Évitement osmotique Caenorhabditis elegans: La fonction synaptique de deux gènes, orthologues de l'homme NRXN1 Et NLGN1, Comme candidats pour l'autisme

Bonjour, je m’appelle Manuel Ruiz Rubio ici au Département de Génétique de l’Université de Cordoue en Espagne. Nous utilisons l’élégance comme un outil expérimental dans l’étude de l’autisme, profitant du système nerveux caractérisé par le monde de trois élégance. Nous étudions le mutant du nématode, efficace dans les gènes impliqués dans la synapse neurale et qui a été lié à l’autisme.

Les Rein Regans sont des molécules d’adhésion membranaire présentes dans le synaptique. La tête de C elegance contient l’amfi, un organe sensoriel du nématode avec des réponses médiatrices à différents stimuli, y compris la force osmotique. Amfi est composé de 12 neurones sensoriels bipo de hauteur et d’une action terminale INAP.

Deux de ces neurones, nommés A SH, droit et gauche, sont particulièrement importants dans la fonction sensorielle osmotique. Détection du rééquilibrage soluble dans l’eau avec une force osmotique élevée. Salut, Une méthode de vin de la rivière Nan avec le ciel pour mesurer l’évitement osmotique chez les mutants de défaut de synapse de l’ance.

Pour évaluer les implications de l’évitement neuro et neuro à haute force osmotique, nous avons rapporté la réponse différente de C contre les mutants défectueux dans les gènes neuronaux en utilisant une méthode basée sur une solution de fructose à quatre molaires. Appelez le jour de la say, préparez une solution mère de quatre molaires de fructose avec 1 % de rouge du Congo et dissolvez-la complètement à température ambiante. L’anneau annulaire d’un centimètre de diamètre sur la plaque NGM est une sous-ligne au centre du milieu solide.

En utilisant 15 microlitres de la solution de fructose rouge à quatre molaires. Laissez le fructose pénétrer dans l’acre environ cinq minutes, l’expérience doit être menée à l’aveugle. La plaque avec chaque souche à S huit doit être étiquetée par un deuxième expérimentateur.

L’AS est effectuée à l’aide de ces marques qu’elles ne sont pas demandées. Lorsque l’expérience s’est terminée environ 24 heures avant que la vente ne soit effectuée, il est nécessaire de choisir L quatre larves de chaque génotype et de les transférer sur une plaque AFL NGM contenant la bactérie e e coli et la maintenant à 20 degrés Celsius le lendemain. L’expérience doit être commencée auprès de jeunes adultes.

Mettez chaque ver de chaque souche dans le cercle de repos et suivez chaque animal jusqu’au moment de sa réponse à la barrière anti-tics. 10 animaux de chaque souche et un minimum de trois répliques d’expériences devraient être effectués pour obtenir un résultat concluant. Ceux qui évitent l’anneau rouge six fois de suite sont classés comme normaux.

Ceux qui sortent de l’anneau en moins de six tentatives sont considérés comme défectueux dans la sensibilité à l’osmose la souche doit être utilisée dans chaque SA Bristol et deux animaux sont utilisés comme contrôles positifs car ils doivent éviter la barrière annulaire. Les souches témoins réagissent en reculant lorsqu’elles trouvent une barrière osmotique composée de quatre molaires de fructose. Les bombes mutantes neurodéficientes ont un comportement similaire à ceux-ci en ce qui concerne la force d’un type.

Cependant, les mutants déficients en NEUR n’ont pas réussi à détecter cette barrière osmotique. Les forces doubles mutantes dans différents allèles neurones et nouts ont récupéré le phénotype de type sauvage répondant à la force osmotique pour l’obtention de vers descendants par interférence d’ARN nourrissant des colonies isolées de e coli HD 11 cinq souches qui ont été transformées avec le vecteur L 44 40 contenant un fragment correspondant au gène cible. Les bactéries sont isolées sur LBA ou sur une plaque avec du carbonique le lendemain.

Choisissez une colonie de bactéries et inoculez un milieu liquide LV. Continuez à grandir pendant environ sept heures en secouant à 37 degrés. Voyez la chute de cette culture sur une plaque NGM avec plafond carbonique et IPTG et wai pendant une nuit à température ambiante, permettant aux bactéries de se développer et commençant l’induction de l’expression du fragment du gène cible.

Il est nécessaire d’utiliser un contrôle positif et non négatif pour l’interférence ARN. Expériences d’alimentation. Le contrôle négatif est égal.

I HT 11 cinq souches transformées avec le vecteur TL 44 40. Le témoin positif ELI HT 11 cinq cellules transformées avec le vecteur L 44 40 contenant une séquence de 22 gènes. Le verrouillage de ce gène sont des phénotypes tremblants facilement distingués au microscope stérile.

Le premier jour. L quatre étages de PLA NGM avec des bactéries sont transférés sur une plaque avec des bactéries et le Koweït à 20 degrés Celsius pendant 12 heures. Il s’agit d’une période de jeûne.

Le lendemain, placez le jeune adulte rapide sur une plaque inoculée avec des bactéries exprimant le gène cible spécifique de l’interférence ARN. Laisser environ 48 heures à 20 degrés Celsius pour obtenir la descendance F1. Ensuite, choisissez quelques bombes adultes F1 sur une autre assiette inoculée avec les mêmes bactéries au cours des deux jours suivants.

Sélectionner et isoler les jeunes adultes de la descendance F deux Score pour les phénotypes Bristol N deux souche de type sauvage gras avec bactéries apparaissant empathie. Le vecteur L 44 40 reculait quand il allait bien. La barrière osmotique.

Bristol Et la souche de type blanc véritable nourrie avec des bactéries exprimant un fragment du gène neur de l’élégance n’a pas réussi à détecter les orteils Pour les solutions molaires. Cependant, un mutant déficient en neurone incapable de détecter la barrière osmotique a récupéré cette capacité lorsqu’il a été nourri avec des bactéries exprimant un fragment du gène nane de l’élégance marine. Dans cette vidéo, nous montrons une méthode simple qui permet d’étudier l’effet des gènes affectant la réponse d’évitement osmotique dans l’élégance marine.

Un anneau de fructose serré formel avec Congo Red est utilisé pour analyser la réponse de la bombe à la force osmotique. La neurologie chez les mutants déficients est défectueuse dans cette réponse, cependant, les mutants NU ne sont pas altérés pour détecter le stress tomo montrant une réponse similaire à celle d’une souche de type sauvage. Cette vidéo montre que des souches doubles mutantes portant différents allèles d’inactivation tive dans les gènes ing et de libération ont récupéré le phénotype de type sauvage en réponse à la force osmotique.

Ces observations ont été confirmées par l’interférence ARN, l’approche de verrouillage alimentaire. De cette façon, la souche de type sauvage a été altérée dans la reconnaissance de la barrière osmotique lorsqu’elle a été nourrie avec des bactéries exprimant la séquence suivante du gène ING. D’autre part, les mutants neurodéfectueux, qui sont incapables de détecter les quatre autres solutions de fructose, ont récupéré ce comportement lorsqu’ils ont été nourris avec des bactéries exprimant la séquence correspondante du gène NNU.

Les résultats présentés dans cette expérience indiquent que n voir et neurone pourraient être impliqués dans la connexion synaptique des neurones capteurs du nématode et aussi qu’ils interagissent les uns avec les autres d’une manière qui affecte la fonction synaptique. D’accord, au revoir et bonne chance pour vos expériences.