Constriction aortique transverse chez la souris

Cette procédure commence par l’anesthésie d’une souris, sa préparation à la chirurgie aseptique et son placement en position couchée sur un coussin chauffant. L’intubation endotrachéale est réalisée à l’aide d’un tube en PE 90, qui est ensuite relié à un ventilateur pour rongeurs. Ensuite, une thoracotomie partielle de la deuxième côte est effectuée et le sternum est rétracté.

L’aorte transverse est identifiée puis ligaturée entre l’artère carotide innominée et l’artère carotide gauche. La cage thoracique est fermée, suivie de la peau avec un motif de suture continu. Enfin, le tube endotrachéal est retiré et la souris est laissée récupérer.

Bonjour, je suis Angela Dal Meda du laboratoire du Dr Zander Wars au Département de physiologie moléculaire et de biophysique du Baylor College of Medicine. Aujourd’hui, nous allons vous montrer la procédure de constriction aortique transverse chez la souris. Nous utilisons cette procédure dans notre laboratoire pour étudier les mécanismes sous-jacents à l’hypertrophie cardiaque et au développement de l’insuffisance cardiaque.

Alors commençons. Avant de commencer une constriction aortique transverse ou une chirurgie fiscale, désinfectez le champ d’opération avec de l’alcool isopropylique à 75 %. Allumez le coussin chauffant et réglez-le à la bonne température.

Le système que nous recommandons est une pompe à eau de circulation reliée à un coussin de thérapie thermique qui est maintenu à plus ou moins un degré Celsius. Stérilisez les outils chirurgicaux dans un stérilisateur à billes chaudes avant l’opération. Pour l’intervention chirurgicale fiscale, les instruments chirurgicaux suivants sont nécessaires.

Une paire de ciseaux émoussés, deux pinces grossièrement incurvées pour trouver des pinces à angle de 45 degrés, une paire de ciseaux à ressort inclinés, un écarteur de poitrine et un porte-aiguille. Des applicateurs en coton doivent également être à portée de main en cas de saignement. Avec le champ opératoire préparé, nous pouvons procéder à l’intubation de la souris.

En préparation de l’intubation, la souris est anesthésiée dans une chambre d’induction et une tondeuse à cheveux est utilisée pour raser la fourrure de la ligne du cou jusqu’au milieu de la poitrine. Placez la souris en position couchée sur le coussin chauffant. Il est important de maintenir une température corporelle normale pendant la chirurgie pour éviter une diminution rapide de la fréquence cardiaque et une éventuelle mort subite.

Appliquez une pression sur le lit de l’ongle de la souris pour confirmer que la souris est complètement anesthésiée. Placez un élastique sur les dents de devant de l’animal pour étendre le cou À l’aide d’une pince incurvée dans une main, manipulez doucement la langue sur le côté avec l’autre main. Insérez un tube PE 90 dans la trachée.

Ensuite, connectez le tube endotrachéal à un ventilateur pour rongeurs à cycle de volume Harvard. Le ventilateur doit fonctionner à 125 à 150 respirations par minute et un volume courant de 0,1 à 0,3 millilitres selon le poids corporel de la souris, désinfecter la peau à l’intérieur du champ chirurgical avec une solution de bétadine suivie de 70 % d’alcool. Répétez cette procédure trois fois pour éviter la contamination du champ opératoire pendant l’opération, placez un champ stérile sur la souris, ne laissant que le champ opératoire exposé.

Nous sommes maintenant prêts à effectuer la ligature de l’aorte transverse lors de cette intervention chirurgicale. L’anesthésie est maintenue à 1,5 à 2 % de fluor avec 0,5 à un litre par minute, 100 % d’oxygène. Vérifiez le bon niveau d’anesthésie en appliquant une pression sur le lit de l’ongle de la souris.

Pour confirmer l’absence du réflexe du jeton. Commencez la chirurgie en pratiquant une thoracotomie partielle. Coupez le sternum en commençant par l’extrémité du crâne jusqu’au niveau de la deuxième côte.

À l’aide d’un microscope chirurgical, rétractez le sternum à l’aide d’un écarteur thoracique. Ensuite, utilisez une pince à pointe fine inclinée à 45 degrés pour séparer doucement le thymus et le tissu adipeux de l’arc aortique. Après avoir identifié l’aorte transverse, placez un petit morceau de suture en soie 6.0 entre l’artère carotide et l’artère carotide gauche.

Faites deux nœuds lâches autour de l’aorte transversale et placez un petit morceau d’une aiguille émoussée de calibre 27 et demi. Parallèle au transfert de l’aorte. Attachez rapidement le premier nœud contre l’aiguille, suivi du deuxième nœud, puis retirez rapidement l’aiguille afin d’obtenir une constriction de 0,4 millimètre de diamètre.

Une fois l’aorte transversale ligaturée, retirez l’écarteur thoracique et pincez l’écoulement du ventilateur pendant deux secondes. Pour regonfler soigneusement les poumons, fermez la cage thoracique à l’aide d’une suture proline 6.0 avec un motif de suture interrompu. Enfin, fermez la peau à l’aide d’une suture proline 6.0 avec un motif de suture continu.

Pour l’analgésie postopératoire. Injectez de la buprénorphine par voie intrapéritonéale chez la souris. S’il y a des signes de déshydratation après la chirurgie, 0,3 à un millilitre de solution saline stérile est administré par voie intrapéritonéale.

Abaissez progressivement l’anesthésie en position d’arrêt. Lorsque des signes de respiration spontanée se manifestent, retirez le tube endotrachéal, puis déplacez la souris en position couchée et laissez-la récupérer sur un coussin chauffant. Une semaine après la constriction de l’aorte transverse, la souris est réanesthésiée pour déterminer le degré de surcharge de pression induit par la lation de l’aorte transverse.

L’anesthésie et la température corporelle sont maintenues comme indiqué précédemment. Placez une sonde Doppler de 20 mégahertz sur les côtés gauche et droit du cou à un angle de 45 degrés. Pour détecter les vitesses d’écoulement de l’artère carotide, nous utilisons un processeur de signal Doppler informatisé pour afficher et stocker les signaux Doppler.

En fonction du degré de surcharge de pression requis pour le protocole expérimental, seules les souris avec un rapport d’écoulement carotidien droit ou RC sur carotidien gauche ou LC dans une certaine plage sont incluses pour une analyse plus approfondie. Par exemple, un degré modéré de surcharge de pression conduit à un rapport de cinq à huit, tandis qu’un rétrécissement plus serré entraînant une surcharge de pression sévère conduit à un rapport de huit à 10. Un animal fictif, cependant, est censé avoir un ratio d’environ un.

Le taux de survie chirurgical typique après TAC chez les souris de type sauvage est d’environ 80 à 90 % de réussite. La ligature chirurgicale de l’aorte transverse entraînera un rapport de vitesse de flux Doppler entre l’artère carotide droite et l’artère carotide gauche ou RC sur lc de cinq à 10 par rapport aux souris opérées simulées. On s’attend à ce que les souris présentant une surcharge de pression développent une hypertrophie cardiaque dans un délai d’une à deux semaines et une dilatation cardiaque après six à huit semaines, selon l’étanchéité de la constriction.

Nous venons de vous montrer comment effectuer une constriction aortique transverse chez la souris, mais l’exécution de cette procédure est importante pour maintenir une température corporelle normale et minimiser la perte de sang. Donc c’est tout. Merci d’avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.