل فعال آلام البطن التي يعاني منها المرضى CP8.
وأظهرت الدراسات السابقة أن حقن البنكرياس المحلية من 2,4,6 -ترينيتروبنزين حمض الكبريتونيك (TNBS) يكرر الألم المستمر التي يعاني منها المرضى CP9,10,11. أظهرت الفئران المعالجة TNBS فرط الحساسية في البطن وزيادة السلوكيات المتعلقة بالألم وكذلك "فرط الحساسية المعمم" للمحفزات المؤلمة ، وهي ظاهرة لوحظت في مرضى CP10. بالإضافة إلى محاكاة الألم CP بدقة ، فإن نموذج TNBS يكرر أيضا السمات المرضية الأخرى للحالة البشرية مثل التليف ، تسلل الخلايا أحادية النووية ، واستبدال الخلايا الأسينارية بالأنسجة الدهنية10،12. ومع ذلك ، فإن ضخ TNBS عبر القناة الصفراوية هو إجراء صعب تقنيا في الفئران التي قد تسبب الوفاة. على حد علمنا، لا يوجد بروتوكول بصري لإظهار كيفية إجراء ضخ القناة الصفراوية. في هذه المقالة، ونحن نظهر الإجراء من ضخ الصفراء duction من TNBS لتوليد نموذج الماوس CP. هذا الإجراء سوف يساعد على توليد نماذج حيوانية قيمة لدراسة CP وأمراض البنكرياس الأخرى ويمكن استخدامها لبث مواد أخرى (مثل الفيروس والخلايا) في البنكرياس13.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وقد أجريت جميع الإجراءات بموافقة اللجان المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها في الجامعة الطبية في كارولينا الجنوبية ومركز رالف جونسون الطبي. تم استخدام الفئران الذكور C57BL/6J بين 8-10 أسابيع من العمر في هذه الدراسة. تم إيواء الفئران تحت دورة داكنة قياسية 12 ضوء / 12 مع libitumaccess الإعلانية إلى الطعام والماء.
1. إعداد حل TNBS للحقن
- إعداد الإيثانول 10٪ في 0.9٪ المالحة. حل TNBS الأسهم (انظر جدول المواد)في الإيثانول 10٪ إلى تركيز نهائي من 7.5 مليون متر عن طريق إضافة 7.5 ميكرولتر من TNBS إلى 1 مل من الإيثانول 10٪.
تحذير: يمثل TNBS خطرا كيميائيا. قم بإعداد المحلول داخل غطاء الدخان واستخدم معدات الحماية الشخصية مثل القفازات والنظارات الواقية ومعطف المختبر لتجنب الاتصال المباشر مع TNBS. - تحميل 50 ميكرولتر من محلول TNBS 0.75٪ في حقنة الأنسولين مع إبرة قياس 31. تحميل 50 ميكرولتر من الإيثانول 10٪ في المالحة في حقنة من نفس حجم السيطرة على السيارة. ضع المحاقن على الثلج واحمها من الضوء حتى الحاجة.
2. إعداد الفأر والجراحة
- حلق الشعر من منطقة جراحة البطن.
- حقن جرعة وقائية واحدة من مسكن (على سبيل المثال، البوبرينورفين 0.1 ملغم/كغ أي p.) قبل الجراحة.
- حث والحفاظ على الماوس تحت التخدير العام مع 1.5-2٪ isoflurane و 1 لتر / دقيقة من الأوكسجين. تأكيد تخدير عن طريق قرص أصابع وملاحظة الحيوان لعدم وجود رد الفعل.
- ضع الماوس على وسادة جراحية ساخنة أثناء الجراحة. تطبيق مرهم البيطرية على كل عين عندما يكون الماوس تحت التخدير.
- تطهير موقع الجراحة عن طريق مسح المنطقة الجراحية 3x مع اليود 2٪، تليها 70٪ الكحول(جدول المواد).
- إجراء عملية استئصال البطن مع مقص صغير لتوليد شق 0.5-1 سم.
- بلطف فضح الاثني عشر وتحديد موقع القناة الصفراوية المشتركة باستخدام مسحات القطن (جدول المواد).
- ضع مقطع الهيمو الصغير المستقيم(جدول المواد)على القناة المشتركة القريبة لمنع تدفق TNBS أو حلول السيارة إلى الكبد والمرارة (الشكل 1A، B).
- فضح بلطف الاثني عشر وإدراج الإبرة في قناة البنكرياس من خلال الحليمة من فاتر.
- مرة واحدة الإبرة داخل القناة، ووضع مقطع الهيمو الصغيرة المنحنية (جدول المواد) على الاثني عشر المحيطة الإبرة(الشكل 1A)لتأمين الإبرة في مكان ومنع الحل عن طريق الحقن من دخول الاثني عشر.
- غرس تدريجيا الحل (TNBS أو السيارة) في قناة البنكرياس على مدى دقيقة واحدة.
ملاحظة: يجب أن يتم غرس TNBS ببطء على مدى دقيقة واحدة من الوقت ، ومن السهل التحكم في سرعة التسريب عندما يتم حقن البنكرياس بحقنة الأنسولين بإبرة 5/16 بوصة و 31G. الحفاظ على اليد مستقرة قدر الإمكان لتجنب وخز القناة الصفراوية. إذا تم حقن TNBS بنجاح، قد يكون اللون الأصفر مرئيا داخل البنكرياس. - بعد التسريب، وإزالة بعناية المشبك الدقيق بالقرب من الكبد، ومن ثم إزالة المشبك الصغير عقد الإبرة والثنائي.
- إعادة duodenum بعناية إلى موقفها الأصلي.
- اترك 0.5 مل من المحلول الملحي الدافئ المعقم (36-37 درجة مئوية) في تجويف البطن قبل الإغلاق ، لمساعدة الاثني عشر على العودة إلى وضعه الأصلي والمساعدة في تعافي التمعج.
- أغلق الشق في طبقة العضلات باستخدام خياطة مستمرة مع غرزة 5-0. أغلق الجلد باستخدام خياطة متقطعة مع غرزة 4-0.
- ضع القفص الذي يحتوي على الفئران على وسادة التدفئة للسماح بالشفاء من التخدير.
- تأكد من أن الفئران دافئة وقادرة على الحركة التلقائية قبل إعادتها إلى غرفة الاحتجاز.
- الاستمرار في توفير مسكن (على سبيل المثال، البوبرينورفين 0.1 ملغم/كغ i.p.) كل 12 ساعة والحرارة التكميلية لمدة 48 ساعة بعد الجراحة.
3. مراقبة سلوك الماوس
- إزالة الغرز في اليوم 7 بعد الجراحة.
- مراقبة صحة الفأر وسلوكه يوميا خلال الأسبوع الأول بعد الجراحة. احترس من علامات الضيق مثل النطق أو وضعية الظهر المنحنية أو انخفاض الحركة. قياس وزن الجسم كل يومين.
- استخدام فون فراي monofilaments (VFFs) لقياس فرط الحساسية الميكانيكية في البطن قبل, و 2, 3 أسابيع بعد الجراحة كما هو موضح9,14.
- تطبيق VFFs من مختلف القوى المطبقة في ترتيب تصاعدي لمنطقة البطن العليا 10x كل 1-2 ق. النظر في رفع، تراجع، أو لعق البطن (استجابة الانسحاب) كاستجابة إيجابية.
- تطبيق حافز أقوى إذا لم يتم ملاحظة استجابة إيجابية، وتحفيز أضعف إذا لوحظت استجابة إيجابية. عتبة الانسحاب هي القوة التي يستجيب الماوس 50٪ من الوقت.
4. جمع وتحليل النسيجية من أنسجة البنكرياس
- التضحية الفئران تحت التخدير عن طريق خلع عنق الرحم، وتشريح البنكرياس بعناية من الأمعاء والأعضاء الأخرى.
- إصلاح البنكرياس في 10٪ paraformaldehyde لمدة 24 ساعة، تضمين في البارافين، وقطع أقسام الأنسجة من سمك 5 ميكرومتر، ووضعها على الشرائح الزجاجية لتلطيخ.
- أداء hematoxylin-eosin، وتلطيخ ثلاثي الألوان ماسون باستخدام الأساليب القياسية كما ذكرت سابقا4.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تم تحسين إجراءات ضخ القناة الصفراوية للحد من وفيات الفئران المرتبطة بهذا الإجراء10. تم إعطاء TNBS لأول مرة في حجم إجمالي قدره 35 ميكرولتر أو 50 ميكرولتر. حقن TNBS في حجم 50 ميكرولتر يمكن أن تصل إلى البنكرياس كله والحث على النمط الظاهري مرض أكثر تجانسا (الشكل 1B). بالإضافة إلى ذلك ، يمكن لحقن TNBS باستخدام حقنة الأنسولين مع إبرة 31G التحكم بشكل أفضل في سرعة التسريب بالنسبة للمحاقن العادية وأحجام الإبر. كما أسفرت TNBS المعدة حديثا المخزنة على الجليد والمستعملة في غضون ساعة واحدة من إعداد الدواء عن نتائج أفضل مقارنة ب TNBS التي تم إعدادها لفترة أطول من ساعة واحدة. ومع هذه التحسينات، تمت السيطرة على وفيات المتلقين وظلت أقل من 10 في المائة.
فقدان وزن الجسم هي واحدة من خصائص CP. الفئران في مجموعة التحكم فقدت حوالي 6٪ من وزن الجسم الأصلي خلال الأيام ال 3 الأولى بعد الجراحة، ثم تعافى تدريجيا (104.6٪ من وزن الجسم الأصلي في اليوم 21) (الشكل 1C). في المقابل، فقدت الفئران التي تتلقى TNBS في المتوسط حوالي 15٪ من وزن جسمها الأصلي خلال الأيام ال 5 الأولى واستعادت وزنها بعد ذلك (99.8٪ من وزن الجسم الأصلي في اليوم 21) (الشكل 1C). بالإضافة إلى ذلك ، مقارنة بالضوابط ، أظهرت فئران TNBS زيادة فرط الحساسية الميكانيكية البطنية في 2 و 3 أسابيع بعد حقن TNBS (الشكل 1D) ، والذي ارتبط على الأرجح بزيادة آلام البطن10.
للتأكد من أن ضخ القناة الصفراوية TNBS تسبب بشكل فعال تغييرات البنكرياس تحاكي CP الإنسان, جمعنا أنسجة البنكرياس من TNBS أو الفئران التحكم التي تعالجها السيارة في 3 أسابيع بعد الجراحة. تم تخفيض كل من الحجم والوزن لكل وزن الجسم من البنكرياس بشكل ملحوظ في الفئران TNBS مقارنة مع الضوابط (الشكل 2A, B), مما يشير إلى ضمور البنكرياس ملحوظ يتفق مع النتائج في البشر مع CP شديدة وطويلة الأجل. وبالإضافة إلى ذلك، بدا البنكرياس من الفئران السيطرة طبيعية دون تغييرات مورفولوجية واضحة، في حين أظهرت الفئران TNBS vacuolization مع فقدان هائل من الخلايا الأسينار استبدال تسلل الخلايا الدهنية والتليف (الشكل 2C). وكانت هذه النتائج متسقة مع تقارير من دراسات أخرى9،10.
الشكل 1: ضخ القناة الصفراوية TNBS لتوليد الفئران CP. (أ) التوضيح لحقن القناة الصفراوية. (ب) القناة الصفراوية بعد حقن 50 ميكرولتر من الحبر. (ج)متوسطات تغير وزن الجسم في الفئران التي تتلقى TNBS أو السيارة. (D) عتبة استجابة البطن في TNBS والفئران السيطرة في 3 أسابيع بعد التسريب. تم تحليل البيانات باستخدام برامج التحليل المتاحة (على سبيل المثال، GraphPad 8.2.1). يتم تقديم البيانات على أنها متوسط ± SEM. تم تحليل الاختلافات بين المجموعات باستخدام اختبار t للطالب ، ** p < 0.01 اعتبرت ذات دلالة إحصائية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2. توصيف CP في الفئران المعالجة TNBS. (أ) ميكروجراف البنكرياس من التحكم (CTR) والفئران TNBS. (ب)متوسط وزن البنكرياس مقسوما على وزن جسم الفأر في فئران CTR و TNBS. (ج) Hematoxylin و تلطيخ ايوسين من أقسام البنكرياس من CTR و TNBS الفئران. شريط المقياس = 100 ميكرومتر. يتم تقديم البيانات على أنها متوسط ± SEM. **، ص < 0.01 حسب اختبار الطالب t. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ضخ القناة الصفراوية من TNBS للحث على التهاب البنكرياس المزمن يشكل تحديا من الناحية الفنية في الفئران، كما يمكن أن يموت ما يصل إلى 22.5٪ من الفئران في غضون 3-4 أيام من ضخ المخدرات10. هنا، قام هذا التقرير بتنقيح الإجراء استنادا إلى دراسات سابقة وخفض معدل وفيات الفئران المبكرة إلى 10٪ <. على سبيل المثال، يمكن أن يضمن حجم الدواء المتزايد (من 35 ميكرولتر إلى 50μL) وصول الأدوية إلى البنكرياس بأكمله. استخدام حقنة الأنسولين وحجم إبرة أصغر (31G) يقلل من الأضرار المحتملة في قناة البنكرياس وتسرب الصفراء في المرارة أو البطن، والتي من المرجح أن تسبب وفاة الماوس في غضون الأيام القليلة الأولى بعد الجراحة. يمكن أن يمنع لقط طرفي القناة الصفراوية TNBS من التسرب إلى المرارة والأمعاء ، مما قد يسبب الوفاة. تكبح مقاطع الهيمو TNBS داخل البنكرياس المحقون، مما يحسن الفعالية مع تقليل الأضرار التي تلحق بالأنسجة الأخرى. بالإضافة إلى ذلك، TNBS ليست مستقرة في درجات حرارة أعلى من 0 درجة مئوية. لذلك، باستخدام TNBS الطازجة، حقق التعريفي CP نتائج مستقرة.
هذا البروتوكول يحفز بشكل فعال CP في الفئران C57BL/6J الذكور في 8-12 أسابيع من العمر ويولد نموذجا يحاكي الأعراض الرئيسية لالتهاب البنكرياس المزمن, بما في ذلك فقدان وزن الجسم, ضمور البنكرياس, تليف, وآلام البطن المحتمل. بالمقارنة مع غيرها من نماذج الماوس CP، ويستخدم على نطاق واسع نموذج TNBS لتقييم الآثار المسكنة بالإضافة إلى التهاب10،15،16. الميزة الأخرى لنموذج TNBS هي أن يتم حقن الدواء مباشرة في البنكرياس ، مما يقلل من الأضرار التي لحقت بالأعضاء الأخرى التي قد تتداخل معالدراسة 17. يمكن استخدام نموذج الماوس TNBS CP لدراسة الإمراض وكذلك خيارات العلاج جنبا إلى جنب مع نماذج التهاب البنكرياس المزمن الأخرى.
أحد قيود هذه الدراسة هو أن الفئران فقط بين 8-10 أسابيع من العمر استخدمت. منذ الفئران في أعمار مختلفة قد يكون أحجام البنكرياس الفرق، والتي تؤثر بالتالي TNBS-CP التنمية. لذلك ، ما إذا كان ينبغي إعطاء الفئران في مختلف الأعمار / الأحجام جرعة مختلفة من TNBS يحتاج إلى اختبار. ومع ذلك, هذه الدراسة يوضح الإجراءات لإجراء بنجاح ضخ قناة البنكرياس التي قد تساعد مع الدراسات التي تركز على أمراض البنكرياس.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ويعلن جميع المؤلفين أنهم لا يواجهون تضاربا في المصالح.
Acknowledgments
تم دعم هذه الدراسة من قبل وزارة شؤون المحاربين القدامى (VA-ORD BLR&.D Merit I01BX004536)، والمعهد الوطني للصحة منح # 1R01DK105183، DK120394، وDK118529 إلى HW. نشكر الدكتور هونغجو وو على مشاركة الخبرة التقنية.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10% Neutral buffered formalin v/v | Fisher Scientific | 23426796 | |
| Alcohol prep pads, sterile | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Animal Anesthesia system | VetEquip, Inc. | 901806 | |
| Buprenorphine hydrochloride, injection | Par Sterile Products, LLC | NDC 42023-179-05 | |
| Centrifuge tubes, 15 mL | Fisher Scientific | 0553859A | |
| Ethanol, absolute (200 proof), molecular biology grade | Fisher Scientific | BP2818500 | |
| Extra fine Micro Dissecting scissors 4” straight sharp | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5882 | |
| Graefe forceps 4” extra delicate tip | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5136 | |
| Heated pad | Amazon | B07HMKMBKM | |
| Hegar-Baumgartner Needle Holder 5.25” | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-7850 | |
| Insulin syringe with 31-gauge needle | BD | 324909 | |
| Iodine prep pads | Fisher Scientific | 19-027048 | |
| Isoflurane | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
| Micro clip applying forceps 5.5” | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5410 | |
| Micro clip, straight strong curved 1x6mm | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5433 | |
| Micro clip, straight, 0.75mm clip width | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5420 | |
| Picrylsulfonic acid solution, TNBS, 1M in H2O | Millipore Sigma | 92822-1ML | |
| Polypropylene Suture 4-0 | Med-Vet International | MV-8683 | |
| Polypropylene Suture 5-0 | Med-Vet International | MV-8661 | |
| Sodium chloride, 0.9% intravenous solution | VWR | 2B1322Q | |
| Surgical drape, sterile | Med-Vet International | DR1826 | |
| Tissue Cassette | Fisher Scientific | 22-272416 | |
| Von Frey filaments | Bioseb | EB2-VFF |
References
- Klauss, S., et al. Genetically induced vs. classical animal models of chronic pancreatitis: a critical comparison. The Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 32, 5778-5792 (2018).
- Liao, Y. H., et al. Histone deacetylase 2 is involved in µ-opioid receptor suppression in the spinal dorsal horn in a rat model of chronic pancreatitis pain. Molecular Medicine Reports. 17 (2), 2803-2810 (2018).
- Gui, F., et al. Trypsin activity governs increased susceptibility to pancreatitis in mice expressing human PRSS1R122H. The Journal of Clinical Investigation. 130 (1), 189-202 (2020).
- Sun, Z., et al. Adipose Stem Cell Therapy Mitigates Chronic Pancreatitis via Differentiation into Acinar-like Cells in Mice. Molecular Therapy. 25 (11), 2490-2501 (2017).
- Aghdassi, A. A., et al. Animal models for investigating chronic pancreatitis. Fibrogenesis and Tissue Repair. 4 (1), 26 (2011).
- Scoggins, C. R., et al. p53-dependent acinar cell apoptosis triggers epithelial proliferation in duct-ligated murine pancreas. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 279 (4), 827-836 (2000).
- Bradley, E. L. Pancreatic duct pressure in chronic pancreatitis. The American Journal of Surgery. 144 (3), 313-316 (1982).
- Zhao, J. B., Liao, D. H., Nissen, T. D. Animal models of pancreatitis: can it be translated to human pain study. World Journal of Gastroenterology. 19 (42), 7222-7230 (2013).
- Winston, J. H., He, Z. J., Shenoy, M., Xiao, S. Y., Pasricha, P. J. Molecular and behavioral changes in nociception in a novel rat model of chronic pancreatitis for the study of pain. Pain. 117 (1-2), 214-222 (2005).
- Cattaruzza, F., et al. Transient receptor potential ankyrin 1 mediates chronic pancreatitis pain in mice. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 304 (11), 1002-1012 (2013).
- Bai, Y., et al. Anterior insular cortex mediates hyperalgesia induced by chronic pancreatitis in rats. Molecular Brain. 12 (1), 76 (2019).
- Puig-Diví, V., et al. Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts. Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).
- Zhang, Y., et al. PAX4 Gene Transfer Induces alpha-to-beta Cell Phenotypic Conversion and Confers Therapeutic Benefits for Diabetes Treatment. Molecular Therapy. 24 (2), 251-260 (2016).
- Ceppa, E. P., et al. Serine proteases mediate inflammatory pain in acute pancreatitis. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (6), 1033-1042 (2011).
- Puig-Divi, V., et al. Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts. Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).
- Xu, G. Y., Winston, J. H., Shenoy, M., Yin, H., Pasricha, P. J. Enhanced excitability and suppression of A-type K+ current of pancreas-specific afferent neurons in a rat model of chronic pancreatitis. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 291 (3), 424-431 (2006).
- Drewes, A. M., et al. Pain in chronic pancreatitis: the role of neuropathic pain mechanisms. Gut. 57 (11), 1616-1627 (2008).
